A micropipeta é provavelmente a ferramenta mais utilizada em laboratório. Eles são usados por cientistas em uma ampla variedade de setores, incluindo laboratórios acadêmicos, hospitalares e forenses, bem como no desenvolvimento de medicamentos e vacinas, para transferir quantidades precisas e muito pequenas de líquido.
Embora possa ser irritante e frustrante detectar bolhas de ar na ponta descartável da pipeta, se elas não forem detectadas ou ignoradas, isso pode ter um enorme impacto na confiabilidade e na reprodutibilidade dos resultados.
A boa notícia é que existem algumas medidas simples que você pode tomar para evitar bolhas de ar e melhorar a eficiência do laboratório, a satisfação do operador, bem como a exatidão e precisão dos resultados.
Abaixo, exploramos as consequências de formar uma bolha de ar na ponta da pipeta e o que você deve fazer a seguir.
A consequência das bolhas noPonta de pipeta
Mesmo que você use as pipetas mais precisas, de última geração, bem conservadas, reparadas e calibradas, a confiabilidade dos seus resultados pode ser afetada por erros de laboratório. Quando as bolhas entram nodicapode ter vários resultados.
● Ao detectar a bolha de ar, o usuário deve dispensar o líquido aspirado de forma adequada, ejetar a ponta e iniciar o processo novamente.
● Bolhas de ar não detectadas podem resultar em transferência de baixo volume, alterando assim a concentração das misturas de reação, levando a experimentos fracassados e resultados questionáveis ou não confiáveis.
Esses resultados podem ter diversas consequências (1).
● Diminuição da eficiência do laboratório – Os testes e ensaios terão de ser repetidos, incorrendo em custos de mão-de-obra e de materiais, que podem ser bastante substanciais.
● Resultados de testes questionáveis ou incorretos – Se resultados incorretos forem divulgados, poderá haver consequências mais graves, incluindo diagnósticos incorretos e maus resultados para os pacientes.
● Retração de manuscritos de periódicos – Se os pares não conseguirem replicar seus resultados devido a bolhas de ar que causam resultados imprecisos, os artigos poderão ser retirados.
Melhores práticas para evitar bolhas de ar
Na maioria dos casos, as bolhas de ar nas pontas das pipetas são causadas por erro do operador. Técnica inadequada devido a treinamento insuficiente ou fadiga geralmente é o problema subjacente.
A pipetagem é uma operação qualificada que requer 110% de atenção, treinamento e prática adequados para alcançar resultados consistentes e precisos.
Embora existam várias coisas que você pode fazer para reduzir erros gerais de pipetagem, destacamos abaixo algumas práticas recomendadas que podem ser empregadas para evitar bolhas de ar empontas de pipeta.
Melhorar a técnica do usuário
Pipetar lentamente
Se o êmbolo for liberado muito rapidamente durante a aspiração, bolhas de ar poderão ser introduzidas na ponta. Isto pode ser especialmente problemático ao transferir líquidos viscosos. Um efeito semelhante pode ocorrer se o êmbolo for libertado demasiado rapidamente após a distribuição.
Para evitar bolhas de ar durante a aspiração, tome cuidado para operar o pistão das pipetas manuais de maneira suave e regular, aplicando força consistente.
Use a profundidade de imersão correta
A não imersão da ponta da pipeta suficientemente abaixo do menisco do reservatório de líquido pode resultar na aspiração de ar e, portanto, na formação de bolhas.
No entanto, mergulhar a ponta muito profundamente pode aspirar mais líquido devido ao aumento da pressão ou podem ocorrer gotículas na parte externa da ponta, por isso é importante mergulhar a pontaponta de pipetana profundidade correta.
A profundidade recomendada varia entre o tamanho, tipo e marca da pipeta. Embora as recomendações do fabricante devam ser seguidas, aqui está um guia geral fornecido pelo Laboratório Nacional de Física.
Guia para profundidade de imersão na ponta
Volume da pipeta (µl) e profundidade de imersão (mm)
- 1 – 100: 2 – 3
- 100 – 1.000: 2 – 4
- 1.000 – 5.000: 2 – 5
Pré-molhadoPontas de pipeta
Ao pipetar volumes superiores a 10 µlpontas de pipetageralmente são pré-umedecidos, enchendo-os várias vezes com o líquido que está sendo dispensado e expelindo-o para o lixo para melhorar a precisão.
A falta de umedecimento prévio pode resultar em bolhas de ar, especialmente ao usar líquidos viscosos ou hidrofóbicos. Para evitar bolhas de ar, certifique-se de molhar previamente as pontas ao pipetar volumes superiores a 10 µl.
Use técnicas de pipetagem reversa, se apropriado
Substâncias viscosas: Um problema comum ao pipetar substâncias viscosas, como soluções de proteínas ou ácidos nucleicos, glicerol e Tween 20/40/60/80, é a formação frequente de bolhas quando a técnica de pipetagem direta é usada.
A pipetagem lenta, utilizando a técnica de pipetagem reversa, reduz o risco de formação de bolhas ao transferir soluções viscosas.
Técnica ELISA
A pipetagem reversa também é recomendada ao pipetar pequenos volumes emPlacas de microteste de 96 poçospara técnicas de ELISA. Quando bolhas de ar são aspiradas para a pipeta ou distribuídas em poços ao adicionar reagentes, isso pode influenciar os valores de densidade óptica e os resultados. A pipetagem reversa é recomendada para minimizar ou eliminar esse problema.
Use pipetas ergonômicas
Pipetas de estilo antigo que não foram projetadas com a ergonomia em mente exigem mais esforço físico, você fica cansado e sua técnica de pipetagem torna-se desleixada e pobre. Os erros mencionados acima, como a liberação rápida do êmbolo, podem ocorrer com mais frequência.
Ao investir numa solução mais ergonómica conseguirá manter uma técnica excelente e evitar a formação de bolhas de ar devido a uma técnica deficiente.
Reserve um tempo para treinar a equipe
Treinar e avaliar regularmente a equipe em técnicas de pipetagem pode garantir que o erro do operador e a formação de bolhas de ar sejam reduzidos.
Considere soluções mais automatizadas
Conforme observado acima, a maioria das bolhas de ar são causadas pelo operador. Pode ser possível reduzir o erro e o conforto do operador usando pipetas eletrônicas ou uma plataforma flexível de manipulação de líquidos, como aRobô de manuseio de líquidos Agilent Bravo.
Use boa qualidadePontas de pipeta
As micropipetas geralmente são adquiridas com cuidado, mas muitas vezes pouca atenção é dada à qualidade da ponta descartável da pipeta. Devido à influência que uma ponta tem nos resultados da pipetagem, a norma ISO 8655 exige uma calibração extra se forem utilizadas pipetas e pontas de fabricantes diferentes.
Isso pode ocorrer porque muitas pontas baratas podem parecer boas inicialmente, mas quando você as estuda cuidadosamente, elas podem apresentar flashes, saliências, arranhões e bolhas de ar, ou estar dobradas ou conter impurezas.
Comprar pontas de polipropileno de boa qualidade pode reduzir a ocorrência de bolhas de ar.
Para concluir
A presença de bolhas de ar na ponta da pipeta tem impacto na eficiência do laboratório, bem como na imprecisão e imprecisão dos resultados. Observamos várias coisas que você pode fazer para evitar que bolhas de ar entrem noponta de pipeta.
No entanto, se a qualidade for ruimpontas de pipetaestão causando a entrada de bolhas de ar na ponta da pipeta, você ficará satisfeito em saber que nosso ajuste universalpontas de pipetasão feitos de acordo com os mais altos padrões e são feitos com polipropileno puro de qualidade premium.
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Horário da postagem: 29 de dezembro de 2022