L-istandardizzazzjoni tal-proċessi tinkludi l-ottimizzazzjoni u l-istabbiliment u l-armonizzazzjoni sussegwenti tagħhom, li jippermettu prestazzjoni ottimali fit-tul - indipendenti mill-utent. L-istandardizzazzjoni tiżgura riżultati ta 'kwalità għolja, kif ukoll ir-riproduċibilità u l-komparabilità tagħhom.
L-għan ta 'PCR (klassiku) huwa l-ġenerazzjoni ta' riżultat affidabbli u riproduċibbli. Għal ċerti applikazzjonijiet, ir - rendiment tal -Prodott PCRhuwa wkoll rilevanti. Għal dawn ir-reazzjonijiet, għandha tingħata attenzjoni biex jiġi żgurat li l-kampjuni ma jkunux kompromessi u li l-fluss tax-xogħol tal-PCR jibqa 'stabbli. Speċifikament, dan jissarraf biex jimminimizza l-introduzzjoni ta 'kontaminazzjonijiet li jistgħu jwasslu għal riżultati negattivi pożittivi jew foloz foloz jew saħansitra jinibixxu r-reazzjoni tal-PCR. Barra minn hekk, il-kundizzjonijiet ta 'reazzjoni għandhom ikunu identiċi kemm jista' jkun għal kull kampjun individwali f'ġirja u jkunu wkoll trasferibbli għal reazzjonijiet sussegwenti (tal-istess metodu). Dan jirreferi għall-kompożizzjoni tar-reazzjonijiet kif ukoll għat-tip ta 'kontroll tat-temperatura fiċ-ċikler. L-iżbalji tal-utent, ovvjament, għandhom jiġu evitati kemm jista 'jkun.
Hawn taħt, se nuru l-isfidi li jiltaqgħu magħhom waqt il-preparazzjoni u matul il-ġirja ta 'PCR - u l-approċċi għal soluzzjonijiet li jeżistu fir-rigward ta' strumenti u konsumabbli użati għall-istandardizzazzjoni tal-flussi tax-xogħol tal-PCR.
Preparazzjoni tar-reazzjoni
It-tqassim tal-komponenti ta 'reazzjoni f'bastimenti PCR, jew pjanċi, rispettivament, jinkludi sfidi multipli li jridu jiġu megħluba:
Kundizzjonijiet ta 'reazzjoni
Id-dożaġġ eżatt u preċiż tal-komponenti individwali huwa indispensabbli meta jimmira għall-iktar kundizzjonijiet ta 'reazzjoni identiċi possibbli. Minbarra teknika tajba ta 'pipetting, l-għażla tal-għodda t-tajba hija kritika. It-taħlitiet kaptan tal-PCR spiss ikun fihom sustanzi li jżidu l-viskożità jew jiġġeneraw ragħwa. Matul il - proċess tal-pipetting, dawn iwasslu għal tixrib sostanzjali tal -Għajnuniet tal-Pipetta, b'hekk tnaqqas l-eżattezza tal-pipetting. L-użu ta 'sistemi ta' tqassim dirett jew ponot alternattivi tal-pipetta li huma inqas suxxettibbli għat-tixrib jista 'jtejjeb l-eżattezza u l-preċiżjoni tal-proċess tal-pipetting.
Kontaminazzjonijiet
Matul il-proċess ta 'tqassim, l-ajrusols huma ġġenerati li, jekk jitħallew jilħqu l-parti ta' ġewwa tal-pipetta, jistgħu potenzjalment jikkontaminaw kampjun ieħor matul il-pass tal-pipetting li jmiss. Dan jista 'jiġi evitat billi jintużaw ponot tal-filtru jew sistemi ta' spostament dirett.
Konsumabbli bħalGħajnuniet, bastimenti u pjanċi li jintużaw fil-fluss tax-xogħol tal-PCR m'għandhomx ikun fihom sustanzi li jikkompromettu l-kampjun jew jiffalsifikaw ir-riżultat. Dawn jinkludu DNA, DNASEs, RNASEs u inibituri tal-PCR, kif ukoll komponenti li jistgħu potenzjalment lissija mill-materjal matul ir-reazzjoni - sustanzi magħrufa bħala leachables.
Żball tal-Utent
Iktar ma jiġu pproċessati kampjuni, iktar ikun għoli r-riskju ta 'żball. Jista 'jiġri faċilment li kampjun huwa pipetted fil-bastiment ħażin jew fil-bir ħażin. Dan ir-riskju jista 'jitnaqqas konsiderevolment billi l-immarkar faċilment jinstab tal-bjar. Permezz tal-awtomazzjoni tal-passi li jqassmu, il-fattur uman, jiġifieri, żbalji u varjazzjonijiet relatati mal-utent, huma mminimizzati, u b'hekk tiżdied ir-riproduċibilità, speċjalment fil-każ ta 'volumi ta' reazzjoni żgħira. Dan jirrikjedi pjanċi ta 'stabbiltà dimensjonali suffiċjenti biex jintużaw fi stazzjon tax-xogħol. Barcodes mehmuża jipprovdu qari addizzjonali tal-magni, li jissimplifika l-intraċċar tal-kampjun matul il-proċess kollu.
Programmazzjoni tat-Thermocycler
L-ipprogrammar ta 'strument jista' jkun li jieħu ħafna ħin kif ukoll suxxettibbli għal żbalji. Il-karatteristiċi differenti ta 'ċikler termali tal-PCR jaħdmu flimkien biex jissimplifikaw dan il-pass tal-proċess u, l-iktar importanti, biex jagħmluha sigura:
Operazzjoni faċli u gwida tajba għall-utent huma l-bażi ta 'programmazzjoni effiċjenti. Filwaqt li tibni fuq din il-fondazzjoni, l-amministrazzjoni tal-utent protetta bil-password se tipprevjeni li l-programmi tiegħu stess jiġu mibdula minn utenti oħra. Jekk ċiklenti multipli (tal-istess tip) qed jintużaw, huwa ta 'benefiċċju jekk programm jista' jiġi trasferit direttament minn strument għal ieħor permezz ta 'USB jew konnettività. Softwer tal-kompjuter jippermetti amministrazzjoni ċentrali u sigura ta 'programmi, drittijiet tal-utent u dokumenti fuq kompjuter.
PCR Run
Matul il-ġirja, id-DNA huwa amplifikat fil-bastiment ta 'reazzjoni, fejn kull kampjun għandu jkun soġġett għal kundizzjonijiet ta' reazzjoni identiċi u konsistenti. L-aspetti li ġejjin huma rilevanti għall-proċess:
Kontroll tat-temperatura
Eżattezza eċċellenti fil-kontroll tat-temperatura u l-omoġenjità tal-blokka cycler huma l-bażi għal kondizzjonament tat-temperatura uniformi tal-kampjuni kollha. Il-kwalità għolja tal-elementi tat-tisħin u tat-tkessiħ (elementi peltier), kif ukoll il-mod li bih dawn huma konnessi mal-blokka, huma l-fatturi li jiddeċiedu li jiddeterminaw ir-riskju ta 'diskrepanzi fit-temperatura magħrufa bħala l- "effett tat-tarf"
Evaporazzjoni
Il-konċentrazzjonijiet tal-komponenti ta 'reazzjoni individwali m'għandhomx jinbidlu matul ir-reazzjoni minħabba l-evaporazzjoni. Inkella, huwa possibbli li ftit li xejnProdott PCRjistgħu jiġu ġġenerati, jew xejn. Huwa għalhekk kruċjali li titnaqqas l-evaporazzjoni billi tiġi żgurata siġill sigur. F'dan il-każ, l-għatu msaħħan tat-termokikler u s-siġill tal-bastiment jaħdmu id f'id. Għażliet differenti ta 'siġillar huma disponibbli għalPjanċi tal-PCR (link: artiklu tas-siġillar), fejn l-aħjar siġill jinkiseb permezz tas-siġillar tas-sħana. Għeluq ieħor jista 'jkun ukoll adattat, sakemm il-pressjoni ta' kuntatt tal-għatu taċ-ċikler tista 'tiġi aġġustata għas-siġill magħżul.
L-istandardizzazzjoni tal-proċess tinsab fis-seħħ sabiex tkun salvagwardjata riżultati preċiżi u riproduċibbli fit-tul. Dan jinkludi manutenzjoni regolari tat-tagħmir biex jiżgura li jkun dejjem f'kondizzjoni tajba ta 'xogħol. Il-konsumabbli kollha għandhom ikunu ta 'kwalità għolja b'mod konsistenti fil-lottijiet kollha prodotti, u d-disponibbiltà affidabbli tagħhom għandha tkun garantita.
Ħin ta 'wara: 9 ta' Novembru-2022