Krijovjalihuma komunement użati għall-ħażna krijoġenika ta 'linji taċ-ċelluli u materjali bijoloġiċi kritiċi oħra, f'dewars mimlija b'nitroġenu likwidu.

Hemm diversi stadji involuti fil-preservazzjoni b'suċċess taċ-ċelloli fin-nitroġenu likwidu. Filwaqt li l-prinċipju bażiku huwa friża bil-mod, it-teknika eżatta użata tiddependi fuq it-tip ta 'ċellula u krijoprotettant użat. Hemm diversi konsiderazzjonijiet ta' sikurezza u l-aħjar prattiki li għandek tqis meta taħżen iċ-ċelloli f'temperaturi daqshekk baxxi.

Din il-kariga għandha l-għan li tagħti ħarsa ġenerali lejn kif il-krijovjali huma maħżuna fin-nitroġenu likwidu.

X'inhuma Cryovials

Il-krijovjali huma kunjetti żgħar b'kappa ddisinjati biex jaħżnu kampjuni likwidi f'temperaturi estremament baxxi. Huma jiżguraw li ċ-ċelloli ppreservati fil-krijoprotettant ma jiġux f'kuntatt dirett man-nitroġenu likwidu, u jimminimizzaw ir-riskju ta 'ksur ċellulari filwaqt li xorta jibbenefikaw mill-effett estrem tat-tkessiħ tan-nitroġenu likwidu.

Il-kunjetti huma ġeneralment disponibbli f'firxa ta 'volumi u disinji - jistgħu jkunu internament jew esternament bil-kamin b'qiegħ ċatt jew tond. Formati sterili u mhux sterili huma wkoll disponibbli.

Min JużaCyrovialsbiex Aħżen Ċelloli f'Nitroġenu Likwidu

Firxa ta 'NHS u laboratorji privati, kif ukoll istituzzjonijiet ta' riċerka li jispeċjalizzaw fl-ibbankjar tad-demm tal-kurdun, il-bijoloġija taċ-ċelluli epiteljali, l-immunoloġija u l-bijoloġija taċ-ċelloli staminali jużaw krijovjali biex jippriservaw iċ-ċelloli.

Iċ-ċelloli ppreservati b'dan il-mod jinkludu Ċelloli B u T, Ċelloli CHO, Ċelloli Stem u Proġenitriċi Ematopojetiċi, Ibridomi, Ċelloli intestinali, Makrofaġi, Ċelloli Stem u Proġenitriċi Mesenkimali, Monoċiti, Myeloma, Ċelloli NK u Ċelloli Staminali Pluripotenti.

Ħarsa ġenerali ta 'Kif Taħżen Cryovials fin-Nitroġenu Likwidu

Il-krijopreservazzjoni hija proċess li jippreserva ċ-ċelloli u kostruzzjonijiet bijoloġiċi oħra billi jkessaħhom għal temperaturi baxxi ħafna. Iċ-ċelloli jistgħu jinħażnu fin-nitroġenu likwidu għal snin mingħajr telf ta 'vijabbiltà taċ-ċelluli. Din hija deskrizzjoni ġenerali tal-proċeduri użati.

Preparazzjoni taċ-Ċelloli

Il-metodu eżatt għall-preparazzjoni tal-kampjuni se jvarja skont it-tip ta 'ċellula, iżda b'mod ġenerali, iċ-ċelloli jinġabru u jiġu ċentrifugati biex jiżviluppaw pellet b'ħafna ċelluli. Dan il-pellet imbagħad jerġa' jiġi sospiż fis-supernatant imħallat ma' krijoprotettant jew mezz ta' krijopreservazzjoni.

Medju ta' Krijopreservazzjoni

Dan il-mezz huwa impjegat biex jippreserva ċ-ċelloli fl-ambjenti ta 'temperatura baxxa li se jkunu soġġetti għalihom billi jinibixxi l-formazzjoni ta' kristalli intra u extraċellulari u għalhekk il-mewt taċ-ċelluli. Ir-rwol tagħhom huwa li jipprovdu ambjent sikur u protettiv għaċ-ċelloli u t-tessuti matul il-proċessi tal-iffriżar, il-ħażna u t-tidwib.

Medju bħal plażma friska ffriżata (FFP), soluzzjoni ta 'plażmalita eparinizzata jew soluzzjonijiet mingħajr serum, ħielsa mill-komponenti tal-annimali hija mħallta ma' krijoprotettivi bħal dimethyl sulphoxide (DMSO) jew gliċerol.

Il-pellet tal-kampjun ri-likwifikat huwa alikwotat f'polypropylene cryovials bħalSuzhou Ace Biomedical kumpanija Kunjetti Krijoġeniċi Ħażna.

Huwa importanti li ma jimtlewx iżżejjed il-krijovjali peress li dan iżid ir-riskju ta 'qsim u r-rilaxx possibbli tal-kontenut (1).

Rata ta' Iffriżar Kontrollata

B'mod ġenerali, rata ta 'friża kkontrollata bil-mod hija impjegata għall-krijopreservazzjoni b'suċċess taċ-ċelloli.

Wara li l-kampjuni jiġu alikkwotati f'kunjetti krijoġeniċi, jitqiegħdu fuq silġ imxarrab jew fi friġġ ta' 4℃ u l-proċedura tal-iffriżar tinbeda fi żmien 5 minuti. Bħala gwida ġenerali, iċ-ċelloli jitkessħu b'rata ta '-1 sa -3 kull minuta (2). Dan jinkiseb bl-użu ta' apparat li jkessaħ programmabbli jew billi jitqiegħdu kunjetti f'kaxxa iżolata mqiegħda fi friża b'rata kkontrollata minn –70°C sa –90°C.

Ittrasferixxi għal Nitroġenu Likwidu

Il-kunjetti krijoġeniċi ffriżati huma mbagħad trasferiti għal tank tan-nitroġenu likwidu għal perjodi indefiniti sakemm tinżamm temperatura ta 'inqas minn -135 ℃.

Dawn it-temperaturi ultra-baxxi jistgħu jinkisbu bl-immersjoni fin-nitroġenu tal-fażi likwida jew tal-fwar.

Fażi Likwida jew Fwar?

Il-ħażna fin-nitroġenu tal-fażi likwida hija magħrufa li żżomm it-temperatura kiesħa b'konsistenza assoluta, iżda ħafna drabi mhix rakkomandata għar-raġunijiet li ġejjin:

• Il-ħtieġa għal volumi kbar (fond) ta 'nitroġenu likwidu li huwa periklu potenzjali. Ħruq jew asfissija minħabba dan huwa riskju reali.
• Każijiet dokumentati ta' kontaminazzjoni inkroċjata minn aġenti infettivi bħal aspergillus, hep B u tixrid virali permezz tal-mezz tan-nitroġenu likwidu (2,3)
• Il-potenzjal li nitroġenu likwidu joħroġ fil-kunjetti waqt l-immersjoni. Meta jitneħħa mill-ħażna u jissaħħan għat-temperatura tal-kamra, in-nitroġenu jespandi malajr. Konsegwentement, il-kunjett jista 'jfarfar meta jitneħħa mill-ħażna tan-nitroġenu likwidu, u joħloq periklu kemm minn debris li jtir kif ukoll mill-espożizzjoni għall-kontenut (1, 4).

Għal dawn ir-raġunijiet, il-ħażna f'temperatura ultra-baxxa hija l-aktar komuni fin-nitroġenu tal-fażi tal-fwar. Meta l-kampjuni jridu jinħażnu fil-fażi likwida, għandhom jintużaw tubi cryoflex speċjalizzati.

L-iżvantaġġ għall-fażi tal-fwar huwa li jista 'jseħħ gradjent ta' temperatura vertikali li jirriżulta f'varjazzjonijiet fit-temperatura bejn -135 ℃ u -190 ℃. Dan jeħtieġ monitoraġġ bir-reqqa u diliġenti tal-livelli tan-nitroġenu likwidu u l-varjazzjonijiet fit-temperatura (5).

Ħafna manifatturi jirrakkomandaw li krijovjali huma adattati għall-ħażna sa -135 ℃ jew għall-użu fil-fażi tal-fwar biss.

Tidwib taċ-Ċelloli Krijopreservati Tiegħek

Il-proċedura tat-tidwib hija stressanti għal kultura ffriżata, u l-immaniġġjar u t-teknika xierqa huma meħtieġa biex jiżguraw l-aħjar vijabbiltà, irkupru u funzjonalità taċ-ċelloli. Il-protokolli ta' tidwib eżatti jiddependu fuq tipi speċifiċi ta' ċelluli. Madankollu, tidwib rapidu huwa meqjus bħala standard għal:

• Naqqas kwalunkwe impatt fuq l-irkupru ċellulari
• Jgħin biex jitnaqqas il-ħin ta 'espożizzjoni għas-soluti preżenti fil-midja tal-iffriżar
• Imminimizza kwalunkwe ħsara bir-rikristallizzazzjoni tas-silġ

Banjijiet ta 'l-ilma, banjijiet taż-żibeġ, jew strumenti awtomatizzati speċjalizzati huma komunement użati biex jinħallu l-kampjuni.

Ħafna drabi linja taċ-ċelluli 1 tinħall kull darba għal 1-2 minuti, billi ddawwar bil-mod f'banju ta 'l-ilma ta' 37℃ sakemm ikun fadal biss ftit silġ fil-kunjett qabel ma jinħaslu f'mezz ta 'tkabbir imsaħħan minn qabel.

Għal xi ċelloli bħall-embrijuni tal-mammiferi, it-tisħin bil-mod huwa essenzjali għas-sopravivenza tagħhom.

Iċ-ċelloli issa huma lesti għall-kultura taċ-ċelluli, iżolament taċ-ċelluli, jew fil-każ ta 'ċelloli staminali ematopojetiċi - studji ta' vijabbiltà biex jiggarantixxu l-integrità taċ-ċelloli staminali donaturi qabel it-terapija majeloablattiva.

Hija prattika normali li jittieħdu alikwoti żgħar tal-kampjun maħsul minn qabel użat biex isir għadd taċ-ċelluli biex jiddetermina l-konċentrazzjonijiet taċ-ċelluli għall-kisi fil-kultura. Tista 'mbagħad tivvaluta r-riżultati tal-proċeduri ta' iżolament taċ-ċelluli u tiddetermina l-vijabbiltà taċ-ċelluli.

L-Aħjar Prattiki għall-Ħażna ta' Krijovjali

Il-krijopreservazzjoni b'suċċess tal-kampjuni maħżuna fil-krijovjali tiddependi fuq ħafna elementi fil-protokoll inkluż il-ħażna xierqa u ż-żamma tar-rekords.

• Ċelloli maqsuma bejn il-postijiet tal-ħażna– Jekk il-volumi jippermettu, aqsam iċ-ċelloli bejn il-kunjetti u aħżenhom f'postijiet separati biex jitnaqqas ir-riskju ta' telf ta' kampjuni minħabba ħsarat fit-tagħmir.
• Tipprevjeni l-kontaminazzjoni inkroċjata– Agħżel kunjetti krijoġeniċi sterili li jintużaw darba jew awtoklavi qabel l-użu sussegwenti
• Uża kunjetti ta' daqs xieraq għaċ-ċelloli tiegħek– kunjetti jiġu f'firxa ta' volumi bejn 1 u 5mls. Evita li timla żejjed il-kunjetti biex tnaqqas ir-riskju ta 'qsim.
• Agħżel kunjetti krijoġeniċi b'kamin intern jew estern– Kunjetti bil-kamin internament huma rakkomandati minn xi universitajiet għal miżuri ta 'sikurezza - jistgħu wkoll jipprevjenu l-kontaminazzjoni waqt il-mili jew meta jinħażnu fin-nitroġenu likwidu.
• Prevenzjoni Tnixxija- Uża siġilli bi-injettati ffurmati fit-tapp bil-kamin jew fl-O-rings biex tevita t-tnixxija u l-kontaminazzjoni.
• Uża barcodes 2D u kunjetti tat-tikketti– biex tiġi żgurata t-traċċabilità, kunjetti b'żoni kbar ta' kitba jippermettu li kull kunjett jiġi ttikkettat b'mod adegwat. Barcodes 2D jistgħu jgħinu fil-ġestjoni tal-ħażna u ż-żamma tar-rekords. Tappijiet kodifikati bil-kulur huma utli għal identifikazzjoni aktar faċli.
• Manutenzjoni adegwata tal-ħażna- Biex jiġi żgurat li ċ-ċelloli ma jintilfux, il-kontenituri tal-ħażna għandhom jimmonitorjaw kontinwament it-temperatura u l-livelli tan-nitroġenu likwidu. L-allarmi għandhom jitwaħħlu biex javżaw lill-utenti dwar żbalji.

Prekawzjonijiet tas-Sigurtà

In-nitroġenu likwidu sar prattika komuni fir-riċerka moderna iżda jġorr ir-riskju ta 'korriment serju jekk jintuża ħażin.

Għandu jintlibes tagħmir ta' protezzjoni personali (PPE) xieraq biex jitnaqqas ir-riskju ta' ġlata, ħruq u inċidenti avversi oħra meta jiġi mmaniġġjat nitroġenu likwidu. Ilbes

• Ingwanti krijoġeniċi
• Kowt tal-laboratorju
• Protezzjoni sħiħa tal-wiċċ reżistenti għall-impatt li tkopri wkoll l-għonq
• Żraben magħluqa
• Fardal tal-plastik kontra t-titjir

Ir-refriġeraturi tan-nitroġenu likwidu għandhom jitqiegħdu f'żoni ventilati tajjeb biex jimminimizzaw ir-riskju ta 'asfissija - in-nitroġenu maħruba jivvaporizza u jissostitwixxi l-ossiġnu atmosferiku. Imħażen ta 'volum kbir għandu jkollhom sistemi ta' allarm ta 'ossiġnu baxx.

Ix-xogħol f'pari meta jimmaniġġja nitroġenu likwidu huwa ideali u l-użu tiegħu barra mis-sigħat tax-xogħol normali għandu jkun ipprojbit.

Krijovjali biex Jappoġġaw il-fluss tax-xogħol tiegħek

Il-kumpanija Suzhou Ace Biomedical toffri għażla wiesgħa ta 'prodotti li jissodisfaw il-ħtiġijiet tiegħek ta' krijopreservazzjoni għal tipi differenti ta 'ċelloli. Il-portafoll jinkludi firxa ta 'tubi kif ukoll firxa ta' krijovjali sterili.

Il-krijovjali tagħna huma:

• Lab Screw Cap 0.5mL 1.5mL 2.0mL Kunjetti Krijoġeniċi Krijovjali Krijotubu tal-qiegħ koniku b'gasket

  ● Speċifikazzjoni ta '0.5ml, 1.5ml, 2.0ml, bi falda jew mingħajr falda
  ● Disinn koniku jew waħdu, sterili jew mhux sterili huma t-tnejn disponibbli
  ● It-tubi tal-kamin huma magħmula minn polypropylene ta 'grad mediku
  ● PP Cryotube Vials jistgħu jiġu ffriżati u mdewweb ripetutament
  ●The disinn għatu estern jistgħu jnaqqsu l-probabbiltà ta ' kontaminazzjoni matul it-trattament tal-kampjun.
  ● Tubi krijoġeniċi tal-kamin Kamin universali għall-użu
  ● Tubi joqogħdu l-aktar rotors komuni
  ● Tubi krijoġeniċi o-ring ta 'tubi tajbin għal kaxxi tal-friża standard ta' 1-il pulzier u 2-il pulzier, 48well, 81well, 96well u 100well
  ● Awtoklavabbli għal 121 °C u friżabbli għal -86 °C

  PARTI NO	MATERJAL	VOLUM	KAPKULUR	PCS/BORŻA	BOX/KAŻ
  ACT05-BL-N	PP	0.5ML	Iswed, Isfar, Blu, Aħmar, Vjola, Abjad	500	10
  ACT15-BL-N	PP	1.5ML	Iswed, Isfar, Blu, Aħmar, Vjola, Abjad	500	10
  ACT15-BL-NW	PP	1.5ML	Iswed, Isfar, Blu, Aħmar, Vjola, Abjad	500	10
  ACT20-BL-N	PP	2.0ML	Iswed, Isfar, Blu, Aħmar, Vjola, Abjad	500	10