Kif tippipetta Volumi Żgħar b'pipetti Manwali li jinżammu fl-idejn

Hekk kif qed titpoġġa aktar attenzjoni fuq it-tnaqqis tar-reaġenti u l-ispejjeż, volumi iżgħar huma fid-domanda kbira, eż, għall-preparazzjoni ta 'PCR Mastermix jew reazzjonijiet ta' enzimi. Iżda l-pipettar ta 'volumi żgħar minn 0.2 – 5 µL jistabbilixxi sfidi ġodda għall-eżattezza u l-preċiżjoni tal-pipetta. Il-punti li ġejjin huma essenzjali:

1. Daqs tal-pipetta u l-ponta: Dejjem agħżel il-pipetta bl-inqas volum nominali possibbli u bl-iżgħar ponta biex iżżomm il-kuxxin tal-arja żgħir kemm jista 'jkun. Meta tqiegħed bil-pipetta 1 µL eż., agħżel pipetta ta' 0.25 – 2.5 µL u ponta li tqabbel aktar milli pipetta ta' 1 – 10 µL.
2. Kalibrazzjoni u manutenzjoni: Huwa essenzjali li l-pipetti tiegħek ikunu kalibrati u miżmuma sew. Aġġustamenti żgħar u partijiet miksura fuq pipetta jwasslu għal żieda massiva fil-valuri ta 'żball sistematiċi u każwali. Irid isir kalibrazzjoni skond l-ISO 8655 darba fis-sena.
3. Pipetti ta 'spostament pożittiv: Iċċekkja jekk għandekx pipetta ta' spostament pożittiv b'firxa ta 'volum baxx fil-laboratorju tiegħek. B'mod ġenerali, l-użu ta 'dan it-tip ta' pipetta jwassal għal riżultat ta 'pipetta aħjar f'termini ta' preċiżjoni u preċiżjoni milli bil-pipetti klassiċi tal-kuxxin tal-arja.
4. Ipprova uża volumi akbar: Tista' tikkunsidra li tħallat il-kampjun tiegħek biex tippipetta volumi akbar bl-istess kwantità fir-reazzjoni finali. Dan jista 'jnaqqas l-iżbalji tal-pipettar b'volumi ta' kampjuni żgħar ħafna.

Minbarra għodda tajba, ir-riċerkatur għandu jkollu teknika ta 'pipettar tajba ħafna. Oqgħod attent ħafna għall-passi li ġejjin:

1. It-twaħħil tal-ponta: Tiġġammx il-pipetta fuq il-ponta peress li dan jista 'jagħmel ħsara lit-tarf tal-ponta fina jikkawża li r-raġġ tal-likwidu jiġi ridirett jew jagħmel ħsara lill-orifiċju. Applika biss pressjoni ħafifa meta twaħħal ponta u uża pipetta b'kon tal-ponta mgħobbi bir-rebbiegħa.
2. Żomm il-pipetta: Żommx il-pipetta f'idejk waqt li tistenna ċ-ċentrifuga, iċ-ċiklatur, eċċ. In-naħa ta 'ġewwa tal-pipetta se tissaħħan u twassal lill-kuxxin tal-arja biex tespandi li tirriżulta f'devjazzjonijiet mill-volum stabbilit meta tippipetta.
3. Tixrib minn qabel: L-umidifikazzjoni tal-arja ġewwa l-ponta u l-pipetta tipprepara l-ponta għall-kampjun u tevita l-evaporazzjoni meta tispira l-volum tat-trasferiment.
4. Aspirazzjoni vertikali: Dan huwa importanti ħafna meta jiġu mmaniġġjati volumi żgħar biex jiġi evitat l-effett kapillari li jseħħ meta l-pipetta tinżamm f'angolu.
5. Fond tal-immersjoni: Għaddas il-ponta mill-inqas possibbli biex tevita li l-likwidu jidħol fil-ponta minħabba l-effett kapillari. Regola ġenerali: Iktar ma jkunu żgħar il-ponta u l-volum, iktar ikun baxx il-fond tal-immersjoni. Nirrakkomandaw massimu ta' 2 mm meta jiġu pipettati volumi żgħar.
6. Tqassim f'angolu ta' 45°: Il-ħruġ ottimali tal-likwidu huwa garantit meta l-pipetta tinżamm f'angolu ta' 45°.
7. Kuntatt mal-ħajt tal-bastiment jew mal-wiċċ tal-likwidu: Volumi żgħar jistgħu biss jitqassmu sew meta l-ponta tinżamm mal-ħajt tal-bastiment, jew mgħaddsa f'likwidu. Anke l-aħħar qatra mill-ponta tista 'tiġi dispensata b'mod preċiż.
8. Blow-out: Blow-out huwa obbligatorju wara li jitqassmu volumi baxxi biex titqassam anke l-aħħar qatra ta’ likwidu preżenti fil-ponta. Il-blow-out għandu jsir ukoll mal-ħajt tal-bastiment. Oqgħod attent li ma ġġibx bżieżaq tal-arja fil-kampjun meta twettaq blow-out fil-wiċċ tal-likwidu.