Przy pipetowaniu objętości od 0,2 do 5 µl dokładność i precyzja pipetowania mają kluczowe znaczenie. Dobra technika pipetowania jest niezbędna, ponieważ błędy przy obsłudze są bardziej oczywiste w przypadku małych objętości.
Ponieważ coraz większą uwagę przywiązuje się do redukcji odczynników i kosztów, mniejsze objętości są bardzo pożądane, np. do przygotowywania PCR Mastermix lub reakcji enzymatycznych. Jednak pipetowanie małych objętości od 0,2 do 5 µl stawia nowe wyzwania dla dokładności i precyzji pipetowania. Następujące punkty są niezbędne:
- Rozmiar pipety i końcówki: Zawsze wybieraj pipetę o najniższej możliwej objętości nominalnej i najmniejszej końcówce, aby utrzymać poduszkę powietrzną tak małą, jak to możliwe. Podczas pipetowania np. 1 µl wybierz pipetę 0,25–2,5 µl i pasującą końcówkę, a nie pipetę 1–10 µl.
- Kalibracja i konserwacja: Istotne jest, aby pipety były prawidłowo kalibrowane i konserwowane. Niewielkie korekty i uszkodzone części pipety prowadzą do znacznego wzrostu wartości błędów systematycznych i losowych. Kalibracja zgodnie z normą ISO 8655 musi być przeprowadzana raz w roku.
- Pipety wyporowe: Sprawdź, czy w swoim laboratorium masz pipetę wyporową o niskim zakresie objętości. Ogólnie rzecz biorąc, używanie tego typu pipety prowadzi do lepszych wyników pipetowania pod względem dokładności i precyzji niż w przypadku klasycznych pipet z poduszką powietrzną.
- Spróbuj użyć większych objętości: Możesz rozważyć rozcieńczenie próbki, aby pipetować większe objętości z tą samą ilością w końcowej reakcji. Może to zmniejszyć błędy pipetowania przy bardzo małych objętościach próbek.
Oprócz dobrego narzędzia, badacz musi mieć bardzo dobrą technikę pipetowania. Zwróć szczególną uwagę na następujące kroki:
- Zakładanie końcówki: Nie wciskaj pipety na końcówkę, ponieważ może to uszkodzić cienką końcówkę, powodując przekierowanie strumienia cieczy lub uszkodzenie otworu. Podczas zakładania końcówki należy stosować tylko lekki nacisk i używać pipety ze sprężynowym stożkiem końcówki.
- Trzymanie pipety: Nie trzymaj pipety w ręce podczas oczekiwania na wirówkę, cykler itp. Wnętrze pipety nagrzeje się, co doprowadzi do rozszerzenia się poduszki powietrznej, co może skutkować odchyleniami od ustawionej objętości podczas pipetowania.
- Wstępne zwilżanie: nawilżanie powietrza wewnątrz końcówki i pipety przygotowuje końcówkę do przyjęcia próbki i zapobiega parowaniu podczas zasysania objętości transferu.
- Aspiracja pionowa: Jest to bardzo ważne przy obsłudze małych objętości, ponieważ pozwala uniknąć efektu kapilarnego, który występuje, gdy pipeta jest trzymana pod kątem.
- Głębokość zanurzenia: Zanurzaj końcówkę tak mało, jak to możliwe, aby zapobiec przedostawaniu się cieczy do końcówki z powodu efektu kapilarnego. Zasada: Im mniejsza końcówka i objętość, tym mniejsza głębokość zanurzenia. Zalecamy maksymalnie 2 mm podczas pipetowania małych objętości.
- Dozowanie pod kątem 45°: Optymalny wypływ cieczy jest gwarantowany, gdy pipeta jest trzymana pod kątem 45°.
- Kontakt ze ścianą naczynia lub powierzchnią cieczy: Małe objętości można prawidłowo dozować tylko wtedy, gdy końcówka jest przytrzymywana przy ścianie naczynia lub zanurzona w cieczy. Nawet ostatnia kropla z końcówki może zostać dozowana dokładnie.
- Wydmuch: Wydmuch jest obowiązkowy po dozowaniu małych objętości, aby dozować nawet ostatnią kroplę cieczy obecną w końcówce. Wydmuch należy również wykonać przy ścianie naczynia. Należy uważać, aby nie wprowadzić pęcherzyków powietrza do próbki podczas wykonywania wydmuchu przy powierzchni cieczy.
Czas publikacji: 18-02-2021