Криовиалыобычно используются для криогенного хранения клеточных линий и других критических биологических материалов, у Dewars, заполненных жидким азотом.

Существует несколько стадий, участвующих в успешном сохранении клеток в жидком азоте. Хотя основным принципом является медленное замораживание, точная используемая техника зависит от используемого типа ячейки и криопротектора. Есть несколько соображений безопасности и лучших практик, которые следует учитывать при хранении клеток при таких низких температурах.

Этот пост направлен на то, чтобы дать обзор того, как криовиалы хранятся в жидком азоте.

Что такое криовиалы

Криовиалы представляют собой небольшие, ограниченные флаконы, предназначенные для хранения образцов жидкости при чрезвычайно низких температурах. Они гарантируют, что клетки, сохранившиеся в криопротекторе, не входят в прямой контакт с жидким азотом, сводя к минимуму риск переломов клеток, в то же время получая выгоду от экстремального охлаждающего эффекта жидкого азота.

Флаконы обычно доступны в диапазоне объемов и конструкций - они могут быть внутренне или снаружи заправлены плоскими или закругленными днами. Стерильные и нестерильные форматы также доступны.

Кто используетКировиалыхранить клетки в жидком азоте

Ряд NHS и частных лабораторий, а также исследовательские институты, специализирующиеся на банковской помощи пуповинной крови, биологии эпителиальных клеток, иммунологии и биологии стволовых клеток, используют криовиалы для криоконсервных клеток.

Клетки, сохранившиеся таким образом, включают В и Т -клетки, клетки ЧО, гематопоэтические стволовые и клетки -предшественники, гибридомы, кишечные клетки, макрофаги, мезенхимальные стволовые и клетки -предшественники, моноциты, миелому, НДК -клетки и плюрипотентные стволовые клетки.

Обзор того, как хранить криовиалы в жидком азоте

Криоконсервация - это процесс, который сохраняет клетки и другие биологические конструкции, охлаждая их до очень низких температур. Клетки могут храниться в жидком азоте в течение многих лет без потери жизнеспособности клеток. Это очередь используемых процедур.

Приготовление клеток

Точный метод подготовки образцов будет варьироваться в зависимости от типа ячейки, но в целом клетки собираются и центрифугируют для развития богатого клетками осадки. Этот осадок затем ресуспендируется в супернатанте, смешанном с криопротектором или средой криоконсервации.

Среда криоконсервации

Эта среда используется для сохранения клеток в низкотемпературных средах, которыми они будут подвергаться путем ингибирования образования внутри и внеклеточных кристаллов и, следовательно, гибели клеток. Их роль состоит в том, чтобы обеспечить безопасную, защитную среду для клеток и тканей во время замораживания, хранения и оттаивания процессов.

Среда, такая как свежая замороженная плазма (FFP), гипаринизированный раствор плазмалита или бессывороточные, не содержащие компоненты, смешивают с криопротекторами, такими как диметилсульфоксид (ДМСО) или глицерин.

Повторный осадок образца аликвотируется в полипропиленовые криовиалы, такие какSuzhou Ace Biomedical Company криогенные флаконы хранения.

Важно не переполнять криовиалы, так как это увеличит риск растрескивания и возможное высвобождение содержимого (1).

Контролируемая скорость заморозки

В целом, медленно контролируемая скорость замораживания используется для успешной криоконсервации клеток.

После того, как образцы аликволизируются в криогенные флаконы, они помещаются на влажный лед или в 4 ℃ холодильник, а процедура замораживания запускается в течение 5 минут. В качестве общего руководства клетки охлаждаются со скоростью от -1 до -3 в минуту (2). Это достигается с использованием программируемого охладителя или путем размещения флаконов в изолированную коробку, размещенную в морозильной камере с -70 ° C до -90 ° C.

Переносить в жидкий азот

Замороженные криогенные флаконы затем переносятся в жидкий азотный резервуар в течение неопределенных периодов, обеспечивающих температуру менее -135 ℃.

Эти ультра-низкие температуры могут быть получены путем погружения в азот жидкости или пара.

Жидкая или пара фаза?

Известно, что хранение в жидкой фазе поддерживает холодную температуру с абсолютной консистенцией, но часто не рекомендуется по следующим причинам:

• Необходимость больших объемов (глубины) жидкого азота, которая представляет собой потенциальную опасность. Ожоги или удушение из -за этого является реальным риском.
• Документированные случаи перекрестного загрязнения инфекционными агентами, такими как Aspergillus, HEP B и вирусное распространение через жидкую азотную среду (2,3)
• Потенциал для жидкого азота протечь в флаконы во время погружения. При удалении с хранения и нагреты до комнатной температуры, азот быстро расширяется. Следовательно, флакон может разбить при удалении из хранения жидкого азота, создавая опасность как от летящего обломка, так и от воздействия содержимого (1, 4).

По этим причинам хранение температуры ультра-низкой температуры чаще всего находится в азоте пара. Когда образцы должны храниться в жидкой фазе, следует использовать специализированную криофлексную трубку.

Недостатком паровской фазы является то, что вертикальный градиент температуры может возникать, что приводит к колебаниям температуры между -135 ℃ до -190 ℃. Это требует тщательного и прилежного мониторинга уровней жидкого азота и изменений температуры (5).

Многие производители рекомендуют, чтобы криовиалы подходили для хранения до -135 ℃ или для использования только в фазе пара.

Оттаивая ваши криоконсервированные клетки

Процедура оттаивания является стрессовой для замороженной культуры, и необходима правильная обработка и техника для обеспечения оптимальной жизнеспособности, восстановления и функциональности клеток. Точные протоколы оттаивания будут зависеть от конкретных типов клеток. Тем не менее, быстрое оттаивание считается стандартным для:

• Уменьшить любое влияние на восстановление клеток
• Помогите сократить время воздействия на растворенные вещества, присутствующие в морозивном СМИ
• Минимизировать любой ущерб от ece recrystallisation

Водяные ванны, ванны с бусинками или специализированные автоматизированные инструменты обычно используются для оттаивания образцов.

Чаще всего 1 клеточная линия оттаивается за раз в течение 1-2 минут, мягко кружась в 37-й водяной бане, пока в флаконе останется лишь небольшой кусочек льда, прежде чем они промывают в предварительно сгребной среде роста.

Для некоторых клеток, таких как эмбрионы млекопитающих, медленное потепление необходимо для их выживания.

В настоящее время клетки готовы к клеточной культуре, выделению клеток или в случае гематопоэтических стволовых клеток - исследования жизнеспособности, чтобы гарантировать целостность донорских стволовых клеток перед миелобляционной терапией.

Нормальная практика - принимать небольшие аликвоты предварительно промытого образца, используемого для выполнения количества клеток для определения концентраций клеток для покрытия в культуре. Затем вы можете оценить результаты процедур выделения клеток и определить жизнеспособность клеток.

Лучшие практики для хранения криовиалов

Успешная криоконсервация образцов, хранящихся в криовиалах, зависит от многих элементов в протоколе, включая надлежащее хранение и ведение записей.

• Разделительные ячейки между местами хранения- Если разрешают объемы, разделить ячейки между флаконами и хранить их в отдельных местах, чтобы снизить риск потери образца из -за сбоев оборудования.
• Предотвратить перекрестное загрязнение-Выберите одноразовые стерильные криогенные флаконы или автоклав перед последующим использованием
• Используйте флаконы соответствующего размера для ваших клеток- Флаконы бывают в диапазоне объемов от 1 до 5 мл. Избегайте переполнения флаконов, чтобы снизить риск растрескивания.
• Выберите внутренние или внешне резьбовые криогенные флаконы- Внутренние флаконы рекомендуются некоторыми университетами для мер безопасности - они также могут предотвратить загрязнение во время заполнения или при хранении в жидком азоте.
• Предотвратить утечку-Используйте двух впрыскиваемые уплотнения, отлитые в винтовую крышку или уплотнительные кольца, чтобы предотвратить утечку и загрязнение.
• Используйте 2D штрих -коды и флаконы маркировки- Чтобы обеспечить отслеживание, флаконы с большими зонами письма позволяют адекватному маркированию каждого флакона. 2D штрих -коды могут помочь с управлением хранением и ведением записей. Цветовые колпачки полезны для более легкой идентификации.
• Адекватное обслуживание хранения- Чтобы гарантировать, что клетки не теряются, сосуды хранения должны постоянно контролировать уровень температуры и жидкости азота. Тревоги должны быть установлены, чтобы предупредить пользователей об ошибках.

Меры предосторожности

Жидкий азот стал обычной практикой в ​​современных исследованиях, но несет риск серьезных травм, если он используется неправильно.

Надлежащее оборудование для личной защиты (СИЗ) следует носить, чтобы минимизировать риск обморожения, ожогов и других неблагоприятных инцидентов при обработке жидкого азота. Носить

• Криогенные перчатки
• Лабораторное пальто
• Устойчивый к воздействию полного лица, который также покрывает шею
• Туфли с закрытыми ногами
• Спрыссохим пластиковой фартук

Жидкие азотные холодильники должны быть размещены в хорошо проветриваемых областях, чтобы минимизировать риск асфиксии-избежав азота испаряется и вытесняет атмосферный кислород. Большой объемные запасы должны иметь системы с низким содержанием кислорода.

Работа в парах при обработке жидкого азота является идеальной, а его использование вне обычного рабочего времени должно быть запрещено.

Криовиалы для поддержки вашего рабочего процесса

Biomedical Company Suzhou Ace предлагает широкий выбор продуктов, которые удовлетворяют ваши потребности в криоконсервации для различных типов ячеек. Портфель включает в себя ряд труб, а также ряд стерильных криовидов.

Наши криовиалы:

• Лабораторная винтовая крышка 0,5 мл 1,5 мл 2,0 мл криовиальных криовиальных криогенных флаконов. Коническое дно криотруб с прокладкой

  ● 0,5 мл, 1,5 мл, 2,0 мл спецификации, с юбкой или без юбки
  ● Конический или самостоятельный дизайн, стерильный или нестерильный
  ● Трубки винтовой крышки изготовлены из полипропилена медицинского качества
  ● ПП криотрубные флаконы могут быть неоднократно замороженными и оттаивающими
  ● Конструкция внешней крышки может снизить вероятность загрязнения во время обработки выборки.
  ● Винт -крышка криогенные трубки Универсальные винтовые резьбы для использования
  ● Пробирки подходят для самых распространенных роторов
  ● Криогенные трубки уплотнительного кольца соответствуют стандартным 1-дюймовым и 2-дюймовым, 48well, 81well ， 96well и 100well в морозильных коробках
  ● Автокланируется до 121 ° C и замораживаемой до -86 ° C

  Часть №	Материал	ОБЪЕМ	КапляЦВЕТ	ПК/СУМКА	Сумки/корпус
  Act05-bl-n	PP	0,5 мл	Черный, желтый, синий, красный, фиолетовый, белый	500	10
  Act15-bl-n	PP	1,5 мл	Черный, желтый, синий, красный, фиолетовый, белый	500	10
  ACT15-BL-NW	PP	1,5 мл	Черный, желтый, синий, красный, фиолетовый, белый	500	10
  Act20-bl-n	PP	2,0 мл	Черный, желтый, синий, красный, фиолетовый, белый	500	10