Для успешных реакций амплификации необходимо, чтобы отдельные компоненты реакции присутствовали в правильной концентрации в каждом препарате. Кроме того, важно, чтобы не произошло никакого загрязнения.
В частности, когда необходимо организовать множество реакций, принято готовить так называемую мастер-микс вместо того, чтобы пипетировать каждый реагент отдельно в каждый сосуд. Коммерчески доступны предварительно подготовленные смеси, в которые добавляются только компоненты, предназначенные для конкретного образца (праймер) и вода. Альтернативно, мастер-микс можно приготовить самостоятельно. В обоих вариантах смесь распределяется по каждому сосуду для ПЦР без матрицы, а в конце отдельно добавляется индивидуальный образец ДНК.
Использование мастер-микса имеет ряд преимуществ: во-первых, сокращается количество отдельных этапов пипетирования. Таким образом, сводится к минимуму как риск ошибок пользователя во время дозирования, так и риск загрязнения, и, конечно же, экономится время. В принципе, точность пипетирования также выше, поскольку дозируются большие объемы. Это легко понять при проверке технических данных пипеток: чем меньше дозируемый объем, тем выше могут быть отклонения. Тот факт, что все препараты происходят из одного и того же сосуда, положительно влияет на однородность (если хорошо перемешать). Это также улучшает воспроизводимость экспериментов.
При приготовлении мастер-микса следует добавить как минимум 10 % дополнительного объема (например, если требуется 10 приготовлений, рассчитывайте на основе 11), чтобы даже последний сосуд был заполнен должным образом. Таким образом можно компенсировать (небольшие) неточности пипетирования и эффект потери образца при дозировании растворов, содержащих детергенты. Моющие средства содержатся в растворах ферментов, таких как полимеразы и мастер-миксы, вызывая образование пены и остатков на внутренней поверхности обычных стиральных машин.наконечники для пипеток.
В зависимости от применения и типа дозируемой жидкости следует выбрать правильную технику пипетирования (1) и соответствующее оборудование. Для растворов, содержащих детергенты, рекомендуется использовать систему прямого вытеснения или наконечники с так называемым «низким удерживанием» в качестве альтернативы пипеткам с воздушной подушкой. ЭффектНаконечник пипетки ACEимеет особо гидрофобную поверхность. Жидкости, содержащие моющие средства, не оставляют остаточной пленки внутри и снаружи, поэтому потери раствора можно свести к минимуму.
Помимо точного дозирования всех компонентов, важно также, чтобы не произошло загрязнения препаратов. Недостаточно использовать расходные материалы высокой чистоты, поскольку в процессе пипетирования в пипетке с воздушной подушкой могут образовываться аэрозоли, которые остаются в пипетке. ДНК, которая может содержаться в аэрозоле, может быть перенесена из одного образца в другой на следующем этапе пипетирования и, таким образом, привести к загрязнению. Упомянутые выше системы прямого вытеснения также могут минимизировать этот риск. Для пипеток с воздушной подушкой имеет смысл использовать наконечники с фильтром для защиты конуса дозатора путем удержания брызг, аэрозолей и биомолекул.
Время публикации: 06 декабря 2022 г.