As reações em cadeia da polimerase (PCR) são um dos métodos amplamente conhecidos utilizados em laboratórios de ciências biológicas.
As placas PCR são produzidas a partir de plásticos de primeira classe para excelente processamento e análise de amostras ou resultados coletados.
Possuem paredes finas e homogêneas para proporcionar uma transferência térmica precisa.
Na preparação para aplicações em tempo real, pequenas seções de DNA ou RNA são isoladas e armazenadas em placas de PCR.
As placas PCR são altamente eficientes na vedação térmica e também restringem o fluxo de calor.
No entanto, por mais eficazes e confiáveis que sejam as placas de PCR, erros e imprecisões podem ocorrer facilmente durante o processamento de amostras.
Portanto, se você estiver interessado em obter um produto de boa e alta qualidadePlacas PCR.É ideal entrar em contato com um fabricante confiável de placas PCR. Com isso você tem a certeza de conseguir o melhor negócio.
Aqui estão algumas precauções a serem seguidas para evitar contaminações de reagentes ou amostras e evitar que imprecisões se insinuem nos resultados.
Esterilizando o ambiente
Positivos ou negativos incorretos ocorrem devido à presença de impurezas, o que faz duvidar dos resultados.
Impurezas e contaminantes ocorrem em várias formas, como DNA não relacionado ou aditivos químicos que eventualmente diminuem a eficiência e eficácia da reação.
Existem inúmeras maneiras de reduzir significativamente a taxa de contaminação da placa PCR.
Usar pontas de filtro esterilizadas é outra maneira útil de evitar que impurezas entrem nas amostras através das pipetas.
Dedicar um conjunto de equipamentos totalmente limpo, composto por pipetas e racks, exclusivamente para uso de PCR. Isto garantirá uma transferência insignificante de impurezas ou contaminantes pelo laboratório.
Utilize alvejantes, etanol nas pipetas, racks e bancadas para limpar os contaminantes.
Aloque um espaço reservado para todas as suas reações de PCR para minimizar ainda mais a contaminação por partículas.
Use luvas limpas em cada etapa e substitua-as com frequência.
Placas PCR
Inspecione a concentração e a pureza do modelo.
A limpeza da bancada e dos equipamentos utilizados na análise de amostras com PCR deve ser mantida. É essencial validar o grau de pureza das amostras antes da análise e processamento.
Geralmente, os analisadores levam em consideração a concentração e o nível de pureza das amostras de DNA.
Esforce-se para que a proporção de absorvância para 260nm/280nm não seja inferior a 1,8. Enquanto comprimentos de onda subsequentes entre 230 nm e 320 nm são usados para identificar impurezas.
Por exemplo, sais caotrópicos e outros compostos orgânicos são detectados a uma taxa de absorvância de 230 nm. Enquanto a turbidez nas amostras de DNA também é detectada e verificada a uma taxa de absorção de 320 nm.
Evite sobrecarregar as placas PCR com produto
Por mais que seja desejado executar múltiplos produtos simultaneamente, isso resulta na contaminação cruzada das placas de PCR.
Sobrecarregar as placas de PCR com diferentes produtos desperdiça e torna extremamente difícil a verificação das amostras.
Mantenha registros de reagentes PCR de alíquotas
Ciclos contínuos de congelamento/descongelamento e uso frequente de alíquotas podem danificar os reagentes de PCR, enzimas e DNTP através da recristalização.
Sempre se esforce para monitorar a taxa de alíquota usada durante a preparação das amostras a serem analisadas.
O LIMS preferível é mais adequado para controlar o inventário e a quantidade de reagentes e amostras congeladas ou descongeladas.
Escolha a melhor temperatura de recozimento.
Escolher e usar a temperatura de recozimento errada é outro método pelo qual os resultados da PCR contêm erros.
Às vezes, a reação não sai como planejado. É desejado reduzir a temperatura de recozimento para facilitar uma reação bem sucedida.
No entanto, a redução da temperatura aumenta as chances de falsos positivos e aparecimento de dímeros de primer.
É significativo confirmar a análise da curva de fusão ao usar as placas de PCR, pois é um bom indicador para selecionar a temperatura de recozimento correta.
O software de design de primer auxilia no projeto, fornecendo a temperatura de recozimento correta e reduzindo diretamente o erro nas placas de PCR.
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Horário da postagem: 30 de outubro de 2021