Для успешных реакций амплификации необходимо, чтобы индивидуальные компоненты реакции присутствовали в правильной концентрации в каждом препарате. Кроме того, важно, чтобы загрязнение не было.
Особенно, когда необходимо настроить много реакций, было установлено для подготовки так называемой мастер-смеси вместо того, чтобы пипетировать каждый реагент отдельно в каждый сосуд. Предварительно сконфигурированные смеси имеются коммерчески, в которых добавляются только специфичные для образца компоненты (праймер) и вода. В качестве альтернативы, мастер -микс может быть подготовлен самостоятельно. В обоих вариантах смесь распределяется по каждому сосуду ПЦР без шаблона, а отдельный образец ДНК добавляется отдельно в конце.
Использование основного микса имеет несколько преимуществ: во -первых, количество отдельных шагов пипетирования уменьшается. Таким образом, как риск ошибок пользователей во время пипетирования, так и риск загрязнения сводится к минимуму и, конечно, сохранено время. В принципе, точность пипетирования также выше, поскольку большие объемы дозируются. Это легко понять при проверке технических данных пипетков: чем меньше дозировка, тем выше может быть отклонения. Тот факт, что все препараты поступают из одного и того же судна, оказывает положительное влияние на однородность (если хорошо смешан). Это также улучшает воспроизводимость экспериментов.
При подготовке основного микса следует добавить не менее 10 % дополнительного объема (например, если требуется 10 подготовков, рассчитайте на основе 11), чтобы даже последний сосуд заполнился должным образом. Таким образом, (незначительные) пипетирующие неточности и влияние потери образца при дозировке, содержащих моющие средства, могут быть компенсированы. Моющие средства содержатся в растворах ферментов, таких как полимеразы и основные смеси, вызывая образование пены и остатки на внутренней поверхности нормальнойСоветы по пипетке.
В зависимости от применения и типа жидкости, которая должна быть распределена, следует выбрать правильную методику пипетирования (1) и выбрано соответствующее оборудование. Для решений, содержащих моющие средства, рекомендуется в качестве альтернативы пипетки с воздушной пушиной системой прямого смещения или так называемых кончиков пипетки с низким содержанием удержания. ЭффектAce Pipette Tipоснован на особенно гидрофобной поверхности. Жидкости, содержащие моющие средства, не оставляют остаточную пленку внутри и снаружи, так что потерю решения может быть сведена к минимуму.
Помимо точного дозирования всех компонентов, также важно, чтобы не было загрязнения препаратов. Недостаточно использовать расходные материалы с высокой чистотой, потому что процесс пипетки в пипетке с воздушной подушкой может производить аэрозоли, которые остаются в пипетке. ДНК, которая может быть содержатся в аэрозоле, может быть перенесена из одного образца в другой на следующем этапе пипетирования и, таким образом, приводит к загрязнению. Упомянутые выше системы прямого смещения также могут минимизировать этот риск. Для пипетков с воздушной пушиной имеет смысл использовать кончики фильтров для защиты пипетка, сохраняя брызги, аэрозоли и биомолекулы.
Время публикации: декабрь-06-2022