Atunci când se pipetează volume de la 0,2 la 5 µL, precizia și precizia pipetării sunt de cea mai mare importanță, o tehnică bună de pipetare este esențială, deoarece greșelile de manipulare sunt mai evidente la volume mici.
Pe măsură ce se pune mai mult accent pe reducerea reactivilor și a costurilor, volume mai mici sunt la mare căutare, de exemplu, pentru prepararea reacțiilor PCR Mastermix sau enzimatice. Dar pipetarea unor volume mici de la 0,2 – 5 µL creează noi provocări pentru acuratețea și precizia pipetării. Următoarele puncte sunt esențiale:
- Dimensiunea pipetei și a vârfului: alegeți întotdeauna pipeta cu cel mai mic volum nominal posibil și cel mai mic vârf pentru a menține perna de aer cât mai mică posibil. Când pipetați 1 µL, de exemplu, alegeți o pipetă de 0,25 – 2,5 µL și un vârf potrivit, mai degrabă decât o pipetă de 1 – 10 µL.
- Calibrare și întreținere: Este esențial ca pipetele dumneavoastră să fie calibrate și întreținute corespunzător. Micile ajustări și piese rupte pe o pipetă duc la o creștere masivă a valorilor de eroare sistematice și aleatorii. O calibrare conform ISO 8655 trebuie efectuată o dată pe an.
- Pipete cu deplasare pozitivă: verificați dacă aveți în laborator o pipetă cu deplasare pozitivă cu un interval de volum scăzut. În general, utilizarea acestui tip de pipetă duce la un rezultat de pipetare mai bun în ceea ce privește acuratețea și precizia decât în cazul pipetelor clasice cu pernă de aer.
- Încercați să utilizați volume mai mari: puteți lua în considerare diluarea probei pentru a pipeta volume mai mari cu aceeași cantitate în reacția finală. Acest lucru poate reduce erorile de pipetare cu volume de probă foarte mici.
Pe lângă un instrument bun, cercetătorul trebuie să aibă o tehnică de pipetare foarte bună. Acordați o atenție deosebită următorilor pași:
- Atașarea vârfului: Nu blocați pipeta pe vârf, deoarece acest lucru poate deteriora capătul vârfului fin, cauzand redirecționarea fasciculului de lichid sau deteriorarea orificiului. Aplicați o presiune ușoară numai când atașați un vârf și utilizați o pipetă cu un con de vârf cu arc.
- Ținerea pipetei: Nu țineți pipeta în mână în timp ce așteptați centrifuga, ciclor, etc. Interiorul pipetei se va încălzi și va conduce perna de aer să se extindă, rezultând abateri de la volumul setat la pipetare.
- Pre-umidificare: Umidificarea aerului din interiorul vârfului și al pipetei pregătește vârful pentru probă și evită evaporarea la aspirarea volumului de transfer.
- Aspirația verticală: Acest lucru este foarte important atunci când manipulați volume mici pentru a evita efectul capilar care apare atunci când pipeta este ținută în unghi.
- Adâncime de scufundare: scufundați vârful cât mai puțin posibil pentru a preveni intrarea lichidului în vârf din cauza efectului capilar. Regula generală: cu cât vârful și volumul sunt mai mici, cu atât adâncimea de scufundare este mai mică. Recomandăm maxim 2 mm la pipetarea unor volume mici.
- Distribuire la un unghi de 45°: curgerea optimă a lichidului este garantată atunci când pipeta este ținută la un unghi de 45°.
- Contact cu peretele vasului sau suprafața lichidului: volumele mici pot fi distribuite corect numai atunci când vârful este ținut de peretele vasului sau scufundat în lichid. Chiar și ultima picătură din vârf poate fi distribuită cu precizie.
- Blow-out: O suflare este obligatorie după distribuirea unor volume mici pentru a distribui chiar și ultima picătură de lichid prezentă în vârf. Evacuarea trebuie efectuată și pe peretele vasului. Aveți grijă să nu introduceți bule de aer în probă atunci când efectuați o suflare la suprafața lichidului.
Ora postării: 18-feb-2021