Como selar uma placa PCR

Introdução

Placas PCR, um elemento básico do laboratório há muitos anos, estão se tornando ainda mais predominantes no ambiente moderno, à medida que os laboratórios aumentam sua produção e empregam cada vez mais a automação em seus fluxos de trabalho. Alcançar estes objetivos preservando ao mesmo tempo a precisão e a integridade dos experimentos pode ser difícil. Uma das áreas comuns onde erros podem surgir é na vedação dePlacas PCR, com técnica deficiente permitindo a evaporação das amostras, alterando o pH e, portanto, interrompendo as funções enzimáticas e convidando à contaminação. Aprendendo a selar umPlaca PCRelimina corretamente esses riscos e garante resultados reproduzíveis.

Encontre o selo certo para sua placa PCR

Tampas de placa vs. selos de filme vs. tampas
Bonéssão uma boa maneira de selar sua placa com uma vedação hermética, ao mesmo tempo que lhe dá a flexibilidade de abrir e selar facilmente a placa conforme necessário, sem qualquer desperdício. No entanto, os limites têm algumas desvantagens importantes.

Primeiramente você terá que comprar a tampa específica que seja compatível, o que os torna pouco versáteis. Você terá que se certificar de que a tampa escolhida se ajusta à placa, que depende do fabricante, e escolher entre abaulada ou plana com base no termociclador que você está usando.

Em segundo lugar, aplicar as tampas na placa pode ser muito repetitivo e tedioso, com risco de contaminação cruzada se você colocar a tampa errada no poço errado.

Embora os selos de filme sejam menos flexíveis em termos de remoção e substituição, eles são muito versáteis, pois cabem em qualquer tipo de placa PCR, independentemente do fabricante. Eles podem simplesmente ser cortados no tamanho certo, o que os torna muito eficazes.

Outra opção é uma tampa de prato. Eles oferecem menos proteção que tampas e selos e são usados ​​principalmente apenas para cobertura de curto prazo para evitar contaminação.

Selos de filme óptico versus folha

Se você precisa de um selo óptico transparente ou de umfilme de folha de alumíniopara selar seu prato é decidido pelo seu formato experimental.Filmes de vedação ópticasão transparentes para permitir a observação das amostras, ao mesmo tempo que as protege e evita a evaporação. Eles também são particularmente úteis em experimentos de qPCR que envolvem a realização de medições altamente precisas de fluorescência diretamente da placa; nesse caso, você precisará de um filme de vedação que filtre o mínimo de fluorescência possível. É importante certificar-se de que o selo ou tampa que você está usando tenha um nível de clareza óptica alto o suficiente para garantir que as leituras sejam precisas.

Os filmes laminados são apropriados para qualquer amostra sensível à luz ou que deva ser armazenada abaixo de 80°C. Por esta razão, a maioria das amostras destinadas ao armazenamento a longo prazo necessitará de uma película metálica. Os filmes laminados também são perfuráveis, o que é útil para examinar poços individuais ou para a transferência de amostras por agulhas. Isto pode ocorrer manualmente ou como parte de uma plataforma robótica.

Considere também que substâncias agressivas que incluem ácidos, bases ou solventes exigirão uma vedação que possa suportá-las; nesse caso, uma vedação de alumínio será provavelmente mais apropriada.

Filme adesivo vs. filme de vedação térmica
Selos de filme adesivosão muito diretos e fáceis de aplicar. Tudo o que você precisa é que o usuário aplique a vedação na placa e use uma ferramenta aplicadora simples para pressionar e formar uma vedação hermética.

As vedações térmicas são mais avançadas, proporcionando uma vedação mais duradoura e com taxas de evaporação reduzidas em comparação com uma vedação adesiva convencional. Esta opção é apropriada se você deseja armazenar amostras a longo prazo, embora isso acarrete um requisito adicional para equipamento de vedação de placas.

Como selar uma placa PCR

Método de vedação de placa

Autoadesivo

1. Certifique-se de estar trabalhando em uma superfície de trabalho plana e estável

2. Remova o filme da embalagem e remova a proteção

3. Coloque cuidadosamente o selo na placa, certificando-se de que todos os poços estejam cobertos

4. Use uma ferramenta aplicadora para aplicar pressão na placa. Comece de uma extremidade e vá até a outra, pressionando uniformemente

5. Repita isso inúmeras vezes

6. Passe o aplicador ao redor dos poços externos, para garantir que também estejam devidamente vedados.

Selos térmicos

As selagens térmicas funcionam derretendo o filme até a borda de cada poço, com a ajuda de um selador de placas. Para operar uma seladora térmica, consulte as instruções fornecidas pelo fabricante do equipamento. Certifique-se de que o fabricante do qual você compra seu equipamento seja confiável, pois é muito importante que a vedação seja adequada, eficaz e estanque.

Dicas principais para vedação de placas

um. Ao aplicar pressão na vedação, siga nas direções horizontal e vertical para garantir uma vedação adequada

b. É sempre uma boa prática fazer um teste de tudo o que você está fazendo, e isso não é diferente com a vedação de placas. Teste com um prato vazio antes de usar um com amostras.

c. Ao testar, retire o lacre e verifique se o adesivo aderiu corretamente, sem folgas. Há uma representação visual disso no primeiro documento de referência. Se você não selou a placa corretamente, ao remover a vedação, haverá lacunas onde o adesivo não aderiu totalmente à placa.

d. Para remessa e transporte de amostras, pode ser útil aplicar um selo plástico na parte superior do selo metálico para proteção extra (especialmente contra perfuração).

e. Certifique-se sempre de que não haja saliências ou rugas ao aplicar o filme – isso causará vazamentos e evaporação