Untuk tindak balas penguatan yang berjaya, komponen tindak balas individu perlu hadir dalam kepekatan yang betul dalam setiap penyediaan. Di samping itu, adalah penting bahawa tiada pencemaran berlaku.
Terutama apabila banyak tindak balas perlu disediakan, ia telah ditubuhkan untuk menyediakan apa yang dipanggil campuran induk dan bukannya mepipet setiap reagen secara berasingan ke dalam setiap bekas. Campuran prakonfigurasi tersedia secara komersial, di mana hanya komponen khusus sampel (primer) dan air ditambah. Sebagai alternatif, campuran induk boleh disediakan sendiri. Dalam kedua-dua varian, campuran diedarkan kepada setiap bekas PCR tanpa templat dan sampel DNA individu ditambah secara berasingan pada penghujungnya.
Menggunakan campuran induk mempunyai beberapa kelebihan: Pertama, bilangan langkah pemipetan tunggal dikurangkan. Dengan cara ini, kedua-dua risiko kesilapan pengguna semasa paip dan risiko pencemaran diminimumkan dan, sudah tentu, masa dapat dijimatkan. Pada dasarnya, ketepatan pipetting juga lebih tinggi, kerana volum yang lebih besar didos. Ini mudah difahami apabila menyemak data teknikal pipet: Semakin kecil isipadu dos, semakin tinggi sisihan boleh . Hakikat bahawa semua persediaan datang dari bekas yang sama mempunyai kesan positif terhadap kehomogenan (jika dicampur dengan baik). Ini juga meningkatkan kebolehulangan eksperimen.
Semasa menyediakan adunan induk, sekurang-kurangnya 10 % isipadu tambahan perlu ditambah (cth. jika 10 persediaan diperlukan, hitung berdasarkan 11), supaya bekas terakhir diisi dengan betul. Dengan cara ini, (sedikit) ketidaktepatan paip, dan kesan kehilangan sampel apabila mendos larutan yang mengandungi detergen boleh dikompensasikan. Detergen terkandung dalam larutan enzim seperti polimerase dan campuran induk, menyebabkan pembentukan buih dan sisa pada permukaan dalaman normal.petua pipet.
Bergantung pada penggunaan dan jenis cecair yang akan dikeluarkan, teknik paip yang betul (1) harus dipilih dan peralatan yang sesuai dipilih. Untuk penyelesaian yang mengandungi detergen, sistem anjakan terus atau apa yang dipanggil tip pipet "pengekalan rendah" sebagai alternatif untuk pipet kusyen udara disyorkan. Kesan daripadaPetua PIPET ACEadalah berdasarkan permukaan hidrofobik terutamanya. Cecair yang mengandungi detergen tidak meninggalkan filem sisa di bahagian dalam dan luar, supaya kehilangan larutan dapat diminimumkan.
Selain dos yang tepat bagi semua komponen, ia juga penting agar tiada pencemaran terhadap sediaan berlaku. Ia tidak mencukupi untuk menggunakan bahan habis pakai dengan ketulenan tinggi, kerana proses pipet dalam pipet kusyen udara boleh menghasilkan aerosol yang kekal dalam pipet. DNA yang mungkin terkandung dalam aerosol boleh dipindahkan dari satu sampel ke seterusnya dalam langkah pemipetan berikut dan dengan itu membawa kepada pencemaran. Sistem anjakan langsung yang dinyatakan di atas juga boleh meminimumkan risiko ini. Untuk pipet kusyen udara adalah wajar untuk menggunakan petua penapis untuk melindungi kon pipet dengan mengekalkan percikan, aerosol dan biomolekul.
Masa siaran: Dis-06-2022