Apabila mengepam isipadu dari 0.2 hingga 5 µL, ketepatan dan kejituan pipet adalah amat penting, teknik paip yang baik adalah penting kerana kesilapan pengendalian lebih jelas dengan volum yang kecil.
Memandangkan lebih tumpuan diberikan untuk mengurangkan reagen dan kos, volum yang lebih kecil adalah permintaan yang tinggi, contohnya, untuk penyediaan PCR Mastermix atau tindak balas enzim. Tetapi pemipetan volum kecil daripada 0.2 – 5 µL menetapkan cabaran baharu untuk ketepatan dan ketepatan pemipetan. Perkara-perkara berikut adalah penting:
- Saiz pipet dan hujung: Sentiasa pilih pipet dengan isipadu nominal terendah yang mungkin dan hujung terkecil untuk memastikan kusyen udara sekecil mungkin. Apabila memadankan 1 µL cth, pilih pipet 0.25 – 2.5 µL dan hujung padanan daripada pipet 1 – 10 µL.
- Penentukuran dan penyelenggaraan: Adalah penting bahawa pipet anda ditentukur dan diselenggara dengan betul. Pelarasan kecil dan bahagian yang pecah pada pipet membawa kepada peningkatan besar-besaran dalam nilai ralat sistematik dan rawak. Penentukuran mengikut ISO 8655 mesti dilakukan sekali setahun.
- Pipet anjakan positif: Periksa sama ada anda mempunyai pipet anjakan positif dengan julat volum rendah dalam makmal anda. Secara umum, menggunakan pipet jenis ini membawa kepada hasil pipet yang lebih baik dari segi ketepatan dan ketepatan berbanding pipet kusyen udara klasik.
- Cuba gunakan volum yang lebih besar: Anda boleh mempertimbangkan untuk mencairkan sampel anda untuk mepipet volum yang lebih besar dengan kuantiti yang sama dalam tindak balas akhir. Ini boleh mengurangkan ralat pipet dengan volum sampel yang sangat kecil.
Selain alat yang bagus, pengkaji mesti mempunyai teknik pipet yang sangat baik. Beri perhatian khusus kepada langkah-langkah berikut:
- Lampiran hujung: Jangan jematkan pipet pada hujung kerana ini boleh merosakkan hujung hujung halus menyebabkan alur cecair dialihkan atau merosakkan orifis. Hanya gunakan tekanan ringan apabila memasang hujung dan gunakan pipet dengan kon hujung pegas.
- Memegang pipet: Jangan pegang pipet di tangan anda semasa menunggu emparan, cycler, dsb. Bahagian dalam pipet akan menjadi panas dan menyebabkan kusyen udara mengembang mengakibatkan penyelewengan daripada volum yang ditetapkan semasa pipet.
- Pra-pembasahan: Pelembapan udara di dalam hujung dan pipet menyediakan hujung untuk sampel dan mengelakkan penyejatan apabila menyedut isipadu pemindahan.
- Aspirasi menegak: Ini sangat penting apabila mengendalikan isipadu kecil untuk mengelakkan kesan kapilari yang berlaku apabila pipet dipegang pada sudut.
- Kedalaman rendaman: Rendam hujung sekecil mungkin untuk mengelakkan cecair memasuki hujung akibat kesan kapilari. Peraturan biasa: Semakin kecil hujung dan kelantangan, semakin rendah kedalaman rendaman. Kami mengesyorkan maksimum 2 mm apabila mepipet isipadu kecil.
- Mendispens pada sudut 45°: Aliran keluar optimum cecair dijamin apabila pipet dipegang pada sudut 45°.
- Sentuhan dengan dinding vesel atau permukaan cecair: Isipadu kecil hanya boleh disalurkan dengan betul apabila hujungnya dipegang pada dinding vesel, atau direndam ke dalam cecair. Malah titisan terakhir dari hujung boleh dikeluarkan dengan tepat.
- Hembusan: Hembusan adalah wajib selepas mengeluarkan isipadu yang rendah untuk mengeluarkan walaupun titisan cecair terakhir yang ada di hujungnya. Hembusan juga harus dilakukan terhadap dinding kapal. Berhati-hati agar tidak membawa gelembung udara ke dalam sampel apabila melakukan hembusan pada permukaan cecair.
Masa siaran: Feb-18-2021