Cryovialsतरल नाइट्रोजनले भरिएको देवरहरूमा सेल लाइनहरू र अन्य महत्वपूर्ण जैविक सामग्रीहरूको क्रायोजेनिक भण्डारणको लागि सामान्यतया प्रयोग गरिन्छ।

तरल नाइट्रोजनमा कोशिकाहरूको सफल संरक्षणमा धेरै चरणहरू समावेश छन्। जबकि आधारभूत सिद्धान्त एक ढिलो फ्रिज हो, प्रयोग गरिएको सही प्रविधि सेल प्रकार र प्रयोग गरिएको क्रायोप्रोटेक्टेन्टमा निर्भर गर्दछ। यस्तो कम तापक्रममा कक्षहरू भण्डारण गर्दा ध्यानमा राख्नु पर्ने धेरै सुरक्षा विचारहरू र उत्तम अभ्यासहरू छन्।

यो पोष्टले तरल नाइट्रोजनमा क्रायोभियल कसरी भण्डारण गरिन्छ भन्ने बारे एक सिंहावलोकन दिने उद्देश्य राख्छ।

Cryovials के हो

Cryovials साना, धेरै कम तापक्रम मा तरल नमूनाहरू भण्डारण गर्न डिजाइन गरिएको क्याप शीशीहरू हुन्। तिनीहरूले सुनिश्चित गर्छन् कि क्रायोप्रोटेक्टेन्टमा संरक्षित कोशिकाहरू तरल नाइट्रोजनसँग प्रत्यक्ष सम्पर्कमा आउँदैनन्, तरल नाइट्रोजनको चरम शीतलन प्रभावबाट लाभान्वित हुँदा सेलुलर फ्र्याक्चरको जोखिमलाई कम गर्दै।

शीशीहरू सामान्यतया भोल्युम र डिजाइनहरूको दायरामा उपलब्ध हुन्छन् - तिनीहरू भित्री वा बाह्य रूपमा फ्ल्याट वा गोलाकार बटमहरूसँग थ्रेड गरिएको हुन सक्छ। बाँझ र गैर बाँझ ढाँचाहरू पनि उपलब्ध छन्।

कसले प्रयोग गर्छसाइरोभियलतरल नाइट्रोजन मा सेल भण्डारण गर्न

NHS र निजी प्रयोगशालाहरूको दायरा, साथै कर्ड ब्लड बैंकिङ, एपिथेलियल सेल जीवविज्ञान, इम्युनोलोजी र स्टेम सेल जीवविज्ञानमा विशेषज्ञता प्राप्त अनुसन्धान संस्थाहरूले कोशिकाहरूलाई क्रायोभियलहरू प्रयोग गर्छन्।

यसरी संरक्षित कोशिकाहरूमा बी र टी सेलहरू, सीएचओ सेलहरू, हेमाटोपोएटिक स्टेम र प्रोजेनिटर सेलहरू, हाइब्रिडोमास, आन्द्रा कोशिकाहरू, म्याक्रोफेजहरू, मेसेन्काइमल स्टेम र प्रोजेनिटर सेलहरू, मोनोसाइट्स, माइलोमा, एनके सेलहरू र प्लुरिपोटेन्ट स्टेम सेलहरू समावेश छन्।

तरल नाइट्रोजनमा क्रायोभियलहरू कसरी भण्डार गर्ने भन्ने बारे सिंहावलोकन

Cryopreservation एउटा प्रक्रिया हो जसले कोशिकाहरू र अन्य जैविक संरचनाहरूलाई धेरै कम तापक्रममा चिसो गरेर सुरक्षित राख्छ। कोशिकाहरूलाई तरल नाइट्रोजनमा वर्षौंसम्म कोशिकाको व्यवहार्यताको हानि बिना भण्डारण गर्न सकिन्छ। यो नियोजित प्रक्रियाहरूको रूपरेखा हो।

सेल तयारी

नमूनाहरू तयार गर्नको लागि सही विधि सेल प्रकारको आधारमा भिन्न हुन्छ, तर सामान्यतया, सेलहरू एकत्रित र सेन्ट्रीफ्युज गरी सेल-रिच गोली विकास गर्न सकिन्छ। यस गोलीलाई त्यसपछि क्रायोप्रोटेक्टेन्ट वा क्रायोप्रिजर्भेसन माध्यमसँग मिलाएर सुपरनेटान्टमा पुन: निलम्बन गरिन्छ।

Cryopreservation माध्यम

यो माध्यम कम-तापमान वातावरणमा कोशिकाहरू जोगाउनको लागि प्रयोग गरिन्छ जुन तिनीहरूको अधीनमा हुनेछन् इन्ट्रा र एक्स्ट्रासेलुलर क्रिस्टलहरूको गठनलाई रोकेर र यसैले कोशिकाको मृत्यु। तिनीहरूको भूमिका फ्रिजिङ, भण्डारण, र पग्लने प्रक्रियाहरूमा कोशिकाहरू र तन्तुहरूको लागि सुरक्षित, सुरक्षात्मक वातावरण प्रदान गर्नु हो।

ताजा फ्रोजन प्लाज्मा (FFP), हेपरिनाइज्ड प्लाज्मालाइट समाधान वा सीरम-रहित, जनावरको कम्पोनेन्ट-मुक्त समाधानहरू जस्तै डाइमिथाइल सल्फोक्साइड (DMSO) वा ग्लिसरोल जस्ता क्रायोप्रोटेक्टेन्टहरूसँग मिसाइन्छ।

पुन: तरल नमूना गोली पोलीप्रोपाइलीन क्रायोभियलमा अलग गरिएको छ जस्तैSuzhou Ace बायोमेडिकल कम्पनी क्रायोजेनिक भण्डारण शीशी.

क्रायोभियलहरू ओभरफिल नगर्नु महत्त्वपूर्ण छ किनकि यसले क्र्याकिंगको जोखिम र सामग्रीको सम्भावित रिलिज बढाउनेछ (१)।

नियन्त्रित फ्रिज दर

सामान्यतया, एक ढिलो नियन्त्रित फ्रिज दर कोशिकाहरूको सफल cryopreservation को लागी कार्यरत छ।

नमूनाहरू क्रायोजेनिक शीशीहरूमा अलग गरिसकेपछि, तिनीहरूलाई भिजेको बरफमा वा 4 ℃ फ्रिजमा राखिन्छ र 5 मिनेट भित्र फ्रिज गर्ने प्रक्रिया सुरु हुन्छ। सामान्य गाइडको रूपमा, कक्षहरू -1 देखि -3 प्रति मिनेट (2) को दरमा चिसो हुन्छन्। यो प्रोग्रामेबल कूलर प्रयोग गरेर वा -70°C देखि -90°C नियन्त्रित दर फ्रीजरमा राखिएको इन्सुलेटेड बक्समा शीशीहरू राखेर प्राप्त गरिन्छ।

तरल नाइट्रोजनमा स्थानान्तरण गर्नुहोस्

जमे भएका क्रायोजेनिक शीशहरूलाई अनिश्चित अवधिका लागि तरल नाइट्रोजन ट्याङ्कीमा स्थानान्तरण गरिन्छ यदि -१३५ डिग्री सेल्सियसभन्दा कम तापक्रम कायम राखिएको हुन्छ।

यी अति कम तापमान तरल वा वाष्प चरण नाइट्रोजन मा डुबाएर प्राप्त गर्न सकिन्छ।

तरल वा भाप चरण?

तरल चरण नाइट्रोजनमा भण्डारण पूर्ण स्थिरता संग चिसो तापक्रम कायम राख्न जानिन्छ, तर प्राय: निम्न कारणहरूको लागि सिफारिस गरिएको छैन:

• तरल नाइट्रोजन को ठूलो मात्रा (गहिराई) को आवश्यकता छ जुन एक सम्भावित खतरा हो। यसको कारणले जलेको वा श्वासप्रश्वास एक वास्तविक जोखिम हो।
• एस्परगिलस, हेप बी र तरल नाइट्रोजन माध्यम (२,३) मार्फत भाइरल फैलाउने जस्ता संक्रामक एजेन्टहरूद्वारा क्रस-प्रदूषणका दस्तावेज गरिएका केसहरू।
• तरल नाइट्रोजन विसर्जन गर्दा शीशीहरूमा चुहावट हुने सम्भावना। जब भण्डारणबाट हटाइन्छ र कोठाको तापक्रममा न्यानो हुन्छ, नाइट्रोजन द्रुत रूपमा विस्तार हुन्छ। फलस्वरूप, तरल नाइट्रोजन भण्डारणबाट हटाइएपछि शीशी चकनाचुर हुन सक्छ, उडान मलबे र सामग्रीहरूको जोखिम दुवैबाट खतरा सिर्जना गर्दछ (1, 4)।

यी कारणहरूका लागि, अति कम तापक्रम भण्डारण वाष्प चरण नाइट्रोजनमा प्रायः हुन्छ। जब नमूनाहरू तरल चरणमा भण्डारण गर्नुपर्छ, विशेष क्रायोफ्लेक्स ट्युबिङ प्रयोग गर्नुपर्छ।

वाष्प चरणको नकारात्मक पक्ष भनेको ऊर्ध्वाधर तापमान ढाँचा हुन सक्छ जसको परिणामस्वरूप -135 ℃ र -190 ℃ बीचको तापमान उतार-चढ़ाव हुन्छ। यसले तरल नाइट्रोजन स्तर र तापमान भिन्नताहरूको सावधान र लगनशील अनुगमन आवश्यक छ (5)।

धेरै निर्माताहरूले सिफारिस गर्छन् कि क्रायोभियलहरू -135 ℃ सम्म भण्डारण गर्न वा वाष्प चरणमा मात्र प्रयोगको लागि उपयुक्त छन्।

तपाईंको क्रायोप्रिजर्वेड कोशिकाहरू पग्लँदै

जमेको संस्कृतिको लागि पग्लने प्रक्रिया तनावपूर्ण हुन्छ, र कोशिकाहरूको इष्टतम व्यवहार्यता, रिकभरी र कार्यक्षमता सुनिश्चित गर्न उचित ह्यान्डलिंग र प्रविधि आवश्यक हुन्छ। सटीक गलाउने प्रोटोकलहरू विशिष्ट सेल प्रकारहरूमा निर्भर हुनेछ। यद्यपि, छिटो पग्लिनेलाई मानक मानिन्छ:

• सेलुलर रिकभरीमा कुनै पनि प्रभाव घटाउनुहोस्
• फ्रिजिङ मिडियामा उपस्थित सोल्युटहरूमा एक्सपोजर समय कम गर्न मद्दत गर्नुहोस्
• आइस रिक्रिस्टलाइजेशन द्वारा कुनै पनि क्षति कम गर्नुहोस्

पानी नुहाउने, मनका नुहाउने, वा विशेष स्वचालित उपकरणहरू सामान्यतया नमूनाहरू पग्लन प्रयोग गरिन्छ।

प्राय: 1 सेल लाइनलाई 1-2 मिनेटको लागि एक पटकमा पग्लिन्छ, बिस्तारै 37 डिग्रीको पानीको नुहाउने ठाउँमा घुमाइन्छ जबसम्म शीशीमा अलिकति बरफ बाँकी रहँदैन जबसम्म तिनीहरू पूर्व-तयार गरिएको विकास माध्यममा धुनु अघि।

स्तनधारी भ्रूण जस्ता केही कोशिकाहरूको लागि, तिनीहरूको अस्तित्वको लागि ढिलो तापक्रम आवश्यक छ।

कोशिकाहरू अब सेल कल्चर, सेल आइसोलेसन, वा हेमाटोपोएटिक स्टेम सेलहरूको मामलामा तयार छन् - माइलोएब्लेटिभ थेरापी अघि डोनर स्टेम सेलहरूको अखण्डताको ग्यारेन्टी गर्न व्यवहार्यता अध्ययन।

कल्चरमा प्लेटिङको लागि सेल सांद्रता निर्धारण गर्न सेल गणना गर्न प्रयोग गरिने प्रि-वॉश गरिएको नमूनाको सानो एलीकोट्स लिनु सामान्य अभ्यास हो। त्यसपछि तपाइँ सेल अलगाव प्रक्रियाहरूको नतिजाहरू मूल्याङ्कन गर्न सक्नुहुन्छ र सेल व्यवहार्यता निर्धारण गर्न सक्नुहुन्छ।

Cryovials को भण्डारण को लागी उत्तम अभ्यासहरु

क्रायोभियलमा भण्डारण गरिएका नमूनाहरूको सफल क्रायोप्रीजरभेसन उचित भण्डारण र रेकर्ड राख्ने सहित प्रोटोकलमा धेरै तत्वहरूमा निर्भर गर्दछ।

• भण्डारण स्थानहरू बीच कक्षहरू विभाजन गर्नुहोस्- यदि भोल्युमले अनुमति दिन्छ भने, कोशिकाहरू बिचमा विभाजन गर्नुहोस् र उपकरणहरू विफलताका कारण नमूना हराउने जोखिम कम गर्न तिनीहरूलाई छुट्टै स्थानहरूमा भण्डार गर्नुहोस्।
• क्रस-प्रदूषण रोक्नुहोस्- पछिको प्रयोग गर्नु अघि एकल-प्रयोग बाँझ क्रायोजेनिक शीशी वा अटोक्लेभको लागि रोज्नुहोस्
• तपाईंको कक्षहरूको लागि उपयुक्त आकारको शीशीहरू प्रयोग गर्नुहोस्- शीशीहरू 1 र 5mls बीचको भोल्युमको दायरामा आउँछन्। क्र्याकिंगको जोखिम कम गर्न शीशीहरू ओभरफिल नगर्नुहोस्।
• आन्तरिक वा बाह्य थ्रेडेड क्रायोजेनिक शीशीहरू चयन गर्नुहोस्- आन्तरिक थ्रेडेड शीशीहरू सुरक्षा उपायहरूका लागि केही विश्वविद्यालयहरूले सिफारिस गरेका छन् - तिनीहरूले भरिने क्रममा वा तरल नाइट्रोजनमा भण्डारण गर्दा प्रदूषण रोक्न पनि सक्छन्।
• चुहावट रोक्नुहोस्- चुहावट र दूषित हुनबाट जोगाउन स्क्रू-क्याप वा ओ-रिंगहरूमा मोल्ड गरिएको द्वि-इन्जेक्टेड सिलहरू प्रयोग गर्नुहोस्।
• 2D बारकोड र लेबल शीशीहरू प्रयोग गर्नुहोस्- ट्रेसिबिलिटी सुनिश्चित गर्न, ठूला लेखन क्षेत्रहरू भएका शीशीहरूले प्रत्येक शीशीलाई पर्याप्त लेबल गर्न सक्षम बनाउँदछ। 2D बारकोडहरूले भण्डारण व्यवस्थापन र रेकर्ड राख्न मद्दत गर्न सक्छ। रङ कोडेड टोपीहरू सजिलो पहिचानको लागि उपयोगी छन्।
• पर्याप्त भण्डारण मर्मतसम्भार- कोशिकाहरू हराएको छैन भनेर सुनिश्चित गर्न, भण्डारण भाँडाहरूले तापमान र तरल नाइट्रोजन स्तरहरू निरन्तर निगरानी गर्नुपर्छ। त्रुटिहरूको प्रयोगकर्ताहरूलाई सचेत गराउन अलार्महरू फिट हुनुपर्छ।

सुरक्षा सावधानीहरू

तरल नाइट्रोजन आधुनिक अनुसन्धानमा सामान्य अभ्यास भएको छ तर गलत तरिकाले प्रयोग गर्दा गम्भीर चोटपटक लाग्ने खतरा हुन्छ।

तरल नाइट्रोजन ह्यान्डल गर्दा फ्रस्टबाइट, जलेको र अन्य प्रतिकूल घटनाहरूको जोखिम कम गर्न उचित व्यक्तिगत सुरक्षा उपकरण (पीपीई) लगाउनुपर्छ। लगाउनुहोस्

• क्रायोजेनिक दस्ताने
• प्रयोगशाला कोट
• प्रभाव प्रतिरोधी पूर्ण अनुहार ढाल जसले घाँटी पनि ढाक्छ
• बन्द खुट्टाको जुत्ता
• Splashproof प्लास्टिक एप्रन

तरल नाइट्रोजन रेफ्रिजरेटरहरू वायुमण्डलीय अक्सिजनको जोखिमलाई कम गर्नको लागि राम्रोसँग हावा चल्ने ठाउँहरूमा राख्नुपर्छ - नाइट्रोजन वाष्पीकरण हुन्छ र वायुमण्डलीय अक्सिजनलाई विस्थापित गर्दछ। ठूला भोल्युम स्टोरहरूमा कम अक्सिजन अलार्म सिस्टम हुनुपर्छ।

तरल नाइट्रोजन ह्यान्डल गर्दा जोडीमा काम गर्नु आदर्श हो र यसको प्रयोग सामान्य कार्य घण्टा भन्दा बाहिर निषेधित हुनुपर्छ।

तपाईंको कार्यप्रवाहलाई समर्थन गर्न क्रायोभियलहरू

Suzhou Ace बायोमेडिकल कम्पनीले विभिन्न प्रकारका कोशिकाहरूका लागि तपाईंको क्रायोप्रीजरभेसन आवश्यकताहरू पूरा गर्ने उत्पादनहरूको विस्तृत चयन प्रदान गर्दछ। पोर्टफोलियोमा ट्युबहरूको दायराका साथै बाँझ क्रायोभियलहरूको दायरा समावेश छ।

हाम्रो क्रायोभियलहरू हुन्:

• ल्याब स्क्रू क्याप ०.५ एमएल १.५ एमएल २.० एमएल क्रायोभियल क्रायोजेनिक भाइल्स कोनिकल बटम क्रायोट्यूब ग्यास्केट सहित

  ● ०.५ एमएल, १.५ एमएल, २.० एमएल विनिर्देश, स्कर्ट सहित वा स्कर्ट बिना
  ● कोनिकल वा सेल्फ स्ट्यान्डिङ डिजाइन, बाँझ वा गैर बाँझ दुवै उपलब्ध छन्
  ● स्क्रू क्याप ट्यूबहरू मेडिकल ग्रेड पोलीप्रोपाइलिनबाट बनेका हुन्छन्
  ● PP Cryotube Vials लाई बारम्बार जम्मा र पगाल्न सकिन्छ
  ● बाह्य टोपी डिजाइन नमूना उपचार समयमा प्रदूषण सम्भावना कम गर्न सक्छ।
  ● स्क्रू क्याप क्रायोजेनिक ट्यूबहरू प्रयोगको लागि विश्वव्यापी स्क्रू थ्रेडहरू
  ● ट्यूबहरू सबैभन्दा सामान्य रोटरहरूमा फिट हुन्छन्
  ● क्रायोजेनिक ट्यूब ओ-रिङ ट्यूबहरू मानक 1-इन्च र 2-इन्च, 48वेल, 81वेल，96वेल र 100वेल फ्रिजर बक्सहरूमा फिट हुन्छन्।
  ● 121°C सम्म अटोक्ल्याभ योग्य र -86°C सम्म फ्रिज गर्न मिल्ने

  भाग नं	सामग्री	भोल्युम	CAPरङ	PCS/झोला	झोला/केस
  ACT05-BL-N	PP	०.५ एमएल	कालो, पहेंलो, नीलो, रातो, बैजनी, सेतो	५००	10
  ACT15-BL-N	PP	1.5ML	कालो, पहेंलो, नीलो, रातो, बैजनी, सेतो	५००	10
  ACT15-BL-NW	PP	1.5ML	कालो, पहेंलो, नीलो, रातो, बैजनी, सेतो	५००	10
  ACT20-BL-N	PP	2.0ML	कालो, पहेंलो, नीलो, रातो, बैजनी, सेतो	५००	10