Cryovialsbiasanya digunakan untuk penyimpanan kriogenik sel -sel sel dan bahan biologi kritikal yang lain, di dalam embar yang dipenuhi dengan nitrogen cecair.

Terdapat beberapa peringkat yang terlibat dalam pemeliharaan sel yang berjaya dalam nitrogen cecair. Walaupun prinsip asas adalah pembekuan perlahan, teknik tepat yang digunakan bergantung pada jenis sel dan cryoprotectant yang digunakan. Terdapat beberapa pertimbangan keselamatan dan amalan terbaik untuk diambil kira apabila menyimpan sel -sel pada suhu rendah sedemikian.

Jawatan ini bertujuan untuk memberikan gambaran keseluruhan bagaimana cryovials disimpan dalam nitrogen cecair.

Apa itu Cryovials

Cryovials adalah kecil, botol yang direka untuk menyimpan sampel cecair pada suhu yang sangat rendah. Mereka memastikan bahawa sel -sel yang dipelihara dalam cryoprotectant tidak bersentuhan langsung dengan nitrogen cecair, meminimumkan risiko patah selular sementara masih mendapat manfaat daripada kesan penyejukan nitrogen cecair yang melampau.

Botol biasanya tersedia dalam pelbagai jilid dan reka bentuk - mereka boleh diulurkan secara dalaman atau luaran dengan bahagian bawah rata atau bulat. Format steril dan bukan steril juga disediakan.

Yang menggunakannyaCyrovialsuntuk menyimpan sel dalam nitrogen cecair

Pelbagai NHS dan makmal swasta, serta institusi penyelidikan yang mengkhususkan diri dalam perbankan darah kord, biologi sel epitel, imunologi dan biologi sel stem menggunakan cryovials untuk sel -sel cryopreserve.

Sel -sel yang dipelihara dengan cara ini termasuk sel B dan T, sel CHO, batang hematopoietik dan sel -sel progenitor, hibridoma, sel usus, makrofaj, batang mesenchymal dan sel -sel progenitor, monosit, myeloma, sel NK dan sel stem pluripoten.

Gambaran Keseluruhan Cara Menyimpan Cryovials dalam Nitrogen Cecair

Cryopreservation adalah proses yang memelihara sel -sel dan pembinaan biologi lain dengan menyejukkannya kepada suhu yang sangat rendah. Sel boleh disimpan dalam nitrogen cecair selama bertahun -tahun tanpa kehilangan daya maju sel. Ini adalah garis besar prosedur yang digunakan.

Penyediaan sel

Kaedah yang tepat untuk menyediakan sampel akan berbeza-beza bergantung kepada jenis sel, tetapi secara umum, sel-sel dikumpulkan dan disentrifugasi untuk membangunkan pelet kaya sel. Pelet ini kemudiannya diselamatkan semula dalam supernatan bercampur dengan cryoprotectant atau medium cryopreservation.

Medium cryopreservation

Medium ini digunakan untuk memelihara sel-sel dalam persekitaran suhu rendah yang mereka akan tertakluk dengan menghalang pembentukan kristal intra dan ekstraselular dan oleh itu kematian sel. Peranan mereka adalah untuk menyediakan persekitaran yang selamat, perlindungan untuk sel dan tisu semasa proses pembekuan, penyimpanan, dan pencairan.

Medium seperti plasma beku segar (FFP), larutan plasmalite heparined atau penyelesaian bebas serum, bebas komponen haiwan bercampur dengan cryoprotectants seperti dimetil sulfoksida (DMSO) atau gliserol.

Pelet sampel semula yang dicairkan semula diselaraskan ke dalam cryovials polipropilena sepertiSUZHOU ACE COMPANY BIOMEDICAL COMPANY CRYOGENIC STROSS STOR.

Adalah penting untuk tidak melampaui cryovials kerana ini akan meningkatkan risiko retak dan kemungkinan pelepasan kandungan (1).

Kadar pembekuan terkawal

Secara umum, kadar pembekuan yang dikawal perlahan digunakan untuk cryopreservation sel -sel yang berjaya.

Selepas sampel diselaraskan ke dalam botol kriogenik, mereka diletakkan di atas ais basah atau dalam peti sejuk 4 ℃ dan prosedur pembekuan dimulakan dalam masa 5 minit. Sebagai panduan umum, sel -sel disejukkan pada kadar -1 hingga -3 seminit (2). Ini dicapai dengan menggunakan sejuk yang boleh diprogramkan atau dengan meletakkan botol dalam kotak terlindung yang diletakkan di dalam beku -90 ° C freezer kadar terkawal.

Pindahkan ke nitrogen cecair

Babi kriogenik beku kemudian dipindahkan ke tangki nitrogen cecair untuk tempoh yang tidak terbatas menyediakan suhu kurang daripada -135 ℃ dikekalkan.

Suhu ultra-rendah ini boleh diperolehi dengan rendaman dalam nitrogen fasa cecair atau wap.

Cecair atau fasa wap?

Penyimpanan nitrogen fasa cecair diketahui mengekalkan suhu sejuk dengan konsistensi mutlak, tetapi sering tidak disyorkan untuk alasan berikut:

• Keperluan untuk jumlah besar (kedalaman) nitrogen cecair yang merupakan bahaya yang berpotensi. Burns atau asphyxiation kerana ini adalah risiko sebenar.
• Kes-kes pencemaran silang yang didokumenkan oleh agen berjangkit seperti Aspergillus, Hep B dan penyebaran virus melalui medium nitrogen cecair (2,3)
• Potensi nitrogen cecair untuk bocor ke dalam botol semasa rendaman. Apabila dikeluarkan dari penyimpanan dan dipanaskan ke suhu bilik, nitrogen berkembang pesat. Akibatnya, botol boleh menghancurkan apabila dikeluarkan dari penyimpanan nitrogen cecair, mencetuskan bahaya dari kedua -dua serpihan terbang dan pendedahan kepada kandungannya (1, 4).

Atas sebab-sebab ini, penyimpanan suhu ultra-rendah adalah yang paling biasa dalam nitrogen fasa wap. Apabila sampel mesti disimpan dalam fasa cecair, tiub cryoflex khusus harus digunakan.

Kelemahan ke fasa wap adalah bahawa kecerunan suhu menegak boleh berlaku mengakibatkan turun naik suhu antara -135 ℃ dan -190 ℃. Ini memerlukan pemantauan yang teliti dan rajin terhadap tahap nitrogen cecair dan variasi suhu (5).

Ramai pengeluar mengesyorkan bahawa cryovials sesuai untuk penyimpanan ke -135 ℃ atau untuk digunakan dalam fasa wap sahaja.

Mencairkan sel -sel cryopreserved anda

Prosedur pencairan adalah tekanan untuk budaya beku, dan pengendalian dan teknik yang betul diperlukan untuk memastikan daya maju, pemulihan, dan fungsi yang optimum. Protokol pencairan yang tepat akan bergantung kepada jenis sel tertentu. Walau bagaimanapun, pencairan cepat dianggap standard untuk:

• Mengurangkan kesan terhadap pemulihan selular
• Bantu mengurangkan masa pendedahan kepada larutan yang terdapat di media pembekuan
• Kurangkan sebarang kerosakan oleh ICE Recrystallisation

Mandi air, mandi manik, atau instrumen automatik khusus biasanya digunakan untuk mencairkan sampel.

Selalunya 1 sel sel dicairkan pada satu masa selama 1-2 minit, dengan perlahan-lahan berputar di dalam 37 ℃ air mandi sehingga hanya sedikit ais yang tersisa di dalam botol sebelum mereka dibasuh dalam medium pertumbuhan yang disedari.

Bagi sesetengah sel seperti embrio mamalia, pemanasan perlahan adalah penting untuk kelangsungan hidup mereka.

Sel -sel kini bersedia untuk budaya sel, pengasingan sel, atau dalam kes sel stem haematopoietik - kajian daya maju untuk menjamin integriti sel stem penderma sebelum terapi myeloablative.

Adalah amalan biasa untuk mengambil aliquot kecil sampel yang telah digunakan untuk melakukan kiraan sel untuk menentukan kepekatan sel untuk penyaduran dalam budaya. Anda kemudian boleh menilai hasil prosedur pengasingan sel dan menentukan daya maju sel.

Amalan terbaik untuk penyimpanan cryovial

Cryopreservation sampel yang disimpan dalam cryovials bergantung kepada banyak elemen dalam protokol termasuk penyimpanan dan penyimpanan rekod yang betul.

• Sel berpecah antara lokasi penyimpanan- Jika jumlah membenarkan, sel -sel perpecahan antara botol dan simpannya di lokasi yang berasingan untuk mengurangkan risiko kehilangan sampel akibat kegagalan peralatan.
• Mencegah pencemaran silang-Memilih botol kriogenik steril tunggal atau autoklaf sebelum penggunaan berikutnya
• Gunakan botol bersaiz yang sesuai untuk sel anda- Vials datang dalam pelbagai jilid antara 1 dan 5mls. Elakkan daripada overfilling vials untuk mengurangkan risiko retak.
• Pilih botol kriogenik dalaman atau luaran- Vials yang diulurkan secara dalaman disyorkan oleh sesetengah universiti untuk langkah -langkah keselamatan - mereka juga boleh mencegah pencemaran semasa mengisi atau apabila disimpan dalam nitrogen cecair.
• Mencegah kebocoran-Gunakan meterai yang disuntik biur yang dibentuk ke dalam cap skru atau O-ring untuk mengelakkan kebocoran dan pencemaran.
• Gunakan barcode 2D dan botol label- Untuk memastikan kebolehkesanan, botol dengan kawasan penulisan yang besar membolehkan setiap botol dilabelkan. Barcode 2D boleh membantu pengurusan penyimpanan dan penyimpanan rekod. Topi berkod warna berguna untuk mengenal pasti lebih mudah.
• Penyelenggaraan penyimpanan yang mencukupi- Untuk memastikan sel -sel tidak hilang, kapal penyimpanan harus sentiasa memantau tahap suhu dan nitrogen cecair. Penggera harus dipasang untuk memberi amaran kepada pengguna kesilapan.

Langkah berjaga -jaga keselamatan

Nitrogen cecair telah menjadi amalan biasa dalam penyelidikan moden tetapi membawa risiko kecederaan serius jika digunakan secara tidak betul.

Peralatan pelindung peribadi yang betul (PPE) harus dipakai untuk meminimumkan risiko radang, luka bakar dan insiden buruk lain ketika mengendalikan nitrogen cecair. Pakai

• Sarung Tangan Cryogenic
• Laboratorium Laboratorium
• Perisai muka penuh yang tahan yang juga meliputi leher
• Kasut kaki tertutup
• Apron plastik splashproof

Peti sejuk nitrogen cecair harus diletakkan di kawasan pengaliharaan yang baik untuk meminimumkan risiko asphyxiation-melarikan diri nitrogen menguap dan menggantikan oksigen atmosfera. Kedai jumlah besar harus mempunyai sistem penggera oksigen yang rendah.

Bekerja secara berpasangan apabila mengendalikan nitrogen cecair adalah ideal dan penggunaannya di luar waktu kerja biasa harus dilarang.

Cryovials untuk menyokong aliran kerja anda

Suzhou Ace Biomedical Company menawarkan pelbagai pilihan produk yang memenuhi keperluan cryopreservation anda untuk pelbagai jenis sel. Portfolio ini merangkumi pelbagai tiub dan pelbagai cryovials steril.

Cryovial kami adalah:

• Lab Skru Lab 0.5ml 1.5ml 2.0ml Vials Cryogenic Cryogenic Cryotube Bawah Cryotube dengan Gasket

  ● spesifikasi 0.5ml, 1.5ml, 2.0ml, dengan skirt atau tanpa skirt
  ● Reka bentuk konkrit atau diri sendiri, steril atau tidak steril boleh didapati
  ● Tiub topi skru diperbuat daripada polipropilena gred perubatan
  ● Vials pp cryotube boleh berulang kali dibekukan dan dicairkan
  ● Reka bentuk topi luaran dapat mengurangkan kebarangkalian pencemaran semasa rawatan sampel.
  ● Skru Cap Cryogenic Tubes Thread Skru Universal untuk digunakan
  ● Tiub sesuai dengan rotor yang paling biasa
  ● Tiub Cryogenic Tube O-Ring sesuai dengan standard 1-inci dan 2 inci, 48well, 81well, 96well dan 100well freezer boxes
  ● Autoclavable hingga 121 ° C dan beku hingga -86 ° C

  Bahagian Tidak	Bahan	Kelantangan	CapWarna	PCS/Beg	Beg/kes
  ACT05-BL-N	PP	0.5ml	Hitam, kuning, biru, merah, ungu, putih	500	10
  ACT15-BL-N	PP	1.5ml	Hitam, kuning, biru, merah, ungu, putih	500	10
  ACT15-BL-NW	PP	1.5ml	Hitam, kuning, biru, merah, ungu, putih	500	10
  ACT20-BL-N	PP	2.0ml	Hitam, kuning, biru, merah, ungu, putih	500	10