Jak pipetować małe objętości za pomocą ręcznych pipet ręcznych

Ponieważ większy nacisk kładzie się na redukcję odczynników i kosztów, istnieje duże zapotrzebowanie na mniejsze ilości, np. do przygotowania PCR Mastermix lub reakcji enzymatycznych. Jednak pipetowanie małych objętości od 0,2 do 5 µl stawia nowe wyzwania w zakresie dokładności i precyzji pipetowania. Niezbędne są następujące punkty:

1. Rozmiar pipety i końcówki: Zawsze wybieraj pipetę o najmniejszej możliwej objętości nominalnej i najmniejszej końcówce, aby poduszka powietrzna była jak najmniejsza. Przykładowo, pipetując 1 µL, należy wybrać pipetę 0,25 – 2,5 µL i dopasowaną końcówkę zamiast pipety 1 – 10 µL.
2. Kalibracja i konserwacja: Prawidłowa kalibracja i konserwacja pipet jest niezwykle istotna. Drobne korekty i uszkodzone części pipety prowadzą do ogromnego wzrostu wartości błędów systematycznych i losowych. Kalibrację zgodnie z normą ISO 8655 należy przeprowadzać raz w roku.
3. Pipety wyporowe: Sprawdź, czy masz w swoim laboratorium pipetę wyporową o niskim zakresie objętości. Ogólnie rzecz biorąc, stosowanie tego typu pipet pozwala uzyskać lepszy wynik pipetowania pod względem dokładności i precyzji niż w przypadku klasycznych pipet z poduszką powietrzną.
4. Spróbuj użyć większych objętości: Możesz rozważyć rozcieńczenie próbki w celu pipetowania większych objętości z tą samą ilością w końcowej reakcji. Może to zmniejszyć błędy pipetowania przy bardzo małych objętościach próbek.

Oprócz dobrego narzędzia badacz musi dysponować bardzo dobrą techniką pipetowania. Zwróć szczególną uwagę na następujące kroki:

1. Mocowanie końcówki: Nie wciskaj pipety w końcówkę, ponieważ może to spowodować uszkodzenie cienkiej końcówki, przekierowanie strumienia cieczy lub uszkodzenie otworu. Podczas mocowania końcówki należy wywierać jedynie lekki nacisk i używać pipety ze sprężynującym stożkiem końcowym.
2. Trzymanie pipety: Nie trzymaj pipety w dłoni podczas oczekiwania na wirówkę, cykler itp. Wnętrze pipety nagrzewa się, co powoduje rozszerzenie poduszki powietrznej, co powoduje odchylenia od ustawionej objętości podczas pipetowania.
3. Wstępne zwilżanie: Nawilżanie powietrza wewnątrz końcówki i pipety przygotowuje końcówkę na próbkę i zapobiega parowaniu podczas aspiracji przenoszonej objętości.
4. Aspiracja pionowa: Jest to bardzo ważne w przypadku małych objętości, aby uniknąć efektu kapilarnego, który występuje, gdy pipeta jest trzymana pod kątem.
5. Głębokość zanurzenia: Zanurzyć końcówkę jak najniżej, aby zapobiec przedostawaniu się cieczy do końcówki w wyniku efektu kapilarnego. Ogólna zasada: im mniejsza końcówka i objętość, tym mniejsza głębokość zanurzenia. W przypadku pipetowania małych objętości zalecamy maksymalnie 2 mm.
6. Dozowanie pod kątem 45°: Optymalny wypływ cieczy jest gwarantowany, gdy pipeta jest trzymana pod kątem 45°.
7. Kontakt ze ścianą naczynia lub powierzchnią cieczy: Małe objętości można prawidłowo dozować tylko wtedy, gdy końcówka jest dociśnięta do ściany naczynia lub zanurzona w cieczy. Nawet ostatnią kroplę z końcówki można dokładnie dozować.
8. Wydmuch: Wydmuch jest obowiązkowy po dozowaniu małych objętości, aby dozować nawet ostatnią kroplę płynu znajdującą się w końcówce. Wydmuch należy przeprowadzić także w stronę ściany naczynia. Podczas wydmuchu powierzchni cieczy należy uważać, aby do próbki nie dostały się pęcherzyki powietrza.