Como selar uma placa de PCR

Introdução

Placas de PCR, um item básico do laboratório por muitos anos, está se tornando ainda mais prevalente no cenário moderno, à medida que os laboratórios aumentam sua taxa de transferência e empregam cada vez mais automação dentro de seus fluxos de trabalho. Alcançar esses objetivos, preservando a precisão e a integridade dos experimentos, pode ser difícil. Uma das áreas comuns onde os erros podem surgir é com a vedação dePlacas de PCR, com má técnica permitindo a evaporação de amostras, alterando o pH e, portanto, interrompendo as funções enzimáticas e convidando a contaminação. Aprendendo a selar umPlaca de PCRelimina corretamente esses riscos e garante resultados reproduzíveis.

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Caps de placa vs. focas de filme vs. tampas
Capssão uma boa maneira de selar seu prato com uma vedação apertada, enquanto ainda oferece a flexibilidade de falhar com muita facilidade e vender a placa, conforme necessário, sem desperdício. No entanto, o Caps tem algumas desvantagens importantes.

Em primeiro lugar, você terá que comprar o limite específico compatível, o que os torna não versáteis. Você precisará garantir que a tampa escolhida se encaixe na placa, que depende do fabricante e escolha abobadada ou plana com base no termociclador que você está usando.

Em segundo lugar, a aplicação das tampas na placa pode ser muito repetitiva e tediosa, com o risco de contaminação cruzada se você colocar o limite errado no poço errado.

Embora os selos de filme sejam menos flexíveis em termos de remoção e substituição, eles são muito versáteis, pois se encaixam em qualquer tipo de placa de PCR, sem consideração de quem é o fabricante. Eles podem simplesmente ser cortados em tamanho, tornando -os muito eficazes.

Outra opção é uma tampa de placa. Eles oferecem menos proteção que limitam e são usados ​​principalmente apenas para cobertura de curto prazo para evitar a contaminação.

SEALs de filme óptico vs. alumínio

Se você precisa de um selo óptico, transparente ou umfilme de alumínioPara selar, sua placa é decidida pelo seu formato experimental.Filmes de vedação ópticasão transparentes para permitir que você observe amostras, enquanto ainda as protege e evita a evaporação. Eles também são particularmente úteis em experimentos de qPCR que envolvem fazer medições altamente precisas de fluorescência diretamente da placa; nesse caso, você precisará de um filme de vedação que filtra o mínimo de fluorescência possível. É importante garantir que a vedação ou a tampa que você esteja usando tenha um nível suficiente de clareza óptica para garantir que as leituras sejam precisas.

Os filmes de papel alumínio são apropriados para quaisquer amostras sensíveis à luz ou devem ser armazenadas abaixo de 80 ° C. Por esse motivo, a maioria das amostras destinadas ao armazenamento a longo prazo exigirá um filme de papel alumínio. Os filmes de papel alumínio também são perfurados, o que é útil para examinar poços individuais ou para a transferência de amostras por agulhas. Isso pode ocorrer manualmente ou como parte de uma plataforma robótica.

Considere também que substâncias agressivas que incluem ácidos, bases ou solventes exigirão uma vedação que possa suportá -las; nesse caso, uma vedação de papel alumínio provavelmente é mais apropriada.

Filme adesivo vs. vedação de calor
SEALs de filme adesivosão muito diretos e fáceis de aplicar. Tudo o que você precisa é que um usuário aplique a vedação à placa e use uma ferramenta simples de aplicador para pressionar e formar uma vedação apertada.

As vedações térmicas são mais avançadas, fornecendo uma vedação mais duradoura que reduziu as taxas de evaporação em comparação com uma vedação adesiva convencional. Essa opção é apropriada se você deseja armazenar amostras a longo prazo, embora isso venha com um requisito adicional para o equipamento de vedação de placas.

Como selar uma placa de PCR

Método de vedação de placas

Auto-adesivo

1. Verifique se você está trabalhando em uma superfície de trabalho plana e estável

2. Remova o filme de sua embalagem e remova o apoio

3. Coloque cuidadosamente o selo no prato, enquanto certificando -se de que todos os poços sejam cobertos

4. Use uma ferramenta aplicadora para aplicar pressão através da placa. Comece de um fim e trabalhe para o outro, pressionando uniformemente

5. Repita isso inúmeras vezes

6. Execute o aplicador em torno dos poços externos, para garantir que eles também estejam bem selados.

Selos térmicos

As vedações térmicas funcionam derretendo o filme até a borda de cada poço, com a ajuda de um selador de placa. Para operar um selador de calor, consulte as instruções fornecidas pelo fabricante do equipamento. Certifique -se de que o fabricante da qual você obtenha o seu equipamento seja respeitável, pois é muito importante que o selo seja adequado, eficaz e estanque.

Dicas de vedação de placas

um. Ao aplicar pressão ao selo, vá em direções horizontais e verticais para garantir uma vedação adequada

b. É sempre uma boa prática executar uma execução de teste do que você está fazendo, e isso não é diferente com a vedação de placas. Teste com uma placa vazia antes de usar uma com amostras.

c. Ao testar, retire o selo e procure que o adesivo prenda corretamente, sem lacunas. Há uma representação visual disso no primeiro documento de referência. Se você não selou a placa corretamente, quando você remover a vedação, haverá lacunas onde o adesivo não se liga totalmente à placa.

d. Para o envio e transporte de amostras, você pode achar útil aplicar uma vedação de plástico em cima do selo de papel alumínio para proteção extra (especialmente do piercing).

e. Sempre verifique se não há solavancos ou rugas ao aplicar o filme - eles causarão vazamentos e evaporação