Стандартизация процессов включает их оптимизацию и последующее создание и гармонизация, что позволяет долгосрочная оптимальная производительность-независимо от пользователя. Стандартизация обеспечивает высококачественные результаты, а также их воспроизводимость и сопоставимость.
Целью (классической) ПЦР является генерация надежного и воспроизводимого результата. Для определенных приложений доходПЦР продукттакже актуально. Для этих реакций необходимо соблюдать осторожность, чтобы гарантировать, что образцы не подвергаются скомпрометированию и что рабочий процесс ПЦР остается стабильным. В частности, это приводит к минимизации введения загрязнения, которые могут привести к ложноположительным или ложным отрицательным результатам или даже ингибировать реакцию ПЦР. Кроме того, условия реакции должны быть максимально идентичными для каждого отдельного образца в рамках прогона, а также переносится в последующие реакции (одного и того же метода). Это относится к составу реакций, а также к типу контроля температуры в циклере. Конечно, ошибки пользователей следует избегать как можно больше.
Ниже мы продемонстрируем проблемы, которые сталкиваются во время подготовки и на протяжении всего управления ПЦР - и подходы к решениям, которые существуют в отношении инструментов и расходных материалов, используемых для стандартизации рабочих процессов ПЦР.
Подготовка реакции
Распределение компонентов реакции в ПЦР-сосуды или пластины, соответственно, включает в себя множество проблем, которые необходимо преодолеть:
Условия реакции
Точное и точное дозирование отдельных компонентов необходимо при стремлении к наиболее идентичным условиям реакции. В дополнение к хорошей технике пипетирования, выбор подходящего инструмента имеет решающее значение. ПЦР Master Mixs часто содержат вещества, которые увеличивают вязкость или генерируют пену. Во время процесса пипетирования они приводят к существенному смачиваниюСоветы по пипетке, таким образом, снижает точность пипетирования. Использование систем прямого дозирования или альтернативных кончиков пипетки, которые менее подвержены смачиванию, может повысить точность и точность процесса пипетирования.
Загрязнения
Во время процесса дозирования генерируются аэрозоли, которые, если разрешено достигать внутренней части пипетки, потенциально может загрязнять другой образец на следующем этапе пипетирования. Это можно предотвратить, используя кончики фильтра или системы прямого смещения.
Расходные материалы, такие каксоветы, сосуды и пластины, которые используются в рабочем процессе ПЦР, не должны содержать вещества, которые ставят под угрозу образец или фальсифицируют результат. К ним относятся ДНК, ДНКазы, РНКазы и ингибиторы ПЦР, а также компоненты, которые могут потенциально выщелачивать из материала во время реакции - вещества, известные как выщелачиваемые.
Пользовательская ошибка
Чем больше образцов обрабатывается, тем выше риск ошибки. Может легко произойти, что образец переписывается в неправильный сосуд или неправильный колодец. Этот риск может быть значительно снижен путем легко заметной маркировки скважин. Благодаря автоматизации этапов дозирования «человеческий фактор», то есть ошибки и связанные с пользователем вариации, сведены к минимуму, что увеличивает воспроизводимость, особенно в случае небольших объемов реакции. Это требует, чтобы пластины достаточной стабильности размеров были использованы на рабочей станции. Прикрепленные штрих-коды обеспечивают дополнительную машинную читаемость, которая упрощает отслеживание образцов на протяжении всего процесса.
Программирование термоциклера
Программирование прибора может оказаться трудоемким, а также склонным к ошибкам. Различные функции Термоциклера ПЦР работают вместе, чтобы упростить этот шаг процесса и, что наиболее важно, чтобы сделать его безопасным:
Легкая работа и хорошее пользовательское руководство являются основой эффективного программирования. Основываясь на этом основании, защищенная паролем администрация пользователей предотвратит изменение собственных программ другими пользователями. Если используются несколько велосипедов (одного и того же типа), это полезно, если программа может быть передана непосредственно из одного инструмента в другой через USB или подключение. Компьютерное программное обеспечение обеспечивает центральное и безопасное администрирование программ, прав пользователей и документов на компьютере.
ПЦР бег
Во время прогона ДНК амплифицируется в реакционном сосуде, где каждый образец должен быть подвергнут идентичным, последовательным условиям реакции. Следующие аспекты актуальны для процесса:
Контроль температуры
Отличная точность контроля температуры и однородности блока цикла является основой для ровного кондиционирования температуры всех образцов. Высокое качество элементов отопления и охлаждения (элементы Пельтье), а также способ, которым они связаны с блоком, являются решающими факторами, которые будут определять риск расхождений температуры, известного как «эффект края»
Испарение
Концентрации индивидуальных компонентов реакции не должны меняться в течение реакции из -за испарения. В противном случае, возможно, очень малоПЦР продуктможет быть сгенерирован, или вообще нет. Поэтому крайне важно минимизировать испарение, обеспечивая безопасную печать. В этом случае нагретая крышка термоциклера и уплотнение сосуда работают рукой в руке. Различные варианты уплотнения доступны дляПЦР -пластины (ссылка: уплотнявая статья), в результате чего лучшее уплотнение достигается за счет теплового уплотнения. Другие закрытия также могут быть подходящими, если контактное давление крышки цикла может быть отрегулировано на выбранное уплотнение.
Стандартизация процесса существует для обеспечения точных и воспроизводимых результатов в долгосрочной перспективе. Это включает в себя регулярное обслуживание оборудования, чтобы убедиться, что оно всегда в хорошем рабочем состоянии. Все расходные материалы должны иметь неизменно высокое качество для всех произведенных лотов, и их надежная доступность должна быть гарантирована.
Время сообщения: 29-29 ноября