सफल एम्प्लीफिकेशन प्रतिक्रियाहरूको लागि, प्रत्येक तयारीमा व्यक्तिगत प्रतिक्रिया घटकहरू सही एकाग्रतामा उपस्थित हुनु आवश्यक छ। थप रूपमा, यो महत्त्वपूर्ण छ कि कुनै प्रदूषण हुँदैन।
विशेष गरी जब धेरै प्रतिक्रियाहरू सेट-अप गर्नुपर्ने हुन्छ, प्रत्येक भाँडामा प्रत्येक अभिकर्मकलाई अलग-अलग पाइपिंग गर्नुको सट्टा तथाकथित मास्टर मिक्स तयार गर्न स्थापना गरिएको छ। पूर्व-कन्फिगर गरिएको मिक्सहरू व्यावसायिक रूपमा उपलब्ध छन्, जसमा केवल नमूना-विशिष्ट कम्पोनेन्टहरू (प्राइमर) र पानी थपिन्छन्। वैकल्पिक रूपमा, मास्टर मिश्रण आफैले तयार गर्न सकिन्छ। दुबै भेरियन्टहरूमा, मिश्रणलाई टेम्प्लेट बिना प्रत्येक पीसीआर पोतमा वितरण गरिन्छ र व्यक्तिगत डीएनए नमूनालाई अन्तमा छुट्टै थपिन्छ।
मास्टर मिक्स प्रयोग गर्दा धेरै फाइदाहरू छन्: पहिलो, एकल पाइपिङ चरणहरूको संख्या घटाइन्छ। यस तरिकाले, पाइपिङको समयमा प्रयोगकर्ता त्रुटिहरूको जोखिम र प्रदूषणको जोखिम कम हुन्छ र, अवश्य पनि, समय बचत हुन्छ। सिद्धान्तमा, पाइपिङ शुद्धता पनि उच्च छ, किनकि ठूला मात्राहरू डोज गरिएका छन्। pipettes को प्राविधिक डेटा जाँच गर्दा यो बुझ्न सजिलो छ: सानो खुराक भोल्युम, उच्च विचलन हुन सक्छ। सबै तयारीहरू एउटै पोतबाट आउँछ भन्ने तथ्यले एकरूपतामा सकारात्मक प्रभाव पार्छ (यदि राम्ररी मिश्रित भएमा)। यसले प्रयोगहरूको पुनरुत्पादन क्षमतामा पनि सुधार गर्दछ।
मास्टर मिक्स तयार गर्दा, कम्तिमा 10% अतिरिक्त भोल्युम थप्नुपर्छ (जस्तै यदि 10 तयारी आवश्यक छ भने, 11 को आधारमा गणना गर्नुहोस्), ताकि अन्तिम भाँडा पनि राम्रोसँग भरियोस्। यस तरिकाले, (थोरै) पाइपिङ अशुद्धताहरू, र डिटर्जेंट युक्त समाधानहरू डोज गर्दा नमूना हानिको प्रभावलाई क्षतिपूर्ति गर्न सकिन्छ। डिटर्जेन्टहरू इन्जाइम समाधानहरू जस्तै पोलिमेरासेस र मास्टर मिक्सहरूमा समावेश हुन्छन्, जसले फोम गठन र सामान्य भित्री सतहमा अवशेषहरू निम्त्याउँछ।पिपेट सुझावहरू.
आवेदन र वितरण गरिने तरल प्रकार को आधार मा, सही पाइपिङ प्रविधि (1) छनोट र उपयुक्त उपकरण चयन गर्नुपर्छ। डिटर्जेन्ट युक्त समाधानहरूको लागि, एयर-कुशन पिपेटहरूको विकल्पको रूपमा सीधा विस्थापन प्रणाली वा तथाकथित "लो रिटेन्सन" पिपेट टिपहरू सिफारिस गरिन्छ। को प्रभावACE PIPETTE टिपविशेष गरी हाइड्रोफोबिक सतहमा आधारित छ। डिटर्जेन्ट युक्त तरल पदार्थहरूले भित्र र बाहिर अवशेष फिल्म छोड्दैनन्, ताकि समाधानको क्षतिलाई कम गर्न सकिन्छ।
सबै कम्पोनेन्टहरूको सही डोजिङ बाहेक, यो पनि महत्त्वपूर्ण छ कि तयारीहरूको कुनै प्रदूषण हुँदैन। यो उच्च शुद्धताको उपभोग्य वस्तुहरू प्रयोग गर्न पर्याप्त छैन, किनभने एयर कुशन पिपेटमा पाइपिङ प्रक्रियाले पिपेटमा रहन सक्ने एरोसोलहरू उत्पादन गर्न सक्छ। एरोसोलमा समावेश हुन सक्ने DNA निम्न पाइपिङ चरणमा एक नमूनाबाट अर्को नमूनामा स्थानान्तरण गर्न सकिन्छ र यसरी दूषित हुन सक्छ। माथि उल्लिखित प्रत्यक्ष विस्थापन प्रणालीहरूले पनि यो जोखिमलाई कम गर्न सक्छ। एयर-कुशन पिपेटहरूका लागि स्प्ल्याशहरू, एरोसोलहरू, र बायोमोलिक्युलहरू कायम राखेर पिपेट कोनलाई सुरक्षित गर्न फिल्टर सुझावहरू प्रयोग गर्नु अर्थपूर्ण हुन्छ।
पोस्ट समय: डिसेम्बर-06-2022