क्रायोव्हियल्सलिक्विड नायट्रोजनने भरलेल्या डेवर्समध्ये सेल लाईन्स आणि इतर गंभीर जैविक सामग्रीच्या क्रायोजेनिक स्टोरेजसाठी सामान्यतः वापरले जाते.

द्रव नायट्रोजनमधील पेशींच्या यशस्वी संरक्षणामध्ये अनेक टप्पे गुंतलेले आहेत. मूलभूत तत्त्व एक हळू फ्रीझ आहे, नियुक्त केलेले अचूक तंत्र सेल प्रकार आणि वापरलेल्या क्रायोप्रोटेक्टंटवर अवलंबून असते. अशा कमी तापमानात पेशी साठवताना अनेक सुरक्षा विचार आणि उत्तम पद्धती विचारात घेतात.

या पोस्टचे उद्दीष्ट आहे की क्रायोव्हिअल्स लिक्विड नायट्रोजनमध्ये कसे साठवले जातात याचा आढावा.

क्रायोव्हियल्स काय आहेत

क्रायोव्हियल्स लहान आहेत, अत्यंत कमी तापमानात द्रव नमुने संग्रहित करण्यासाठी डिझाइन केलेले कुपी आहेत. ते सुनिश्चित करतात की क्रायोप्रोटेक्टंटमध्ये संरक्षित पेशी द्रव नायट्रोजनच्या थेट संपर्कात येऊ शकत नाहीत आणि सेल्युलर फ्रॅक्चरचा धोका कमी करतात परंतु द्रव नायट्रोजनच्या अत्यंत शीतल परिणामामुळे अद्याप फायदा होतो.

कुपी सहसा व्हॉल्यूम आणि डिझाईन्सच्या श्रेणीमध्ये उपलब्ध असतात - ते अंतर्गत किंवा बाह्यरित्या सपाट किंवा गोलाकार तळासह थ्रेड केलेले असू शकतात. निर्जंतुकीकरण आणि नॉन-स्टिरिल स्वरूप देखील उपलब्ध आहेत.

कोण वापरतेसायरोव्हियल्सलिक्विड नायट्रोजनमध्ये पेशी साठवणे

एनएचएस आणि खाजगी प्रयोगशाळांची श्रेणी तसेच कॉर्ड रक्त बँकिंग, एपिथेलियल सेल जीवशास्त्र, इम्यूनोलॉजी आणि स्टेम सेल बायोलॉजीमध्ये तज्ज्ञ संशोधन संस्था क्रायोप्रिझर्व्ह पेशींमध्ये क्रायोव्हियल्स वापरतात.

अशा प्रकारे संरक्षित पेशींमध्ये बी आणि टी पेशी, सीएचओ पेशी, हेमेटोपोएटिक स्टेम आणि प्रोजेनिटर पेशी, संकरित पेशी, आतड्यांसंबंधी पेशी, मॅक्रोफेज, मेन्स्चिमल स्टेम आणि पूर्वज पेशी, मोनोसाइट्स, मायलोमा, एनके पेशी आणि प्लुरिपोटेंट स्टेम पेशींचा समावेश आहे.

लिक्विड नायट्रोजनमध्ये क्रायोव्हियल कसे साठवायचे याचे विहंगावलोकन

क्रायोप्रिझर्वेशन ही एक प्रक्रिया आहे जी पेशी आणि इतर जैविक कन्स्ट्रक्शन्सला अत्यंत कमी तापमानात थंड करून जतन करते. पेशींच्या व्यवहार्यतेचे नुकसान न करता पेशी वर्षानुवर्षे द्रव नायट्रोजनमध्ये साठवल्या जाऊ शकतात. हे नियुक्त केलेल्या प्रक्रियेची रूपरेषा आहे.

सेल तयारी

नमुने तयार करण्याची नेमकी पद्धत सेल प्रकारानुसार बदलू शकते, परंतु सर्वसाधारणपणे, सेल समृद्ध गोळी विकसित करण्यासाठी पेशी एकत्रित आणि सेंट्रीफ्यूज केल्या जातात. हे गोळी नंतर क्रिओप्रोटेक्टंट किंवा क्रायोप्रिझर्वेशन माध्यमात मिसळलेल्या सुपरनेटॅन्टमध्ये पुन्हा तयार केली जाते.

क्रायोप्रिझर्वेशन माध्यम

हे माध्यम कमी-तापमानाच्या वातावरणात पेशी जपण्यासाठी कार्यरत आहे ज्यायोगे त्यांना इंट्रा आणि एक्स्ट्रासेल्युलर क्रिस्टल्स तयार होण्यास प्रतिबंधित केले जाईल आणि म्हणूनच सेल मृत्यू. त्यांची भूमिका अतिशीत, साठवण आणि वितळविण्याच्या प्रक्रियेदरम्यान पेशी आणि ऊतींसाठी सुरक्षित, संरक्षणात्मक वातावरण प्रदान करणे आहे.

ताजे गोठविलेले प्लाझ्मा (एफएफपी), हेपरिनिज्ड प्लाझमॅलिट सोल्यूशन किंवा सीरम-फ्री, प्राण्यांचे घटक-मुक्त सोल्यूशन्स डायमेथिल सल्फोक्साइड (डीएमएसओ) किंवा ग्लिसरॉल सारख्या क्रायोप्रोटेक्टंट्समध्ये मिसळले जातात.

री-लिक्वाइड नमुना गोळी पॉलीप्रॉपिलिन क्रायोव्हियल्समध्ये अलिकोट केलेली आहेसुझो एसीई बायोमेडिकल कंपनी क्रायोजेनिक स्टोरेज व्हायल्स.

क्रायोव्हिअल्सवर ओव्हरफिल करणे महत्वाचे आहे कारण यामुळे क्रॅक होण्याचा धोका आणि सामग्रीचे संभाव्य प्रकाशन (1) वाढेल.

नियंत्रित फ्रीझ रेट

सर्वसाधारणपणे, पेशींच्या यशस्वी क्रायोप्रिझर्वेशनसाठी हळू नियंत्रित फ्रीझ रेट वापरला जातो.

नमुने क्रायोजेनिक कुपींमध्ये अल्कोट केल्यावर, ते ओल्या बर्फावर किंवा 4 ℃ रेफ्रिजरेटरमध्ये ठेवल्या जातात आणि अतिशीत प्रक्रिया 5 मिनिटांत सुरू होते. सामान्य मार्गदर्शक म्हणून, पेशी प्रति मिनिट -1 ते -3 दराने थंड केल्या जातात (2). हे प्रोग्राम करण्यायोग्य कूलरचा वापर करून किंवा –70 डिग्री सेल्सियस ते –90 डिग्री सेल्सियस नियंत्रित दर फ्रीझरमध्ये ठेवलेल्या इन्सुलेटेड बॉक्समध्ये कुपी ठेवून हे साध्य केले जाते.

द्रव नायट्रोजनमध्ये हस्तांतरित करा

गोठवलेल्या क्रायोजेनिक कुपी नंतर अनिश्चित काळासाठी द्रव नायट्रोजन टाकीमध्ये हस्तांतरित केल्या जातात जर -135 than पेक्षा कमी तापमान राखले जाते.

हे अल्ट्रा-कमी तापमान द्रव किंवा वाष्प फेज नायट्रोजनमध्ये विसर्जन करून मिळू शकते.

द्रव किंवा वाष्प टप्पा?

लिक्विड फेज नायट्रोजनमध्ये स्टोरेज संपूर्ण सुसंगततेसह थंड तापमान राखण्यासाठी ओळखले जाते, परंतु खालील कारणांमुळे बहुतेक वेळा शिफारस केली जात नाही:

• द्रव नायट्रोजनच्या मोठ्या प्रमाणात (खोली) आवश्यक आहे जो संभाव्य धोका आहे. यामुळे बर्न्स किंवा दमछाक करणे हा एक वास्तविक धोका आहे.
• एस्परगिलस, एचईपी बी आणि व्हायरल पसरलेल्या द्रव नायट्रोजन माध्यमांद्वारे (2,3) संसर्गजन्य एजंट्सद्वारे क्रॉस-दस्तऐवजीकरणाच्या दस्तऐवजीकरण प्रकरणे
• विसर्जन दरम्यान लिक्विड नायट्रोजनची कुपींमध्ये गळती होण्याची संभाव्यता. जेव्हा स्टोरेजमधून काढले जाते आणि खोलीच्या तपमानावर गरम केले जाते, तेव्हा नायट्रोजन वेगाने विस्तारते. परिणामी, लिक्विड नायट्रोजन स्टोरेजमधून काढून टाकल्यास कुपी तुटू शकते, ज्यामुळे उडणा dra ्या मोडतोड आणि सामग्री (1, 4) या दोहोंचा धोका निर्माण होतो.

या कारणांमुळे, अल्ट्रा-कमी तापमान साठा सामान्यत: वाष्प टप्प्यात नायट्रोजनमध्ये असतो. जेव्हा नमुने द्रव टप्प्यात साठवले जाणे आवश्यक आहे, तेव्हा विशेष क्रायोफ्लेक्स ट्यूबिंग वापरली पाहिजे.

वाष्प अवस्थेची नकारात्मक बाजू अशी आहे की अनुलंब तापमान ग्रेडियंट उद्भवू शकतो ज्यामुळे -135 ℃ आणि -190 between दरम्यान तापमानात चढ -उतार होऊ शकतात. हे द्रव नायट्रोजन पातळी आणि तापमानातील भिन्नतेचे काळजीपूर्वक आणि मेहनती देखरेखीची आवश्यकता आहे (5).

बर्‍याच उत्पादकांनी अशी शिफारस केली आहे की क्रायोव्हियल्स -१3535 पर्यंतच्या स्टोरेजसाठी किंवा केवळ वाष्प टप्प्यात वापरण्यासाठी योग्य आहेत.

आपल्या क्रायोप्रिझर्व्ह पेशी वितळवित आहे

गोठवलेल्या संस्कृतीसाठी वितळण्याची प्रक्रिया तणावपूर्ण आहे आणि पेशींची इष्टतम व्यवहार्यता, पुनर्प्राप्ती आणि कार्यक्षमता सुनिश्चित करण्यासाठी योग्य हाताळणी आणि तंत्र आवश्यक आहे. अचूक वितळणारे प्रोटोकॉल विशिष्ट सेल प्रकारांवर अवलंबून असतील. तथापि, जलद पिळणे हे मानक मानले जाते:

• सेल्युलर पुनर्प्राप्तीवर कोणताही परिणाम कमी करा
• अतिशीत माध्यमांमध्ये उपस्थित असलेल्या विरघळण्यासाठी एक्सपोजर वेळ कमी करण्यात मदत करा
• आयसीई रीक्रिस्टलायझेशनद्वारे कोणतेही नुकसान कमी करा

पाण्याचे बाथ, मणी बाथ किंवा विशेष स्वयंचलित उपकरणे सामान्यत: नमुने वितळण्यासाठी वापरली जातात.

बहुतेक वेळा 1-2 मिनिटांसाठी 1 सेल लाइन वितळविली जाते, प्रीवर्मेड ग्रोथ मीडियममध्ये धुतण्यापूर्वी कुपीमध्ये थोडासा बर्फ शिल्लक होईपर्यंत 37 ℃ वॉटर बाथमध्ये हळूवारपणे फिरत असतो.

स्तनपायी गर्भासारख्या काही पेशींसाठी, त्यांच्या अस्तित्वासाठी स्लो वार्मिंग आवश्यक आहे.

पेशी आता सेल संस्कृती, सेल अलगावसाठी किंवा हेमेटोपोएटिक स्टेम पेशींच्या बाबतीत तयार आहेत - मायलोबेटिव्ह थेरपीपूर्वी देणगीदार स्टेम पेशींच्या अखंडतेची हमी देण्यासाठी व्यवहार्यता अभ्यास.

संस्कृतीत प्लेटिंगसाठी सेल एकाग्रता निश्चित करण्यासाठी सेलची संख्या करण्यासाठी वापरल्या जाणार्‍या प्रीवेश केलेल्या नमुन्याचे लहान अलिकॉट्स घेणे ही सामान्य पद्धत आहे. त्यानंतर आपण सेल अलगाव प्रक्रियेच्या निकालांचे मूल्यांकन करू शकता आणि सेल व्यवहार्यता निश्चित करू शकता.

क्रायोव्हियल्सच्या साठवणुकीसाठी सर्वोत्तम सराव

क्रायोव्हियल्समध्ये संग्रहित नमुन्यांचे यशस्वी क्रायोप्रिझर्वेशन योग्य स्टोरेज आणि रेकॉर्ड ठेवणे यासह प्रोटोकॉलमधील बर्‍याच घटकांवर अवलंबून असते.

• स्टोरेज स्थानांमधील पेशी विभाजित करा- जर व्हॉल्यूम परवानगी देत ​​असेल तर, कुपी दरम्यान विभाजित पेशी आणि उपकरणांच्या अपयशामुळे नमुना कमी होण्याचा धोका कमी करण्यासाठी त्यांना स्वतंत्र ठिकाणी साठवतात.
• क्रॉस-दूषितपणा प्रतिबंधित करा-त्यानंतरच्या वापरापूर्वी एकल-वापर निर्जंतुकीकरण क्रायोजेनिक कुपी किंवा ऑटोक्लेव्हची निवड करा
• आपल्या पेशींसाठी योग्य आकाराच्या कुपी वापरा- कुपी 1 आणि 5 मिलीलीटर दरम्यान खंडांच्या श्रेणीत येतात. क्रॅक होण्याचा धोका कमी करण्यासाठी ओव्हरफिलिंग कुपी टाळा.
• अंतर्गत किंवा बाह्यरित्या थ्रेडेड क्रायोजेनिक कुपी निवडा- काही विद्यापीठांद्वारे सुरक्षा उपायांसाठी अंतर्गत थ्रेडेड कुपींची शिफारस केली जाते - ते भरण्याच्या दरम्यान किंवा द्रव नायट्रोजनमध्ये साठवताना दूषित होण्यापासून देखील प्रतिबंधित करू शकतात.
• गळतीस प्रतिबंध करा-गळती आणि दूषित होण्यापासून रोखण्यासाठी स्क्रू-कॅप किंवा ओ-रिंग्जमध्ये मोल्ड केलेले द्वि-इंजेक्टेड सील वापरा.
• 2 डी बारकोड आणि लेबल कुपी वापरा- ट्रेसिबिलिटी सुनिश्चित करण्यासाठी, मोठ्या लेखन क्षेत्रासह कुपी प्रत्येक कुपीला पुरेसे लेबल लावण्यास सक्षम करतात. 2 डी बारकोड स्टोरेज व्यवस्थापन आणि रेकॉर्ड ठेवण्यास मदत करू शकतात. रंग कोडित कॅप्स सुलभ ओळखण्यासाठी उपयुक्त आहेत.
• पुरेसे स्टोरेज देखभाल- पेशी हरवल्या नाहीत याची खात्री करण्यासाठी, स्टोरेज जहाजांनी तापमान आणि द्रव नायट्रोजन पातळीवर सतत निरीक्षण केले पाहिजे. वापरकर्त्यांना त्रुटींविषयी सतर्क करण्यासाठी अलार्म बसवावा.

सुरक्षा खबरदारी

आधुनिक संशोधनात लिक्विड नायट्रोजन ही सामान्य पद्धत बनली आहे परंतु चुकीच्या पद्धतीने वापरल्यास गंभीर जखम होण्याचा धोका आहे.

द्रव नायट्रोजन हाताळताना फ्रॉस्टबाइट, बर्न्स आणि इतर प्रतिकूल घटनांचा धोका कमी करण्यासाठी योग्य वैयक्तिक संरक्षणात्मक उपकरणे (पीपीई) घातली पाहिजेत. परिधान करा

• क्रायोजेनिक ग्लोव्हज
• प्रयोगशाळेचा कोट
• प्रभाव प्रतिरोधक पूर्ण चेहरा ढाल जो मान देखील व्यापतो
• बंद-टू शूज
• स्प्लॅशप्रूफ प्लास्टिक अ‍ॅप्रॉन

द्रव नायट्रोजन रेफ्रिजरेटर्स श्वासोच्छवासाच्या जोखमी कमी करण्यासाठी चांगल्या-हवेशीर भागात ठेवल्या पाहिजेत-एस्केप्ड नायट्रोजन वाष्पीकरण आणि वातावरणीय ऑक्सिजन विस्थापित करते. मोठ्या प्रमाणात स्टोअरमध्ये ऑक्सिजन अलार्म सिस्टममध्ये कमी असणे आवश्यक आहे.

द्रव नायट्रोजन हाताळताना जोड्यांमध्ये काम करणे आदर्श आहे आणि सामान्य कामकाजाच्या वेळेच्या बाहेर त्याचा वापर करण्यास मनाई केली पाहिजे.

आपल्या वर्कफ्लोला समर्थन देण्यासाठी क्रायोव्हियल्स

सुझो एसीई बायोमेडिकल कंपनी विविध प्रकारच्या पेशींसाठी आपल्या क्रायोप्रिझर्वेशन गरजा पूर्ण करणार्‍या उत्पादनांची विस्तृत निवड ऑफर करते. पोर्टफोलिओमध्ये ट्यूब्सची श्रेणी तसेच निर्जंतुकीकरण क्रायोव्हियल्सची श्रेणी समाविष्ट आहे.

आमची क्रायोव्हियल्स आहेत:

• लॅब स्क्रू कॅप

  स्कर्टसह किंवा स्कर्टशिवाय ● 0.5 मिली, 1.5 मिली, 2.0 मिली स्पेसिफिकेशन
  ● शंकूच्या आकाराचे किंवा सेल्फ स्टँडिंग डिझाइन, निर्जंतुकीकरण किंवा नॉन-स्टिरिल दोन्ही उपलब्ध आहेत
  ● स्क्रू कॅप नळ्या वैद्यकीय ग्रेड पॉलीप्रॉपिलिनपासून बनविल्या जातात
  ● पीपी क्रिओट्यूब वायल्स वारंवार गोठवल्या जाऊ शकतात आणि वितळल्या जाऊ शकतात
  Sample बाह्य कॅप डिझाइन नमुना उपचार दरम्यान दूषित होण्याची शक्यता कमी करू शकते.
  ● स्क्रू कॅप क्रायोजेनिक ट्यूब युनिव्हर्सल स्क्रू थ्रेड्स वापरासाठी
  ● ट्यूब सर्वात सामान्य रोटर्समध्ये फिट बसतात
  ● क्रायोजेनिक ट्यूब ओ-रिंग ट्यूब्स मानक 1-इंच आणि 2 इंच, 48 वावेल, 81 वावेल ， 96 वॉल आणि 100 वेवेल फ्रीजर बॉक्स फिट करतात
  12 121 डिग्री सेल्सियस ते ऑटोक्लेव्हेबल आणि -86 ° से.

  भाग क्रमांक	साहित्य	खंड	कॅपरंग	पीसी/पिशवी	पिशव्या/केस
  कायदा 05-बीएल-एन	PP	0.5 मिली	काळा, पिवळा, निळा, लाल, जांभळा, पांढरा	500	10
  कायदा 15 बीएल-एन	PP	1.5 मिली	काळा, पिवळा, निळा, लाल, जांभळा, पांढरा	500	10
  कायदा 15-बीएल-एनडब्ल्यू	PP	1.5 मिली	काळा, पिवळा, निळा, लाल, जांभळा, पांढरा	500	10
  कायदा 20-बीएल-एन	PP	2.0 मिली	काळा, पिवळा, निळा, लाल, जांभळा, पांढरा	500	10