Hoe een PCR-plaat te verzegelen

Invoering

PCR-platen, al jaren een belangrijk onderdeel van het laboratorium, worden in de moderne omgeving zelfs nog belangrijker naarmate laboratoria hun doorvoer opschalen en steeds meer automatisering binnen hun workflows toepassen. Het bereiken van deze doelstellingen met behoud van de nauwkeurigheid en integriteit van experimenten kan moeilijk zijn. Een van de meest voorkomende gebieden waar fouten kunnen binnensluipen is het verzegelen vanPCR-platen, met een slechte techniek die verdamping van monsters mogelijk maakt, de pH verandert en daardoor de enzymatische functies verstoort, en besmetting uitlokt. Leren hoe je eenPCR-plaatelimineert deze risico's op de juiste manier en zorgt voor reproduceerbare resultaten.

Vind de juiste afdichting voor uw PCR-plaat

Plaatdoppen versus filmzegels versus deksels
Doppenzijn een goede manier om uw bord goed af te sluiten, terwijl u toch de flexibiliteit heeft om de plaat heel gemakkelijk te openen en opnieuw te sluiten wanneer u dat wilt, zonder verspilling. Caps hebben echter een aantal belangrijke nadelen.

Ten eerste moet je de specifieke dop kopen die compatibel is, waardoor ze niet veelzijdig zijn. U moet ervoor zorgen dat de dop die u kiest op de plaat past, die afhankelijk is van de fabrikant, en een koepelvormige of platte keuze maken op basis van de thermocycler die u gebruikt.

Ten tweede kan het aanbrengen van de doppen op de plaat zeer repetitief en vervelend zijn, met het risico op kruisbesmetting als u de verkeerde dop op de verkeerde put plaatst.

Hoewel filmafdichtingen minder flexibel zijn in termen van verwijderen en vervangen, zijn ze zeer veelzijdig omdat ze op elk type PCR-plaat passen, ongeacht wie de fabrikant is. Ze kunnen eenvoudig op maat worden geknipt, waardoor ze zeer effectief zijn.

Een andere optie is een bordendeksel. Deze bieden minder bescherming dan doppen en afdichtingen en worden voornamelijk alleen gebruikt voor korte termijn dekking om besmetting te voorkomen.

Optische versus foliefilmafdichtingen

Of u nu een optische, heldere afdichting of eenaluminiumfolie filmhet verzegelen van uw bord wordt bepaald door uw experimentele formaat.Optische afdichtingsfilmszijn transparant zodat u monsters kunt observeren, terwijl u ze toch beschermt en verdamping voorkomt. Ze zijn ook bijzonder nuttig bij qPCR-experimenten waarbij zeer nauwkeurige metingen van de fluorescentie rechtstreeks vanaf de plaat worden uitgevoerd. In dat geval heeft u een afdichtingsfilm nodig die zo min mogelijk fluorescentie filtert. Het is belangrijk om ervoor te zorgen dat de afdichting of dop die u gebruikt een voldoende hoog niveau van optische helderheid heeft om ervoor te zorgen dat de metingen nauwkeurig zijn.

Foliefilms zijn geschikt voor alle monsters die lichtgevoelig zijn of bij een temperatuur beneden 80°C moeten worden bewaard. Om deze reden hebben de meeste monsters die bestemd zijn voor langdurige opslag een foliefilm nodig. Foliefilms zijn ook doorprikbaar, wat handig is voor het onderzoeken van individuele putjes of voor het overbrengen van monsters met naalden. Dit kan handmatig gebeuren of als onderdeel van een robotplatform.

Houd er ook rekening mee dat agressieve stoffen zoals zuren, basen of oplosmiddelen een afdichting nodig hebben die hiertegen bestand is. In dat geval is een folieverzegeling waarschijnlijk geschikter.

Kleefmiddel versus hitteafdichtingsfilm
Zelfklevende filmafdichtingenzijn zeer eenvoudig en gemakkelijk toe te passen. Het enige dat u nodig heeft, is dat een gebruiker de afdichting op de plaat aanbrengt en een eenvoudig applicatorgereedschap gebruikt om naar beneden te drukken en een goede afdichting te vormen.

Heatseals zijn geavanceerder en zorgen voor een duurzamere afdichting die de verdampingssnelheid verlaagt in vergelijking met een conventionele zelfklevende afdichting. Deze optie is geschikt als u monsters voor de lange termijn wilt opslaan, hoewel dit wel een extra vereiste voor plaatafdichtingsapparatuur met zich meebrengt.

Hoe een PCR-plaat te verzegelen

Plaatafdichtingsmethode

Zelfklevend

1. Zorg ervoor dat u op een vlakke en stabiele werkplek werkt

2. Haal de film uit de verpakking en verwijder de achterkant

3. Plaats de afdichting voorzichtig op de plaat en zorg ervoor dat alle putjes bedekt zijn

4. Gebruik een applicator om druk uit te oefenen over de plaat. Begin vanaf het ene uiteinde en werk je een weg naar het andere, waarbij je gelijkmatig drukt

5. Herhaal dit meerdere keren

6. Laat uw applicator rond de buitenste putjes lopen, om er zeker van te zijn dat deze ook goed afgedicht zijn.

Hitteafdichtingen

Heat seals werken door de film aan de rand van elk putje te smelten, met behulp van een plaatafdichter. Raadpleeg voor het gebruik van een heatsealer de instructies van de fabrikant van de apparatuur. Zorg ervoor dat de fabrikant waar u uw apparatuur vandaan haalt een goede reputatie heeft, aangezien het erg belangrijk is dat de afdichting goed, effectief en waterdicht is.

Toptips voor plaatafdichting

A. Wanneer u druk uitoefent op de afdichting, ga dan in zowel horizontale als verticale richting om een ​​goede afdichting te garanderen

B. Het is altijd een goede gewoonte om een ​​proefrit te maken van wat u ook doet, en dit is bij plaatafdichting niet anders. Test met een lege plaat voordat u er een met monsters gebruikt.

C. Verwijder tijdens het testen de afdichting en controleer of de lijm goed vastzit, zonder gaten. In het eerste referentiedocument staat hiervan een visuele weergave. Als u de plaat niet goed heeft afgedicht, zullen er bij het verwijderen van de verzegeling gaten ontstaan ​​waar de lijm zich niet volledig aan de plaat heeft gehecht.

D. Voor het verzenden en vervoeren van monsters kan het handig zijn om een ​​plastic verzegeling bovenop de folieverzegeling aan te brengen voor extra bescherming (vooral tegen doorboren).

e. Zorg er altijd voor dat er geen oneffenheden of rimpels ontstaan ​​bij het aanbrengen van de folie; deze veroorzaken lekkages en verdamping