Как дозировать небольшие объемы с помощью ручных пипеток

Поскольку все больше внимания уделяется сокращению реагентов и затрат, меньшие объемы пользуются большим спросом, например, для подготовки ПЦР Mastermix или ферментных реакций. Но пипетирование малых объемов от 0,2 до 5 мкл ставит новые задачи для точности и правильности пипетирования. Следующие пункты являются существенными:

1. Размер пипетки и наконечника: Всегда выбирайте пипетку с наименьшим возможным номинальным объемом и наименьшим наконечником, чтобы воздушная подушка была как можно меньше. При пипетировании 1 мкл, например, выбирайте пипетку объемом 0,25–2,5 мкл и соответствующий наконечник, а не пипетку объемом 1–10 мкл.
2. Калибровка и обслуживание: важно, чтобы ваши пипетки были правильно откалиброваны и обслуживались. Небольшие корректировки и поломки деталей пипетки приводят к значительному увеличению систематических и случайных значений ошибок. Калибровку в соответствии с ISO 8655 необходимо проводить один раз в год.
3. Пипетки с положительным вытеснением: Проверьте, есть ли в вашей лаборатории пипетка с положительным вытеснением с малым диапазоном объема. В целом, использование этого типа пипетки приводит к лучшему результату пипетирования с точки зрения точности и воспроизводимости, чем при использовании классических пипеток с воздушной подушкой.
4. Попробуйте использовать большие объемы: Вы можете рассмотреть возможность разбавления образца, чтобы пипетировать большие объемы с тем же количеством в конечной реакции. Это может уменьшить ошибки пипетирования при очень малых объемах образца.

В дополнение к хорошему инструменту, исследователь должен иметь очень хорошую технику пипетирования. Обратите особое внимание на следующие шаги:

1. Присоединение наконечника: Не заклинивайте пипетку на наконечнике, так как это может повредить тонкий кончик наконечника, вызвать перенаправление потока жидкости или повредить отверстие. При присоединении наконечника прикладывайте лишь легкое давление и используйте пипетку с подпружиненным конусом наконечника.
2. Удерживание пипетки: Не держите пипетку в руке, ожидая центрифуги, циклера и т. д. Внутренняя часть пипетки нагреется и приведет к расширению воздушной подушки, что приведет к отклонениям от установленного объема при пипетировании.
3. Предварительное смачивание: Увлажнение воздуха внутри наконечника и пипетки подготавливает наконечник к образцу и предотвращает испарение при аспирации переносимого объема.
4. Вертикальная аспирация: это очень важно при работе с небольшими объемами, чтобы избежать капиллярного эффекта, возникающего, когда пипетку держат под углом.
5. Глубина погружения: Погружайте наконечник как можно меньше, чтобы предотвратить попадание жидкости в наконечник из-за капиллярного эффекта. Правило большого пальца: чем меньше наконечник и объем, тем меньше глубина погружения. Мы рекомендуем максимум 2 мм при пипетировании малых объемов.
6. Дозирование под углом 45°: Оптимальный выток жидкости гарантируется, если держать пипетку под углом 45°.
7. Контакт со стенкой сосуда или поверхностью жидкости: Небольшие объемы можно правильно дозировать только тогда, когда наконечник прижат к стенке сосуда или погружен в жидкость. Даже последняя капля с наконечника может быть дозирована точно.
8. Продувка: Продувка обязательна после дозирования малых объемов, чтобы выдавить даже последнюю каплю жидкости, имеющуюся в наконечнике. Продувку также следует производить у стенки сосуда. Будьте осторожны, чтобы не внести пузырьки воздуха в образец при выполнении продувки у поверхности жидкости.