Cryovialbiasanya digunakan untuk penyimpanan kriogenik garisan sel dan bahan biologi kritikal yang lain, dalam dewar yang diisi dengan nitrogen cecair.

Terdapat beberapa peringkat yang terlibat dalam kejayaan pemeliharaan sel dalam nitrogen cecair. Walaupun prinsip asasnya ialah pembekuan perlahan, teknik tepat yang digunakan bergantung pada jenis sel dan cryoprotectant yang digunakan. Terdapat beberapa pertimbangan keselamatan dan amalan terbaik yang perlu diambil kira semasa menyimpan sel pada suhu rendah sedemikian.

Siaran ini bertujuan untuk memberikan gambaran keseluruhan tentang cara cryovial disimpan dalam nitrogen cecair.

Apa itu Cryovial

Cryovial ialah botol kecil bertutup yang direka untuk menyimpan sampel cecair pada suhu yang sangat rendah. Mereka memastikan bahawa sel yang diawet dalam cryoprotectant tidak bersentuhan langsung dengan nitrogen cecair, meminimumkan risiko keretakan selular sambil masih mendapat manfaat daripada kesan penyejukan melampau nitrogen cecair.

Botol biasanya boleh didapati dalam pelbagai volum dan reka bentuk - ia boleh diulirkan secara dalaman atau luaran dengan bahagian bawah rata atau bulat. Format steril dan tidak steril juga tersedia.

Siapa yang MenggunakanCyrovialuntuk Menyimpan Sel dalam Nitrogen Cecair

Pelbagai makmal NHS dan swasta, serta institusi penyelidikan yang pakar dalam perbankan darah tali pusat, biologi sel epitelium, imunologi dan biologi sel stem menggunakan kriovial untuk mengawetkan sel.

Sel-sel yang dipelihara dengan cara ini termasuk Sel B dan T, Sel CHO, Sel Stem Hematopoietik dan Progenitor, Hibridomas, Sel Usus, Makrofaj, Sel Stem dan Progenitor Mesenchymal, Monocytes, Myeloma, Sel NK dan Sel Stem Pluripotent.

Gambaran Keseluruhan Cara Menyimpan Cryovial dalam Nitrogen Cecair

Cryopreservation ialah proses yang memelihara sel dan binaan biologi lain dengan menyejukkannya kepada suhu yang sangat rendah. Sel boleh disimpan dalam nitrogen cecair selama bertahun-tahun tanpa kehilangan daya maju sel. Ini adalah garis besar prosedur yang digunakan.

Penyediaan Sel

Kaedah yang tepat untuk menyediakan sampel akan berbeza-beza bergantung pada jenis sel, tetapi secara amnya, sel-sel dikumpul dan disentrifugasi untuk menghasilkan pelet yang kaya dengan sel. Pelet ini kemudiannya digantung semula dalam supernatan yang dicampur dengan cryoprotectant atau medium cryopreservation.

Medium Cryopreservation

Medium ini digunakan untuk memelihara sel dalam persekitaran suhu rendah yang akan mereka hadapi dengan menghalang pembentukan kristal intra dan ekstraselular dan seterusnya kematian sel. Peranan mereka adalah untuk menyediakan persekitaran yang selamat dan melindungi sel dan tisu semasa proses pembekuan, penyimpanan dan pencairan.

Medium seperti plasma beku segar (FFP), larutan plasmalit berheparin atau bebas serum, larutan bebas komponen haiwan dicampur dengan cryoprotectants seperti dimetil sulfoksida (DMSO) atau gliserol.

Pelet sampel yang telah dicairkan semula diasingkan ke dalam kriovial polipropilena sepertiSuzhou Ace Bioperubatan syarikat Cryogenic Storage Vials.

Adalah penting untuk tidak mengisi kriovial secara berlebihan kerana ini akan meningkatkan risiko keretakan dan kemungkinan pelepasan kandungan (1).

Kadar Pembekuan Terkawal

Secara umum, kadar pembekuan terkawal yang perlahan digunakan untuk pengawetan sel yang berjaya.

Selepas sampel dialihkan ke dalam botol kriogenik, ia diletakkan di atas ais basah atau dalam peti sejuk 4 ℃ dan prosedur pembekuan dimulakan dalam masa 5 minit. Sebagai panduan umum, sel disejukkan pada kadar -1 hingga -3 seminit (2). Ini dicapai menggunakan penyejuk boleh atur cara atau dengan meletakkan botol dalam kotak bertebat yang diletakkan di dalam penyejuk beku kadar terkawal –70°C hingga –90°C.

Pindahkan kepada Nitrogen Cecair

Botol kriogenik beku kemudiannya dipindahkan ke tangki nitrogen cecair untuk tempoh yang tidak ditentukan dengan syarat suhu kurang daripada -135 ℃ dikekalkan.

Suhu ultra-rendah ini boleh diperolehi dengan rendaman dalam nitrogen fasa cecair atau wap.

Cecair atau Fasa Wap?

Penyimpanan dalam nitrogen fasa cecair diketahui mengekalkan suhu sejuk dengan konsistensi mutlak, tetapi selalunya tidak disyorkan atas sebab berikut:

• Keperluan untuk jumlah besar (kedalaman) nitrogen cecair yang berpotensi bahaya. Melecur atau sesak nafas akibat ini adalah risiko sebenar.
• Kes-kes pencemaran silang yang didokumenkan oleh agen berjangkit seperti aspergillus, hep B dan penyebaran virus melalui medium nitrogen cecair (2,3)
• Potensi nitrogen cecair bocor ke dalam botol semasa rendaman. Apabila dikeluarkan dari simpanan dan dipanaskan ke suhu bilik, nitrogen mengembang dengan cepat. Akibatnya, vial mungkin berkecai apabila dikeluarkan daripada simpanan nitrogen cecair, mewujudkan bahaya daripada kedua-dua serpihan terbang dan pendedahan kepada kandungan (1, 4).

Atas sebab-sebab ini, penyimpanan suhu ultra-rendah adalah yang paling biasa dalam nitrogen fasa wap. Apabila sampel mesti disimpan dalam fasa cecair, tiub cryoflex khusus harus digunakan.

Kelemahan fasa wap ialah kecerunan suhu menegak boleh berlaku mengakibatkan turun naik suhu antara -135 ℃ dan -190 ℃. Ini memerlukan pemantauan yang teliti dan teliti terhadap paras nitrogen cecair dan variasi suhu (5).

Banyak pengeluar mengesyorkan bahawa cryovial sesuai untuk penyimpanan sehingga -135℃ atau untuk digunakan dalam fasa wap sahaja.

Mencairkan Sel Terpelihara Anda

Prosedur pencairan memberi tekanan untuk budaya beku, dan pengendalian serta teknik yang betul diperlukan untuk memastikan daya maju, pemulihan dan kefungsian sel yang optimum. Protokol pencairan yang tepat akan bergantung pada jenis sel tertentu. Walau bagaimanapun, pencairan pantas dianggap standard untuk:

• Kurangkan sebarang kesan ke atas pemulihan selular
• Bantu mengurangkan masa pendedahan kepada bahan terlarut yang terdapat dalam media pembekuan
• Kurangkan sebarang kerosakan dengan penghabluran semula ais

Mandian air, mandi manik atau instrumen automatik khusus biasanya digunakan untuk mencairkan sampel.

Selalunya 1 garisan sel dicairkan pada satu masa selama 1-2 minit, dengan memutar perlahan-lahan dalam tab mandi air 37 ℃ sehingga hanya tinggal sedikit ais dalam botol sebelum ia dibasuh dalam medium pertumbuhan yang telah dipanaskan terlebih dahulu.

Bagi sesetengah sel seperti embrio mamalia, pemanasan perlahan adalah penting untuk kelangsungan hidup mereka.

Sel-sel kini bersedia untuk kultur sel, pengasingan sel, atau dalam kes sel stem haematopoietik – kajian daya maju untuk menjamin integriti sel stem penderma sebelum terapi myeloablative.

Ia adalah amalan biasa untuk mengambil aliquot kecil sampel prabasuh yang digunakan untuk melakukan kiraan sel untuk menentukan kepekatan sel untuk penyaduran dalam kultur. Anda kemudiannya boleh menilai keputusan prosedur pengasingan sel dan menentukan daya maju sel.

Amalan Terbaik untuk Penyimpanan Cryovial

Kejayaan pengawetan krio sampel yang disimpan dalam kriovial bergantung pada banyak elemen dalam protokol termasuk penyimpanan dan penyimpanan rekod yang betul.

• Pisahkan sel antara lokasi storan– Jika jumlah membenarkan, belah sel antara botol dan simpan di lokasi yang berasingan untuk mengurangkan risiko kehilangan sampel akibat kegagalan peralatan.
• Cegah pencemaran silang– Pilih botol kriogenik steril sekali guna atau autoklaf sebelum penggunaan berikutnya
• Gunakan botol bersaiz sesuai untuk sel anda– botol terdapat dalam julat isipadu antara 1 dan 5ml. Elakkan mengisi botol berlebihan untuk mengurangkan risiko keretakan.
• Pilih botol kriogenik dalaman atau luaran berulir– Vial berulir dalaman disyorkan oleh sesetengah universiti untuk langkah keselamatan – ia juga boleh mengelakkan pencemaran semasa mengisi atau apabila disimpan dalam nitrogen cecair.
• Cegah Kebocoran- Gunakan pengedap dwi-suntik yang diacu pada penutup skru atau cincin O untuk mengelakkan kebocoran dan pencemaran.
• Gunakan kod bar 2D dan botol label– untuk memastikan kebolehkesanan, vial dengan kawasan penulisan yang besar membolehkan setiap vial dilabelkan dengan secukupnya. Kod bar 2D boleh membantu dengan pengurusan storan dan penyimpanan rekod. Tudung berkod warna berguna untuk pengecaman yang lebih mudah.
• Penyelenggaraan storan yang mencukupi- Untuk memastikan sel tidak hilang, bekas penyimpanan hendaklah sentiasa memantau suhu dan paras nitrogen cecair. Penggera harus dipasang untuk memberi amaran kepada pengguna tentang kesilapan.

Langkah Keselamatan

Nitrogen cecair telah menjadi amalan biasa dalam penyelidikan moden tetapi membawa risiko kecederaan serius jika digunakan secara tidak betul.

Peralatan pelindung diri (PPE) yang betul harus dipakai untuk meminimumkan risiko radang dingin, melecur dan kejadian buruk lain apabila mengendalikan nitrogen cecair. pakai

• Sarung tangan kriogenik
• Kot makmal
• Pelindung muka penuh tahan hentaman yang juga menutupi leher
• Kasut kaki tertutup
• Apron plastik kalis percikan

Peti sejuk nitrogen cecair hendaklah diletakkan di kawasan pengudaraan yang baik untuk meminimumkan risiko sesak nafas – nitrogen yang terlepas mengewap dan menggantikan oksigen atmosfera. Stor volum besar harus mempunyai sistem penggera oksigen rendah.

Bekerja secara berpasangan apabila mengendalikan nitrogen cecair adalah ideal dan penggunaannya di luar waktu kerja biasa harus dilarang.

Cryovial untuk Menyokong Aliran Kerja Anda

Syarikat Suzhou Ace Biomedical menawarkan pelbagai pilihan produk yang memenuhi keperluan cryopreservation anda untuk pelbagai jenis sel. Portfolio ini termasuk rangkaian tabung dan juga rangkaian kriovial steril.

cryovial kami ialah:

• Penutup Skru Makmal 0.5mL 1.5mL 2.0mL Cryovial Cryogenic Vials Conical Bawah Cryotube dengan Gasket

  ● 0.5ml,1.5ml,2.0ml spesifikasi, dengan skirt atau tanpa skirt
  ● Reka bentuk kon atau berdiri sendiri, steril atau tidak steril kedua-duanya tersedia
  ● Tiub penutup skru diperbuat daripada polipropilena gred perubatan
  ● Botol PP Cryotube boleh dibekukan dan dicairkan berulang kali
  ●Reka bentuk penutup luaran boleh mengurangkan kebarangkalian pencemaran semasa rawatan sampel.
  ● Penutup skru tiub kriogenik Benang skru universal untuk digunakan
  ● Tiub sesuai dengan pemutar yang paling biasa
  ● Tiub cincin o tiub kriogenik sesuai dengan kotak penyejuk beku standard 1 inci dan 2 inci, 48well, 81well，96well dan 100well
  ● Boleh autoklaf hingga 121°C dan boleh dibekukan hingga -86°C

  BAHAGIAN NO	BAHAN	JILID	CAPWARNA	PCS/BEG	BEG/KES
  ACT05-BL-N	PP	0.5ML	Hitam, Kuning, Biru, Merah, Ungu, Putih	500	10
  ACT15-BL-N	PP	1.5ML	Hitam, Kuning, Biru, Merah, Ungu, Putih	500	10
  ACT15-BL-NW	PP	1.5ML	Hitam, Kuning, Biru, Merah, Ungu, Putih	500	10
  ACT20-BL-N	PP	2.0ML	Hitam, Kuning, Biru, Merah, Ungu, Putih	500	10