ڪِريوِيئلزعام طور تي سيل لائنن ۽ ٻين نازڪ حياتياتي مواد جي cryogenic اسٽوريج لاءِ استعمال ٿيندا آهن، مائع نائٽروجن سان ڀريل ديوار ۾.

مائع نائٽروجن ۾ سيلز جي ڪامياب تحفظ ۾ ڪيترائي مرحلا شامل آهن. جڏهن ته بنيادي اصول هڪ سست منجمد آهي، صحيح ٽيڪنڪ جو استعمال سيل جي قسم ۽ استعمال ٿيل cryoprotectant تي منحصر آهي. اتي ڪيترائي حفاظتي خيالات ۽ بھترين طريقا آھن جن کي حساب ۾ رکڻ لاءِ جڏھن سيلز کي گھٽ درجه حرارت تي محفوظ ڪيو وڃي.

هن پوسٽ جو مقصد هڪ جائزو ڏيڻ جو مقصد آهي ته ڪيئن cryovials مائع نائٽروجن ۾ ذخيرو ٿيل آهن.

Cryovials ڇا آهن

Cryovials ننڍڙا، ڍڪيل شيشي آهن جيڪي مائع نموني کي انتهائي گهٽ درجه حرارت تي محفوظ ڪرڻ لاء ٺهيل آهن. اهي يقيني بڻائين ٿا ته cryoprotectant ۾ محفوظ ڪيل سيلز مائع نائٽروجن سان سڌي رابطي ۾ نه اچن، سيلولر ڀڃڻ جي خطري کي گهٽ ۾ گهٽ جڏهن ته اڃا تائين مائع نائٽروجن جي انتهائي ٿڌي اثر مان فائدو حاصل ڪري رهيا آهن.

شيشيون عام طور تي مقدارن ۽ ڊيزائنن جي هڪ حد ۾ موجود هونديون آهن - اهي اندروني يا ٻاهرئين ڌاڙن سان فليٽ يا گول بوتلن سان ٻڌل هوندا آهن. جراثيم ۽ غير جراثيم واري شڪل پڻ موجود آهن.

ڪير استعمال ڪري ٿوسائروئلزسيلز کي مائع نائٽروجن ۾ ذخيرو ڪرڻ لاء

NHS ۽ خانگي ليبارٽرين جو هڪ سلسلو، گڏوگڏ تحقيقي ادارا جيڪي خاص ڪنڊ بلڊ بئنڪنگ، ايپيٿيليل سيل بايولوجي، امونالوجي ۽ اسٽيم سيل بايولوجي ۾ ماهر آهن، سيلز کي cryovials استعمال ڪن ٿا.

هن طريقي سان محفوظ ڪيل سيلز ۾ بي ۽ ٽي سيلز، سي ايڇ او سيلز، هيماتوپوائيٽڪ اسٽيم ۽ پروجنيٽر سيلز، هائبرڊومس، آنٽي سيلز، ميڪروفيجز، ميسينچيمل اسٽيم ۽ پروجنيٽر سيلز، مونوسيٽس، مائيلوما، اين ڪي سيلز ۽ پلوريپوٽينٽ اسٽيم سيل شامل آهن.

مائع نائٽروجن ۾ ڪريويوئلز کي ڪيئن ذخيرو ڪجي جو جائزو

Cryopreservation ھڪڙو عمل آھي جيڪو سيلز ۽ ٻين حياتياتي تعميرات کي محفوظ ڪري ٿو انھن کي تمام گھٽ درجه حرارت تي ٿڌو ڪري. سيلن کي سال تائين مائع نائٽروجن ۾ ذخيرو ڪري سگھجي ٿو بغير سيل جي قابليت جي نقصان جي. اهو ڪم ٿيل طريقيڪار جو هڪ خاڪو آهي.

سيل جي تياري

نموني تيار ڪرڻ جو صحيح طريقو سيل جي قسم جي لحاظ کان مختلف هوندو، پر عام طور تي، سيلن کي گڏ ڪيو ويندو آهي ۽ هڪ سيل سان مالا مال پيلٽ ٺاهڻ لاء سينٽرفيوج ڪيو ويندو آهي. هن pellet پوء respended آهي supernatant ۾ cryoprotectant يا هڪ cryopreservation وچولي سان ملايو.

Cryopreservation وچولي

هي ميڊيم استعمال ڪيو ويندو آهي سيلز کي محفوظ رکڻ لاءِ گهٽ گرمي پد واري ماحول ۾ اهي انٽرا سيلولر ڪرسٽل جي ٺهڻ کي روڪڻ ۽ ان ڪري سيل جي موت جي تابع هوندا. انهن جو ڪردار سيلز ۽ بافتن لاء هڪ محفوظ، حفاظتي ماحول فراهم ڪرڻ آهي منجمد، اسٽوريج، ۽ ٿڪڻ واري عمل دوران.

هڪ ميڊيم جهڙوڪ تازو منجمد پلازما (FFP)، هيپرينائيزڊ پلازماليٽ حل يا سيرم فري، جانورن جي جزن کان آزاد حل کي cryoprotectants جهڙوڪ dimethyl sulphoxide (DMSO) يا گليسرول سان ملايو ويندو آهي.

ٻيهر مائع ٿيل نموني گولي پوليوپروپيلين cryovials ۾ aliquoted آهي جهڙوڪSuzhou Ace Biomedical Company Cryogenic Storage Vials.

اهو ضروري آهي ته ڪرائيوئلز کي وڌيڪ نه ڀريو وڃي ڇاڪاڻ ته اهو ٽڪرائڻ جو خطرو ۽ مواد جي ممڪن ڇڏڻ جو خطرو وڌائيندو (1).

ڪنٽرول ٿيل منجمد شرح

عام طور تي، سيلز جي ڪامياب cryopreservation لاء هڪ سست ڪنٽرول منجمد شرح ملازم آهي.

نمونن کي ڪرائيوجنڪ شيشي ۾ aliquot ٿيڻ کان پوءِ ، اهي گندي برف تي يا 4 ℃ ​​فرج ۾ رکيا ويندا آهن ۽ منجمد ڪرڻ جو عمل 5 منٽن اندر شروع ڪيو ويندو آهي. عام ھدايت جي طور تي، سيلز کي -1 کان -3 في منٽ جي شرح تي ٿڌو ڪيو ويندو آھي (2). اهو هڪ پروگراميبل کولر استعمال ڪندي يا -70 ° C کان -90 ° C ڪنٽرول ٿيل ريٽ فريزر ۾ رکيل موصل خاني ۾ شيشي کي رکڻ سان حاصل ڪيو ويندو آهي.

مائع نائٽروجن ڏانهن منتقلي

منجمد ڪرائيوجنڪ شيشي کي پوءِ غير معين مدت لاءِ مائع نائٽروجن ٽينڪ ۾ منتقل ڪيو ويندو آهي بشرطيڪ حرارت -135 ℃ کان گهٽ برقرار رکي.

اهي انتهائي گهٽ درجه حرارت حاصل ڪري سگھجن ٿيون مائع يا وانپ فيز نائٽروجن ۾ وسرڻ سان.

مائع يا وانپ مرحلو؟

مائع مرحلي ۾ نائيٽروجن کي ذخيرو ڪرڻ لاءِ معلوم ٿئي ٿو ته ٿڌي درجه حرارت کي مڪمل مستقل مزاجي سان برقرار رکڻ لاءِ، پر اڪثر هيٺين سببن جي ڪري سفارش نه ڪئي ويندي آهي:

• مائع نائٽروجن جي وڏي مقدار (کوٽائي) جي ضرورت آهي جيڪو هڪ امڪاني خطرو آهي. ان جي ڪري جلن يا اسفيڪسيشن هڪ حقيقي خطرو آهي.
• ڪراس آلودگي جا دستاويزي ڪيس متاثر ڪندڙ ايجنٽن جهڙوڪ اسپرگلس، هيپ بي ۽ وائرل پکڙيل مائع نائٽروجن وچولي ذريعي (2,3)
• وسرڻ دوران بوتلن ۾ مائع نائٽروجن جي لڪجڻ جو امڪان. جڏهن اسٽوريج مان هٽايو وڃي ۽ ڪمري جي حرارت تي گرم ڪيو وڃي، نائيٽروجن تيزيء سان وڌي ٿو. نتيجي طور، شيشي ٽٽجي سگھي ٿي جڏھن مائع نائيٽروجن جي ذخيري مان ھٽايو وڃي، ٻنهي اڏامندڙ ملبي ۽ مواد جي نمائش کان خطرو پيدا ٿئي ٿو (1, 4).

انهن سببن جي ڪري، الٽرا گهٽ درجه حرارت اسٽوريج تمام عام طور تي وانپ جي مرحلي ۾ نائيٽروجن آهي. جڏهن نمونن کي مائع جي مرحلي ۾ ذخيرو ڪرڻ گهرجي، خاص ڪريوفلڪس ٽيوبنگ استعمال ڪيو وڃي.

وانپ جي مرحلي ۾ هيٺيون پاسو اهو آهي ته هڪ عمودي درجه حرارت جي درجه بندي ٿي سگهي ٿي جنهن جي نتيجي ۾ -135 ℃ ۽ -190 ℃ جي وچ ۾ درجه حرارت جي وهڪري جي نتيجي ۾. اهو ضروري آهي ته مائع نائٽروجن جي سطح ۽ درجه حرارت جي تبديلين جي محتاط ۽ محتاط نگراني (5).

ڪيترائي ٺاهيندڙ سفارش ڪن ٿا ته cryovials -135 ℃ تائين اسٽوريج لاءِ يا صرف بخار واري مرحلي ۾ استعمال لاءِ مناسب آهن.

توهان جي Cryopreserved سيلز کي ٿڪايو

ٿڪڻ جو طريقو منجمد ڪلچر لاءِ دٻاءُ وارو آهي، ۽ سيلز جي بهتر عملداري، بحالي، ۽ ڪارڪردگي کي يقيني بڻائڻ لاءِ مناسب هينڊلنگ ۽ ٽيڪنڪ جي ضرورت آهي. ٺيڪ ٺاڪ پروٽوڪول خاص سيل جي قسمن تي منحصر هوندو. تنهن هوندي به، تيز پگھلڻ کي معياري سمجهيو ويندو آهي:

• سيلولر بحالي تي ڪنهن به اثر کي گھٽايو
• منجمد ميڊيا ۾ موجود محلولن جي نمائش جي وقت کي گهٽائڻ ۾ مدد ڪريو
• برف جي ٻيهر ريسٽلائزيشن ذريعي ڪنهن به نقصان کي گھٽايو

پاڻي جا غسل، مالا حمام، يا خاص خودڪار اوزار عام طور تي نمونن کي ڇڪڻ لاء استعمال ٿيندا آھن.

گهڻو ڪري 1 سيل لائين کي هڪ وقت ۾ 1-2 منٽن لاءِ پگھلايو ويندو آهي، 37 ℃ واٽر باٿ ۾ آسانيءَ سان گھمڻ سان جيستائين شيشي ۾ ٿوري برف بچي وڃي ان کان اڳ جو اهي اڳي گرم ٿيل ترقي وچولي ۾ ڌوئي وڃن.

ڪجھ سيلز جهڙوڪ ٿلهي جي جنين لاء، سست گرمي انهن جي بقا لاء ضروري آهي.

سيلز هاڻي سيل ڪلچر، سيل آئسوليشن، يا هيماٽوپوئيٽڪ اسٽيم سيلز جي صورت ۾ تيار آهن - ڊونر اسٽيم سيلز جي سالميت جي ضمانت ڏيڻ لاءِ وابستگي جو مطالعو myeloablative therapy کان اڳ.

اهو عام رواج آهي ته اڳواٽ ٿيل نمونن جا ننڍڙا اليڪوٽس کڻڻ جيڪي سيل جي ڳڻپ کي انجام ڏيڻ لاءِ استعمال ڪيا ويندا آهن ته جيئن ڪلچر ۾ پلاٽ ڪرڻ لاءِ سيل ڪنسنٽريشن جو اندازو لڳايو وڃي. توهان وري سيل جي اڪيلائي جي طريقيڪار جي نتيجن جو اندازو لڳائي سگهو ٿا ۽ سيل جي استحڪام جو اندازو لڳائي سگهو ٿا.

Cryovials جي اسٽوريج لاء بهترين طريقا

cryovials ۾ محفوظ ڪيل نمونن جي ڪامياب cryopreservation جو دارومدار پروٽوڪول ۾ موجود ڪيترن ئي عنصرن تي هوندو آهي جنهن ۾ مناسب اسٽوريج ۽ رڪارڊ رکڻ شامل آهن.

• اسٽوريج جڳهن جي وچ ۾ سيلن کي ورهايو- جيڪڏهن حجم اجازت ڏين ٿا، سيلز کي شيشي جي وچ ۾ ورهايو ۽ انهن کي الڳ هنڌن تي ذخيرو ڪريو ته جيئن سامان جي ناڪامي سبب نموني جي نقصان جي خطري کي گھٽايو وڃي.
• ڪراس آلودگي کي روڪيو- بعد ۾ استعمال ڪرڻ کان اڳ سنگل استعمال جي جراثيم کان پاڪ ڪرائيوجنڪ شيشي يا آٽو ڪلو کي چونڊيو
• توهان جي سيلز لاء مناسب سائيز شيشي استعمال ڪريو- شيشيون 1 ۽ 5mls جي وچ ۾ مقدار جي حد ۾ اچن ٿيون. ڀڃڻ جي خطري کي گهٽائڻ لاءِ شيشي کي وڌيڪ ڀرڻ کان پاسو ڪريو.
• اندروني يا بيروني ٿريڊ ٿيل ڪريوجنڪ شيشي چونڊيو- اندروني طور تي ٿريڊ ٿيل شيشيون ڪجهه يونيورسٽين طرفان حفاظتي قدمن لاءِ تجويز ڪيون ويون آهن - اهي پڻ ڀرڻ دوران آلودگي کي روڪي سگهن ٿيون يا جڏهن مائع نائٽروجن ۾ ذخيرو ٿيل آهن.
• رسي کي روڪڻ- ليڪ ۽ آلودگي کي روڪڻ لاءِ اسڪرو ڪيپ يا او-رنگز ۾ ٺهيل bi-injected سيل استعمال ڪريو.
• 2D بارڪوڊ استعمال ڪريو ۽ ليبل شيشي- سراغ جي قابليت کي يقيني بڻائڻ لاءِ، وڏين لکڻين وارن علائقن سان شيشي هر شيشي کي مناسب ليبل ڪرڻ جي قابل بڻائي ٿي. 2D بارڪوڊ اسٽوريج جي انتظام ۽ رڪارڊ رکڻ ۾ مدد ڪري سگھن ٿا. رنگين ڪوڊ ٿيل ڪيپس آسان سڃاڻپ لاءِ ڪارآمد آهن.
• مناسب اسٽوريج سار سنڀال- سيلز کي وڃائڻ کي يقيني بڻائڻ لاء، اسٽوريج جهازن کي مسلسل گرمي ۽ مائع نائٽروجن جي سطح جي نگراني ڪرڻ گهرجي. الارم کي استعمال ڪندڙن کي غلطين جي خبردار ڪرڻ لاءِ نصب ڪيو وڃي.

حفاظتي احتياط

جديد تحقيق ۾ مائع نائٽروجن عام رواج بڻجي چڪو آهي پر جيڪڏهن غلط استعمال ڪيو وڃي ته سنگين زخمن جو خطرو آهي.

مناسب پرسنل حفاظتي سامان (پي پي اي) کي پائڻ گهرجي ته جيئن ٿڌ، جلن ۽ ٻين خراب واقعن جي خطري کي گھٽائي سگهجي جڏهن مائع نائٽروجن کي هٿي وٺندي. پائڻ

• Cryogenic دستانو
• ليبارٽري کوٽ
• اثر مزاحمتي مڪمل منهن جي ڍال جيڪا ڳچيءَ کي به ڍڪي ٿي
• بند ٿيل بوٽن
• Splashproof پلاسٽڪ ايپرون

مائع نائيٽروجن ريفريجريٽرن کي چڱيءَ طرح هوادار علائقن ۾ رکڻ گهرجي ته جيئن دم ٿيڻ جي خطري کي گھٽائي سگهجي – نڪرندڙ نائيٽروجن واپرائي ٿي ۽ فضائي آڪسيجن کي خارج ڪري ٿي. وڏي مقدار جي دڪانن کي گهٽ آڪسيجن الارم سسٽم هجڻ گهرجي.

جوڑوں ۾ ڪم ڪرڻ جڏهن مائع نائٽروجن کي هٿي وٺندي مثالي آهي ۽ ان جو استعمال عام ڪم جي ڪلاڪن کان ٻاهر منع ڪيو وڃي.

Cryovials توھان جي ڪم جي فلو کي سپورٽ ڪرڻ لاءِ

Suzhou Ace Biomedical ڪمپني پراڊڪٽس جو هڪ وسيع انتخاب پيش ڪري ٿو جيڪي مختلف قسمن جي سيلن لاءِ توهان جي cryopreservation جي ضرورتن کي پورا ڪن ٿيون. پورٽ فوليو ۾ ٽيوبس جي هڪ حد شامل آهي ۽ گڏوگڏ جراثيم کان بچاء واري رينج جي هڪ حد شامل آهي.

اسان جا ڪليوئل هي آهن:

• ليب اسڪرو ڪيپ 0.5mL 1.5mL 2.0mL Cryovial Cryogenic Vials Conical Botom Cryotube with Gasket

  ● 0.5ml، 1.5ml، 2.0ml وضاحت، سکرٽ سان يا بغير سکرٽ
  ● مخروطي يا خود اسٽينڊنگ ڊيزائن، sterile يا غير sterile ٻئي موجود آهن
  ● اسڪرو ڪيپ ٽيوب ميڊيڪل گريڊ پوليپروپين مان ٺهيل آهن
  ● PP Cryotube Vials کي بار بار منجمد ۽ thawed ڪري سگهجي ٿو
  ● خارجي ڪيپ ڊيزائن نموني علاج دوران آلودگي جي امڪان کي گھٽائي سگھي ٿو.
  ● اسڪرو ڪيپ cryogenic ٽيوب استعمال لاءِ يونيورسل اسڪرو ٿريڊس
  ● ٽيوب سڀ کان وڌيڪ عام روٽرز کي پورو ڪري ٿو
  ● Cryogenic ٽيوب او-رنگ ٽيوب معياري 1-انچ ۽ 2-انچ، 48 ويل، 81 ويل، 96 ويل ۽ 100 ويل فريزر باڪس مناسب آهن
  ● 121°C تائين آٽو ڪليبل ۽ -86°C تائين منجهيل

  حصو نمبر	مواد	حجم	ڪيپرنگ	پي سي ايس/بيگ	بيگ / ڪيس
  ACT05-BL-N	PP	0.5 ايم ايل	ڪارو، پيلو، نيرو، ڳاڙهو، جامني، اڇو	500	10
  ACT15-BL-N	PP	1.5 ايم ايل	ڪارو، پيلو، نيرو، ڳاڙهو، جامني، اڇو	500	10
  ACT15-BL-NW	PP	1.5 ايم ايل	ڪارو، پيلو، نيرو، ڳاڙهو، جامني، اڇو	500	10
  ACT20-BL-N	PP	2.0 ايم ايل	ڪارو، پيلو، نيرو، ڳاڙهو، جامني، اڇو	500	10