Как дозировать небольшие объемы с помощью ручных пипеток

Поскольку все больше внимания уделяется сокращению реагентов и затрат, большим спросом пользуются меньшие объемы, например, для приготовления ПЦР Mastermix или ферментативных реакций. Но пипетирование небольших объемов от 0,2 до 5 мкл ставит новые задачи в отношении точности и точности пипетирования. Существенны следующие моменты:

1. Размер пипетки и наконечника. Всегда выбирайте пипетку с наименьшим номинальным объемом и наименьшим наконечником, чтобы воздушная подушка была как можно меньше. Например, при пипетировании 1 мкл выберите пипетку на 0,25–2,5 мкл и соответствующий наконечник, а не пипетку на 1–10 мкл.
2. Калибровка и обслуживание. Очень важно, чтобы ваши пипетки были правильно откалиброваны и обслуживались. Небольшие регулировки и сломанные детали пипетки приводят к значительному увеличению значений систематических и случайных ошибок. Калибровка согласно ISO 8655 должна выполняться один раз в год.
3. Пипетки прямого вытеснения: проверьте, есть ли в вашей лаборатории пипетки прямого вытеснения с низким диапазоном объема. В целом, использование этого типа пипеток приводит к лучшим результатам дозирования с точки зрения точности и аккуратности, чем при использовании классических пипеток с воздушной подушкой.
4. Попробуйте использовать большие объемы: вы можете рассмотреть возможность разбавления образца, чтобы пипетировать большие объемы с тем же количеством в конечной реакции. Это может уменьшить количество ошибок при пипетировании при очень малых объемах проб.

Помимо хорошего инструмента, у исследователя должна быть очень хорошая техника пипетирования. Особое внимание обратите на следующие шаги:

1. Крепление наконечника: Не прижимайте пипетку к наконечнику, так как это может повредить тонкий конец наконечника, привести к перенаправлению луча жидкости или повреждению отверстия. При установке наконечника применяйте только легкое давление и используйте пипетку с подпружиненным конусом наконечника.
2. Как держать пипетку: Не держите пипетку в руке во время ожидания центрифуги, циклера и т. д. Внутренняя часть пипетки нагревается, что приводит к расширению воздушной подушки, что приводит к отклонениям от заданного объема при пипетировании.
3. Предварительное смачивание: увлажнение воздуха внутри наконечника и пипетки подготавливает наконечник для образца и позволяет избежать испарения при аспирации переносимого объема.
4. Вертикальная аспирация: это очень важно при работе с небольшими объемами, чтобы избежать капиллярного эффекта, возникающего, когда пипетку держат под углом.
5. Глубина погружения: Погружайте наконечник как можно меньше, чтобы предотвратить попадание жидкости в наконечник из-за капиллярного эффекта. Эмпирическое правило: чем меньше наконечник и объем, тем меньше глубина погружения. Мы рекомендуем максимум 2 мм при пипетировании небольших объемов.
6. Дозирование под углом 45°: Оптимальное вытекание жидкости гарантируется, когда пипетка удерживается под углом 45°.
7. Контакт со стенками сосуда или поверхностью жидкости: правильное дозирование небольших объемов возможно только в том случае, если наконечник прижат к стенке сосуда или погружен в жидкость. Даже последняя капля из наконечника может быть дозирована точно.
8. Продувка: Продувка обязательна после дозирования небольших объемов, чтобы выпустить даже последнюю каплю жидкости, присутствующую в наконечнике. Продувку также следует производить у стенки сосуда. Будьте осторожны, чтобы не попасть в образец пузырьков воздуха при продувке поверхности жидкости.