Hvordan pipettere små volumer med håndholdte manuelle pipetter

Ettersom det settes mer fokus på å redusere reagenser og kostnader, er mindre volumer etterspurt, for eksempel for fremstilling av PCR Mastermix eller enzymreaksjoner. Men pipettering av små volumer fra 0,2 – 5 µL setter nye utfordringer for pipetteringsnøyaktighet og presisjon. Følgende punkter er viktige:

1. Pipette- og spissstørrelse: Velg alltid pipetten med lavest mulig nominelt volum og den minste spissen for å holde luftputen så liten som mulig. Når du pipetterer f.eks. 1 µL, velg en 0,25 – 2,5 µL pipette og matchende spiss i stedet for en 1 – 10 µL pipette.
2. Kalibrering og vedlikehold: Det er viktig at pipettene dine er riktig kalibrert og vedlikeholdt. Små justeringer og ødelagte deler på en pipette fører til en massiv økning i systematiske og tilfeldige feilverdier. En kalibrering i henhold til ISO 8655 skal utføres en gang i året.
3. Positive forskyvningspipetter: Sjekk om du har en positiv forskyvningspipette med lavt volumområde i laboratoriet. Generelt fører bruk av denne typen pipetter til et bedre pipeteringsresultat når det gjelder nøyaktighet og presisjon enn med klassiske luftputepipetter.
4. Prøv å bruke større volumer: Du kan vurdere å fortynne prøven for å pipettere større volumer med samme mengde i den endelige reaksjonen. Dette kan redusere pipetteringsfeil med svært små prøvevolumer.

I tillegg til et godt verktøy må forskeren ha en meget god pipetteteknikk. Vær spesielt oppmerksom på følgende trinn:

1. Spissfeste: Ikke sett pipetten fast på spissen, da dette kan skade den fine spissenden føre til at væskestrålen omdirigeres eller skade åpningen. Bruk kun lett trykk når du fester en spiss og bruk en pipette med en fjærbelastet spisskjegle.
2. Holde pipetten: Ikke hold pipetten i hånden mens du venter på sentrifugen, sykleren osv. Innsiden av pipetten vil varmes opp og føre til at luftputen utvider seg, noe som resulterer i avvik fra innstilt volum ved pipettering.
3. Forfukting: Fuktingen av luften inne i tuppen og pipetten forbereder tuppen for prøven og unngår fordampning ved aspirering av overføringsvolumet.
4. Vertikal aspirasjon: Dette er svært viktig ved håndtering av små volumer for å unngå kapillæreffekten som oppstår når pipetten holdes i vinkel.
5. Neddykkingsdybde: Senk spissen så lite som mulig for å hindre at væske kommer inn i spissen på grunn av kapillæreffekten. Tommelfingerregel: Jo mindre spiss og volum, desto lavere nedsenkningsdybde. Vi anbefaler maksimalt 2 mm ved pipettering av små volumer.
6. Dispensering ved 45° vinkel: Optimal flyt ut av væsken er garantert når pipetten holdes i en 45° vinkel.
7. Kontakt med karvegg eller væskeoverflate: Små volumer kan kun dispenseres riktig når spissen holdes mot karveggen, eller senkes ned i væske. Selv den siste dråpen fra spissen kan dispenseres nøyaktig.
8. Utblåsing: En utblåsning er obligatorisk etter uttak av lave volumer for å dispensere selv den siste dråpen væske som er tilstede i spissen. Utblåsingen bør også utføres mot karveggen. Vær forsiktig så du ikke får luftbobler inn i prøven når du utfører en utblåsing på væskeoverflaten.