प्रक्रियाहरूको मानकीकरणमा तिनीहरूको अप्टिमाइजेसन र त्यसपछिको स्थापना र सामंजस्य समावेश छ, जसले दीर्घकालीन इष्टतम प्रदर्शनलाई अनुमति दिन्छ - प्रयोगकर्ताबाट स्वतन्त्र। मानकीकरणले उच्च-गुणस्तरको नतिजाहरू, साथै तिनीहरूको पुन: उत्पादन र तुलनात्मकता सुनिश्चित गर्दछ।
(क्लासिक) पीसीआर को लक्ष्य एक भरपर्दो र पुन: उत्पादन योग्य परिणाम को उत्पादन हो। केहि अनुप्रयोगहरूको लागि, को उपजPCR उत्पादनपनि सान्दर्भिक छ। यी प्रतिक्रियाहरूको लागि, नमूनाहरू सम्झौता नगरिएको र PCR कार्यप्रवाह स्थिर रहन्छ भनेर सुनिश्चित गर्न सावधानी अपनाउनु पर्छ। विशेष रूपमा, यसले झूटा सकारात्मक वा गलत नकारात्मक नतिजाहरू निम्त्याउन वा PCR प्रतिक्रियालाई पनि रोक्न सक्ने दूषित पदार्थहरूको परिचयलाई कम गर्न अनुवाद गर्दछ। यसबाहेक, प्रतिक्रिया अवस्थाहरू एक रन भित्र प्रत्येक व्यक्तिगत नमूनाको लागि सकेसम्म समान हुनुपर्छ र पछि प्रतिक्रियाहरू (उही विधिको) मा स्थानान्तरण योग्य हुनुपर्छ। यसले प्रतिक्रियाहरूको संरचना र साइकलमा तापमान नियन्त्रणको प्रकारलाई जनाउँछ। प्रयोगकर्ता त्रुटिहरू, अवश्य पनि, सकेसम्म धेरै बेवास्ता गर्न सकिन्छ।
तल, हामी PCR को तयारीका क्रममा सामना गर्ने चुनौतीहरू र PCR कार्यप्रवाहको मानकीकरणका लागि प्रयोग गरिएका उपकरणहरू र उपभोग्य वस्तुहरूको सन्दर्भमा अवस्थित समाधानहरूको दृष्टिकोणहरू प्रदर्शन गर्नेछौं।
प्रतिक्रिया तयारी
PCR-भाँडाहरू, वा प्लेटहरूमा प्रतिक्रिया घटकहरूको वितरण क्रमशः, धेरै चुनौतीहरू समावेश गर्दछ जुन पार गर्नुपर्दछ:
प्रतिक्रिया अवस्थाहरू
सम्भव भएसम्म समान प्रतिक्रिया अवस्थाहरूको लागि लक्ष्य गर्दा व्यक्तिगत कम्पोनेन्टहरूको सटीक र सटीक खुराक अपरिहार्य हुन्छ। राम्रो पाइपिङ प्रविधिको अतिरिक्त, सही उपकरण चयन महत्वपूर्ण छ। PCR मास्टर-मिक्सहरूमा प्रायः चिल्लोपन बढाउने वा फोम उत्पन्न गर्ने पदार्थहरू हुन्छन्। पाइपिङ प्रक्रियाको बखत, यसले पर्याप्त मात्रामा भिजेको नेतृत्व गर्दछपिपेट सुझावहरू, यसरी पाइपिङ शुद्धता कम गर्दै। प्रत्यक्ष वितरण प्रणाली वा वैकल्पिक पिपेट टिप्सको प्रयोग जुन कम भिज्ने सम्भावना हुन्छ पाइपिङ प्रक्रियाको शुद्धता र परिशुद्धता सुधार गर्न सक्छ।
प्रदुषणहरू
वितरण प्रक्रियाको क्रममा, एरोसोलहरू उत्पन्न हुन्छन्, यदि पिपेटको भित्री भागमा पुग्न अनुमति दिइयो भने, अर्को पाइपिting चरणमा अर्को नमूनालाई सम्भावित रूपमा दूषित गर्न सक्छ। यसलाई फिल्टर टिप्स वा प्रत्यक्ष विस्थापन प्रणाली प्रयोग गरेर रोक्न सकिन्छ।
उपभोग्य वस्तुहरू जस्तैसुझावहरू, PCR कार्यप्रवाहमा प्रयोग हुने भाँडाहरू र प्लेटहरूमा नमूनामा सम्झौता गर्ने वा नतिजालाई झूटो बनाउने पदार्थहरू समावेश हुनु हुँदैन। यसमा DNA, DNases, RNases र PCR अवरोधकहरू, साथै प्रतिक्रियाको क्रममा सामग्रीबाट सम्भावित रूपमा लीच हुन सक्ने कम्पोनेन्टहरू समावेश छन् - लीचेबलहरू भनेर चिनिने पदार्थहरू।
प्रयोगकर्ता त्रुटि
जति धेरै नमूनाहरू प्रशोधन गरिन्छ, त्रुटिको जोखिम त्यति नै उच्च हुन्छ। यो सजिलैसँग हुन सक्छ कि नमूना गलत भाँडा वा गलत इनारमा पाइप गरिएको छ। यस जोखिमलाई इनारहरूको सजिलैसँग चिन्न सकिने मार्किङद्वारा कम गर्न सकिन्छ। वितरण चरणहरूको स्वचालन मार्फत, "मानव कारक" अर्थात्, त्रुटिहरू र प्रयोगकर्ता-सम्बन्धित भिन्नताहरूलाई न्यूनीकरण गरिन्छ, यसरी पुन: उत्पादनशीलता बढ्छ, विशेष गरी सानो प्रतिक्रिया भोल्युमहरूको अवस्थामा। यसको लागि पर्याप्त आयामी स्थिरताको प्लेटहरू कार्यस्थानमा प्रयोग गर्न आवश्यक छ। संलग्न बारकोडहरूले थप मेसिन-पढने योग्यता प्रदान गर्दछ, जसले सम्पूर्ण प्रक्रियामा नमूना ट्र्याकिङलाई सरल बनाउँछ।
Thermocycler को प्रोग्रामिंग
एक उपकरण प्रोग्रामिंग समय-उपभोग साथै त्रुटि-प्रवण साबित हुन सक्छ। विभिन्न PCR थर्मल साइक्लर सुविधाहरू यस प्रक्रिया चरणलाई सरल बनाउन र सबैभन्दा महत्त्वपूर्ण कुरा, यसलाई सुरक्षित बनाउन सँगै काम गर्छन्:
सजिलो सञ्चालन र राम्रो प्रयोगकर्ता मार्गदर्शन कुशल प्रोग्रामिंग को आधार हो। यस आधारमा निर्माण गर्दै, पासवर्ड-सुरक्षित प्रयोगकर्ता प्रशासनले आफ्नै कार्यक्रमहरूलाई अन्य प्रयोगकर्ताहरूद्वारा परिवर्तन हुनबाट रोक्नेछ। यदि धेरै साइकलहरू (एउटै प्रकारका) प्रयोगमा छन् भने, यो लाभदायक छ यदि एक प्रोग्रामलाई USB वा जडान मार्फत सिधै एक उपकरणबाट अर्कोमा स्थानान्तरण गर्न सकिन्छ। कम्प्युटर सफ्टवेयरले कम्प्युटरमा कार्यक्रमहरू, प्रयोगकर्ता अधिकारहरू र कागजातहरूको केन्द्रीय र सुरक्षित प्रशासनलाई सक्षम बनाउँछ।
पीसीआर चलाउने
दौडको समयमा, डीएनए प्रतिक्रिया पोतमा विस्तारित हुन्छ, जहाँ प्रत्येक नमूना समान, लगातार प्रतिक्रिया अवस्थाहरूको अधीनमा हुनुपर्छ। प्रक्रियाको लागि निम्न पक्षहरू सान्दर्भिक छन्:
तापमान नियन्त्रण
तापमान नियन्त्रणमा उत्कृष्ट शुद्धता र साइकल ब्लकको एकरूपता सबै नमूनाहरूको तापक्रम कन्डिसनको आधार हो। ताप र शीतलन तत्वहरूको उच्च गुणस्तर (पेल्टियर तत्वहरू), साथै यी ब्लकमा जडान हुने तरिका, निर्णायक कारकहरू हुन् जसले तापमान विसंगतिको जोखिमलाई "एज इफेक्ट" भनेर चिनिने निर्धारण गर्दछ।
वाष्पीकरण
वाष्पीकरणको कारण प्रतिक्रियाको क्रममा व्यक्तिगत प्रतिक्रिया घटकहरूको सांद्रता परिवर्तन हुनु हुँदैन। अन्यथा, यो धेरै कम सम्भव छPCR उत्पादनउत्पन्न हुन सक्छ, वा कुनै पनि छैन। त्यसैले सुरक्षित छाप सुनिश्चित गरेर वाष्पीकरण कम गर्न महत्त्वपूर्ण छ। यस अवस्थामा, थर्मोसाइकलरको तातो ढक्कन र भाँडाको सिल हातमा काम गर्दछ। विभिन्न सील विकल्पहरू उपलब्ध छन्PCR प्लेटहरू (लिङ्क: छाप लेख), जसमा तातो सील मार्फत उत्तम सील प्राप्त गरिन्छ। अन्य बन्दहरू पनि उपयुक्त हुन सक्छ, जबसम्म साइकल ढक्कनको सम्पर्क दबाब चयन गरिएको छापमा समायोजन गर्न सकिन्छ।
लामो अवधिमा सही र पुन: उत्पादन योग्य परिणामहरू सुरक्षित गर्न प्रक्रिया मानकीकरण स्थानमा छ। यसले सधैं राम्रो काम गर्ने अवस्थामा रहेको सुनिश्चित गर्न उपकरणको नियमित मर्मतसम्भार समावेश गर्दछ। सबै उपभोग्य वस्तुहरू उत्पादित सबै चिट्ठाहरूमा लगातार उच्च गुणस्तरको हुनुपर्छ, र तिनीहरूको भरपर्दो उपलब्धताको ग्यारेन्टी हुनुपर्छ।
पोस्ट समय: नोभेम्बर-29-2022