သီအိုရီအရ၊ ပုံစံပလိတ်တစ်ခု၏ မော်လီကျူးတစ်ခုသည် လုံလောက်သော်လည်း၊ သိသိသာသာပိုကြီးသော DNA များကို ပုံမှန်အားဖြင့် classic PCR တစ်ခုအတွက် အသုံးပြုလေ့ရှိသည်၊ ဥပမာ၊ မျိုးဗီဇနို့တိုက်သတ္တဝါ DNA ၏ 1 µg နှင့် plasmid DNA 1 pg လောက်သာရှိသည်။ အကောင်းဆုံးပမာဏသည် ပစ်မှတ်အစီအစဥ်၏ ကော်ပီအရေအတွက်အပြင် ၎င်း၏ရှုပ်ထွေးမှုအပေါ်တွင် များစွာမူတည်ပါသည်။
နမူနာပုံစံကို အနည်းငယ်သာအသုံးပြုပါက ထုတ်ကုန်ပမာဏလုံလောက်စွာရရှိရန် သက်ဆိုင်ရာ ချဲ့ထွင်မှုစက်ဝန်းအရေအတွက် တိုးလာရန် လိုအပ်မည်ဖြစ်ပါသည်။ PCR စမ်းသပ်မှုအများစုအတွက်အသုံးပြုသည့် Taq polymerase သည် ပြုပြင်ခြင်းလုပ်ဆောင်ချက် (3′-5′ exonuclease လုပ်ဆောင်ချက်) မပါဝင်ပါ။ ထို့ကြောင့် အသံချဲ့စက်အတွင်း ဖြစ်ပေါ်နေသော အမှားများကို ပြုပြင်၍မရပါ။ သံသရာအရေအတွက်များလေ၊ ချို့ယွင်းချက်ရှိသော ထုတ်ကုန်များ၏ ချဲ့ထွင်မှုမှာ ပိုမိုပျံ့နှံ့လေဖြစ်သည်။ အခြားတစ်ဖက်တွင်၊ ပုံစံခွက်ပမာဏသည် မြင့်မားပါက၊ အခြား (တစ်ရာရာခိုင်နှုန်း အခမဲ့မဟုတ်) အစီအစဥ်များနှင့် primer dimers များဖွဲ့စည်းခြင်းကဲ့သို့ primer များကို ပေါင်းထည့်သည့်ဖြစ်နိုင်ခြေ တိုးလာမည်ဖြစ်ပြီး၊ ထုတ်ကုန်များ။ များစွာသောကိစ္စများတွင်၊ DNA ကို ဆဲလ်ယဉ်ကျေးမှုများ သို့မဟုတ် အဏုဇီဝသက်ရှိများမှ သီးခြားခွဲထုတ်ပြီး နောက်ပိုင်းတွင် PCR နမူနာပုံစံအဖြစ် အသုံးပြုသည်။ သန့်စင်ပြီးနောက်၊ PCR စနစ်ထည့်သွင်းမှုအတွက် လိုအပ်သော ပမာဏကို သတ်မှတ်နိုင်စေရန် DNA ၏ အာရုံစူးစိုက်မှုကို ဆုံးဖြတ်ရန် လိုအပ်သည်။ ခန့်မှန်းခြေတစ်ခုအတွက် agarose gel electrophoresis သည် လုပ်ဆောင်နိုင်သော်လည်း၊ ဤနည်းလမ်းသည် တိကျရန်အလှမ်းဝေးပါသည်။ UV-Vis spectrophotometry ကို နျူကလိစ်အက်ဆစ် ပမာဏအတွက် ရွှေစံနှုန်းအဖြစ် ထူထောင်ထားသည်။ ဤတိုက်ရိုက်နှင့် ထို့ကြောင့် လွယ်ကူမြန်ဆန်သောနည်းလမ်းသည် နမူနာ၏စုပ်ယူမှုကို 260 nm ဖြင့်တိုင်းတာပြီး အာရုံစူးစိုက်မှုကို ပြောင်းလဲခြင်းအချက်တစ်ခု၏အကူအညီဖြင့် တွက်ချက်သည်။
DNA အာရုံစူးစိုက်မှု အလွန်နည်းပါက (< 1 µg/mL dsDNA) သို့မဟုတ် 260 nm အကွာအဝေး (ဥပမာ RNA၊ ပရိုတင်း၊ ဆား) တွင် စုပ်ယူနိုင်သော အရာဝတ္ထုများနှင့် ညစ်ညမ်းနေပါက၊ ဤနည်းလမ်းသည် ၎င်း၏ ကန့်သတ်ချက်များသို့ ရောက်ရှိမည်ဖြစ်သည်။ ပြင်းအားအလွန်နည်းသည့်အခြေအနေတွင်၊ ဖတ်ရှုမှုများသည် မကြာမီတွင် အသုံးမဝင်တော့လောက်အောင် မှားယွင်းသွားလိမ့်မည်ဖြစ်ပြီး ညစ်ညမ်းမှုများသည် အမှန်တကယ်တန်ဖိုး၏ (တစ်ခါတစ်ရံ အလွန်ကြီးမားသော) လွန်ကဲမှုဆီသို့ ဦးတည်သွားမည်ဖြစ်သည်။ ဤကိစ္စတွင်၊ fluorescence ကို အသုံးပြု၍ ပမာဏကို တိုင်းတာခြင်းသည် အခြားရွေးချယ်စရာတစ်ခု ဖြစ်နိုင်သည်။ ဤနည်းပညာသည် အလင်းရောင်ကြောင့် စိတ်လှုပ်ရှားနေသော nucleic acid နှင့် dye ပါ၀င်သော ရှုပ်ထွေးသော dsDNA နှင့် အတိအကျ ချိတ်ဆက်ထားသော ချောင်းဆိုးဆေးကို အသုံးပြုခြင်းအပေါ် အခြေခံထားပြီး ၎င်းသည် နောက်ပိုင်းတွင် အနည်းငယ်ပိုမြင့်သော လှိုင်းအလျားကို အလင်းထုတ်လွှတ်မည်ဖြစ်သည်။ ဤတွင်၊ ချောင်းအချက်ပြမှု၏ ပြင်းထန်မှုသည် DNA ပမာဏနှင့် အချိုးကျပြီး အာရုံစူးစိုက်မှုကို ဆုံးဖြတ်ရန်အတွက် ၎င်းကို စံမျဉ်းကွေးတစ်ခုနှင့် ဆက်စပ်၍ အကဲဖြတ်သည်။ ဤနည်းလမ်း၏ အားသာချက်များသည် ညစ်ညမ်းမှုမှ မိတ်ဆက်လာသော ပြင်ပလွှမ်းမိုးမှုများကို ဖယ်ထုတ်ထားသည့်အပြင် DNA ၏ ပြင်းအားအလွန်နည်းသော အာရုံခံနိုင်စွမ်းအပေါ်တွင်သာ တည်ရှိသည်။ နည်းလမ်းနှစ်ခု၏ သင့်လျော်မှုသည် နမူနာအာရုံစူးစိုက်မှုနှင့် သန့်ရှင်းစင်ကြယ်မှုပေါ်တွင် အဓိကမူတည်သည်။ များစွာသော ကိစ္စများတွင် ၎င်းနည်းလမ်းနှစ်ခုလုံးကို တဆက်တည်း ကျင့်သုံးရန် အကြံပြုလိုပါသည်။
စာတိုက်အချိန်- နိုဝင်ဘာ-၃၀-၂၀၂၂