نيوڪليڪ ايسڊ ڪڍڻ ۽ مقناطيسي مالا جو طريقو

تعارف

Nucleic Acid Extraction ڇا آهي؟

بلڪل آسان اصطلاحن ۾، نيوڪليڪ ايسڊ ڪڍڻ هڪ نموني مان آر اين اي ۽ / يا ڊي اين اي کي ختم ڪرڻ آهي ۽ تمام اضافي جيڪو ضروري ناهي. ڪڍڻ جو عمل نمونن مان نيوڪليڪ ايسڊز کي ڌار ڪري ٿو ۽ انهن کي هڪ مرڪوز ايليويٽ جي صورت ۾ پيدا ڪري ٿو، خشڪ ۽ آلودگي کان آزاد، جيڪو ڪنهن به هيٺئين وهڪرو ايپليڪيشنن کي متاثر ڪري سگهي ٿو.

نيوڪليڪ ايسڊ ڪڍڻ جون ايپليڪيشنون

صاف ڪيل نيوڪلڪ اسيد مختلف ايپليڪيشنن جي گھڻائي ۾ استعمال ڪيا ويا آهن، ڪيترن ئي مختلف صنعتن ۾ شامل آهن. صحت جي سار سنڀار شايد اهو علائقو آهي جتي اهو سڀ کان وڌيڪ استعمال ڪيو ويندو آهي، صاف ٿيل آر اين اي ۽ ڊي اين اي سان گڏ مختلف ٽيسٽ مقصدن جي ميزبان لاء گهربل.

صحت جي سار سنڀار ۾ نيوڪليڪ ايسڊ ڪڍڻ جي درخواستن ۾ شامل آهن:

- PCR ۽ qPCR واڌارو

- ايندڙ نسل جي ترتيب (NGS)

- ايمپليفڪيشن جي بنياد تي SNP جينو ٽائپنگ

- صف جي بنياد تي جينو ٽائپنگ

- پابندي Enzyme هضم

- تبديل ڪرڻ واري اينزيمس استعمال ڪندي تجزيو ڪيو (مثال طور ليگيشن ۽ ڪلوننگ)

صحت جي سار سنڀار کان ٻاهر پڻ ٻيا شعبا آهن جتي نيوڪليڪ ايسڊ ڪڍڻ استعمال ڪيو ويندو آهي، پر پيٽرنٽي ٽيسٽ، فارنڪس ۽ جينومڪس تائين محدود ناهي.

نيوڪليڪ ايسڊ ڪڍڻ جي مختصر تاريخ

ڊي اين اي ڪڍڻ1869ع ۾ فريڊريچ ميشر نالي هڪ سوئس طبيب پاران پهريون ڀيرو معلوم ٿيل آئسوليشن جو هڪ ڊگهو رستو آهي. ميشر کي اميد هئي ته زندگي جي بنيادي اصولن کي حل ڪري سيلز جي ڪيميائي ساخت کي طئي ڪري. lymphocytes سان ناڪام ٿيڻ کان پوء، هن کي رد ٿيل bandages تي pus ۾ مليا leucocytes مان DNA جي خام precipitate حاصل ڪرڻ جي قابل ٿي ويو. هن اهو ڪيو ته سيل ۾ تيزاب ۽ پوءِ الڪلي شامل ڪري سيل جي سيٽوپلازم کي ڇڏڻ لاءِ، ۽ پوءِ ڊي اين اي کي ٻين پروٽينن کان الڳ ڪرڻ لاءِ هڪ پروٽوڪول تيار ڪيو.

Miescher جي زميني تحقيق جي پٺيان، ٻيا ڪيترائي سائنسدان ڊي اين اي کي الڳ ڪرڻ ۽ صاف ڪرڻ جي ٽيڪنالاجي کي ترقي ۽ ترقي ڪرڻ تي ويا آهن. ايڊون جوزف ڪوهن، هڪ پروٽين سائنسدان، پروٽين کي صاف ڪرڻ لاء ڪيترن ئي ٽيڪنالاجيون ٺاهيا، WW2 دوران. هو رت جي پلازما جي سيرم البومين فريڪشن کي الڳ ڪرڻ جو ذميوار هو، جيڪو رت جي نالن ۾ اوسموٽڪ پريشر کي برقرار رکڻ ۾ اهم آهي. سپاهين کي زندهه رکڻ لاءِ اهو اهم هو.

1953ع ۾ فرانسس ڪريڪ، روزلنڊ فرينڪلن ۽ جيمس واٽسسن سان گڏ، ڊي اين اي جي ساخت جو اندازو لڳايو، جنهن ۾ ڏيکاريو ويو ته اهو نيوڪليڪ ايسڊ نيوڪليوٽائيڊس جي ڊگھي زنجيرن جي ٻن حصن مان ٺهيل هو. هن ڪاميابيءَ جي دريافت ميسلسن ۽ اسٽال لاءِ رستو هموار ڪيو، جيڪي ڊي اين اي کي E. Coli بيڪٽيريا کان ڌار ڪرڻ لاءِ هڪ density gradient centrifugation protocol ٺاهي سگھندا هئا، جيئن هنن 1958ع جي تجربي دوران ڊي اين اي جي نيم قدامت پسند نقل جو مظاهرو ڪيو.

نيوڪليڪ ايسڊ ڪڍڻ جي ٽيڪنالاجي

ڊي اين اي ڪڍڻ جا 4 مرحلا ڪهڙا آهن؟
سڀ ڪڍڻ جا طريقا ساڳيا بنيادي قدمن تائين پهچن ٿا.

سيل جي خرابي. هي اسٽيج، سيل ليسس جي نالي سان پڻ سڃاتو وڃي ٿو، سيل جي ڀت ۽/يا سيل جھلي کي ٽوڙڻ شامل آهي، ان لاءِ انٽرا-سيلولر سيال ڇڏڻ لاءِ جنهن ۾ دلچسپي جي نيوڪليڪ ايسڊ شامل آهن.

ناپسنديده ملبي کي هٽائڻ. ھن ۾ جھلي لپڊس، پروٽين ۽ ٻيون ناپسنديده نيوڪليڪ ايسڊ شامل آھن جيڪي ھيٺئين ايپليڪيشنن سان مداخلت ڪري سگھن ٿا.

اڪيلائي. توهان جي ٺاهيل صاف ڪيل ليسيٽ مان دلچسپي جي نيوڪلڪ اسيد کي الڳ ڪرڻ جا ڪيترائي مختلف طريقا آهن، جيڪي ٻن مکيه ڀاڱن جي وچ ۾ اچن ٿا: حل تي ٻڌل يا مضبوط حالت (اڳيون سيڪشن ڏسو).

توجهه. نيوڪليڪ ايسڊز کي ٻين سڀني آلودگين ۽ ٻوٽن کان الڳ ڪرڻ کان پوء، اهي هڪ انتهائي مرڪوز ايليويٽ ۾ پيش ڪيا ويا آهن.

ٻاھر ڪڍڻ جا ٻه قسم
نيوڪليڪ ايسڊ ڪڍڻ جا ٻه قسم آهن - حل تي ٻڌل طريقا ۽ سولڊ اسٽيٽ طريقا. حل تي ٻڌل طريقي کي ڪيميائي ڪڍڻ واري طريقي سان پڻ سڃاتو وڃي ٿو، ڇاڪاڻ ته ان ۾ ڪيميائي استعمال ڪرڻ شامل آهي سيل کي ٽوڙڻ ۽ نيوڪليڪ مواد تائين رسائي. اهو استعمال ڪري سگهجي ٿو يا ته نامياتي مرکبات جهڙوڪ فينول ۽ ڪلوروفارم، يا گهٽ نقصانڪار ۽ تنهن ڪري وڌيڪ سفارش ڪيل غير نامياتي مرکبات جهڙوڪ پروٽينين ڪي يا سليڪا جيل.

سيل کي ٽوڙڻ لاء مختلف ڪيميائي ڪڍڻ جي طريقن جا مثال شامل آهن:

- Osmotic جھلي جي ڦاٽڻ

- سيل وال جي اينزيميٽڪ هضم

- جھلي جي حل

- صابن سان

- alkali علاج سان

سولڊ اسٽيٽ ٽيڪنڪ، جنهن کي ميخانياتي طريقن جي نالي سان پڻ سڃاتو وڃي ٿو، ان ۾ استحصال شامل آهي ته ڪيئن ڊي اين اي هڪ مضبوط ذيلي ذخيري سان رابطو ڪري ٿو. هڪ مالا يا ماليڪيول چونڊڻ سان جنهن تي ڊي اين اي پابند هوندو پر تجزيه نگار نه ڪندو، اهو ممڪن آهي ته ٻنهي کي الڳ ڪرڻ. سليڪا ۽ مقناطيسي موتي استعمال ڪرڻ سميت سولڊ فيز ڪڍڻ واري ٽيڪنالاجي جا مثال.

مقناطيسي مالا ڪڍڻ جي وضاحت ڪئي وئي

مقناطيسي مالا ڪڍڻ جو طريقو
مقناطيسي موتي استعمال ڪرڻ جي صلاحيت کي پهريون ڀيرو آمريڪي پيٽنٽ ۾ تسليم ڪيو ويو جيڪو ٽريور هاڪنز طرفان داخل ڪيو ويو، وائيٽ هيڊ انسٽيٽيوٽ ريسرچ اداري لاءِ. هن پيٽنٽ تسليم ڪيو ته اهو ممڪن آهي ته جينياتي مواد ڪڍڻ ممڪن آهي انهن کي پابند ڪرڻ سان هڪ مضبوط سپورٽ ڪيريئر، جيڪو هڪ مقناطيسي مالا ٿي سگهي ٿو. اصول اهو آهي ته توهان هڪ انتهائي ڪم ڪندڙ مقناطيسي مالا استعمال ڪندا آهيو جنهن تي جينياتي مواد جڙيل هوندو، جنهن کي پوءِ مقناطيسي قوت لاڳو ڪري نموني کي رکيل برتن جي ٻاهرئين پاسي کان سپرنيٽنٽ کان ڌار ڪري سگهجي ٿو.

مقناطيسي مالا ڪڍڻ جو استعمال ڇو؟
مقناطيسي مالا ڪڍڻ واري ٽيڪنالاجي تيزي سان پکڙجي رهي آهي، امڪاني طور تي اهو تيز ۽ ڪارائتو ڪڍڻ جي طريقيڪار لاءِ رکي ٿو. تازن وقتن ۾، مناسب بفر سسٽم سان انتهائي فعال مقناطيسي موتي جي ترقي ڪئي وئي آهي، جنهن کي ممڪن ڪيو آهي ته نيوڪليڪ ايسڊ ڪڍڻ جي خودڪار طريقي سان ۽ هڪ ڪم فلو جيڪو تمام وسيلا روشني ۽ قيمتي موثر آهي. انهي سان گڏ، مقناطيسي مالا ڪڍڻ جي طريقن ۾ سينٽرفيوگريشن جا مرحلا شامل نه هوندا آهن جيڪي شيئر قوتن جو سبب بڻجن ٿا جيڪي ڊي اين اي جا ڊگھا ٽڪرا ٽوڙيندا آهن. ان جو مطلب اهو آهي ته ڊي اين اي جا ڊگها حصا برقرار آهن، جيڪو جينومڪس ٽيسٽ ۾ اهم آهي.