Podczas pipetowania objętości od 0,2 do 5 µl dokładność i precyzja pipetowania ma ogromne znaczenie, dobra technika pipetowania jest niezbędna, ponieważ błędy obsługi są bardziej oczywiste w przypadku małych objętości.
Ponieważ skupiono się na zmniejszaniu odczynników i kosztów, mniejsze objętości są bardzo poszukiwane, np. W przypadku przygotowania reakcji PCR Mastermix lub enzymatycznych. Ale pipetowanie małych objętości od 0,2 - 5 µl stanowi nowe wyzwania dla dokładności i precyzji pipetowania. Niezbędne są następujące punkty:
- Rozmiar pipety i końcówki: Zawsze wybieraj pipetę o najniższej możliwej objętości nominalnej i najmniejszej końcówce, aby utrzymać poduszkę powietrzną tak małą, jak to możliwe. Podczas pipetowania 1 µl EG wybierz pipetę 0,25 - 2,5 µl i dopasowaną końcówkę zamiast 1–10 µl pipety.
- Kalibracja i konserwacja: ważne jest, aby pipety były odpowiednio kalibrowane i utrzymywane. Małe regulacje i zepsute części pipety prowadzą do ogromnego wzrostu systematycznych i losowych wartości błędów. Kalibracja według ISO 8655 musi być wykonywana raz w roku.
- Pipety dodatnie przemieszczenia: Sprawdź, czy masz dodatnią pipetę przemieszczenia z niskim zakresem objętości w laboratorium. Ogólnie rzecz biorąc, użycie tego rodzaju pipety prowadzi do lepszego wyniku pipetowania pod względem dokładności i precyzji niż w przypadku klasycznych pipet powietrznych.
- Spróbuj użyć większych objętości: możesz rozwodzić się rozcieńczeniem próbki do większych objętości pipet o tej samej ilości w końcowej reakcji. Może to zmniejszyć błędy pipetowania z bardzo małymi objętościami próbki.
Oprócz dobrego narzędzia badacz musi mieć bardzo dobrą technikę pipetowania. Zwróć szczególną uwagę na następujące kroki:
- Załączanie końcówki: Nie zatrzruj pipety na końcówce, ponieważ może to uszkodzić drobny koniec końcówki spowodować przekierowanie płynnej wiązki lub uszkodzenie otworu. Przyłączając końcówkę i użyj pipety ze sprężynowym stożkiem.
- Trzymanie pipety: Nie trzymaj pipety w dłoni podczas oczekiwania na wirówkę, cykl itp. Wnętrze pipety rozgrzeje się i poprowadzi poduszkę powietrzną, aby rozszerzyć się od odchyleń od objętości ustalonej podczas pipetowania.
- Wstępne wypatrywanie: nawilżanie powietrza wewnątrz końcówki i pipety przygotowuje końcówkę próbki i unika parowania podczas aspirowania objętości transferu.
- Aspiracja pionowa: Jest to bardzo ważne podczas obsługi małych objętości, aby uniknąć efektu kapilarnego, który występuje, gdy pipeta jest trzymana pod kątem.
- Głębokość zanurzenia: Zanurz końcówkę tak niewielką, jak to możliwe, aby zapobiec wchodzeniu w końcówkę z powodu efektu kapilarnego. Reguła: Im mniejsza wierzchołek i objętość, tym niższa głębokość zanurzenia. Podczas pipetowania małych objętości zalecamy maksymalnie 2 mm.
- Wydawanie pod kątem 45 °: Optymalny wypływ cieczy jest gwarantowany, gdy pipeta jest przechowywana pod kątem 45 °.
- Kontakt z powierzchnią ściany lub cieczy: małe objętości można odpowiednio wydać tylko wtedy, gdy końcówka jest przytulona do ściany naczynia lub zanurzona w ciecz. Nawet ostatni spadek z końcówki można dokładnie wydać.
- Wydmuch: wydmuchanie jest obowiązkowe po wydawaniu niskich objętości w celu wydawania nawet ostatniej kropli cieczy obecnej na końcówce. Wydmuch powinien być również przeprowadzony na ścianie statku. Uważaj, aby nie wprowadzać pęcherzyków powietrza do próbki podczas wykonywania wydmuchu na cieczy.
Czas po: 18-2021 lutego