क्रायोव्हियल्ससामान्यत: द्रव नायट्रोजनने भरलेल्या डेवर्समध्ये सेल लाइन्स आणि इतर गंभीर जैविक सामग्रीच्या क्रायोजेनिक स्टोरेजसाठी वापरले जातात.

द्रव नायट्रोजनमध्ये पेशींच्या यशस्वी संरक्षणामध्ये अनेक टप्प्यांचा समावेश आहे. मूलभूत तत्त्व म्हणजे स्लो फ्रीज, वापरण्यात येणारे अचूक तंत्र सेल प्रकार आणि वापरलेल्या क्रायोप्रोटेक्टंटवर अवलंबून असते. अशा कमी तापमानात पेशी साठवताना अनेक सुरक्षितता विचार आणि सर्वोत्तम पद्धती विचारात घेतल्या जातात.

या पोस्टचा उद्देश द्रव नायट्रोजनमध्ये क्रायोव्हियल कसे साठवले जातात याचे विहंगावलोकन देणे आहे.

Cryovials काय आहेत

क्रायोव्हियल्स लहान, आच्छादित कुपी आहेत ज्या अत्यंत कमी तापमानात द्रव नमुने साठवण्यासाठी डिझाइन केल्या आहेत. ते हे सुनिश्चित करतात की क्रायोप्रोटेक्टंटमध्ये जतन केलेल्या पेशी द्रव नायट्रोजनच्या थेट संपर्कात येत नाहीत, ज्यामुळे सेल्युलर फ्रॅक्चरचा धोका कमी होतो आणि तरीही द्रव नायट्रोजनच्या अत्यंत थंड प्रभावाचा फायदा होतो.

कुपी सामान्यत: व्हॉल्यूम आणि डिझाईन्सच्या श्रेणीमध्ये उपलब्ध असतात - त्या सपाट किंवा गोलाकार बॉटम्ससह अंतर्गत किंवा बाहेरून थ्रेड केलेल्या असू शकतात. निर्जंतुकीकरण आणि निर्जंतुकीकरण नसलेले स्वरूप देखील उपलब्ध आहेत.

कोण वापरतोसायरोव्हियल्सद्रव नायट्रोजन मध्ये पेशी साठवण्यासाठी

NHS आणि खाजगी प्रयोगशाळांची श्रेणी, तसेच कॉर्ड ब्लड बँकिंग, एपिथेलियल सेल बायोलॉजी, इम्युनोलॉजी आणि स्टेम सेल बायोलॉजी मध्ये विशेष संशोधन संस्था पेशी क्रायोप्रीझर्व्ह करण्यासाठी क्रायोव्हियल वापरतात.

अशा प्रकारे जतन केलेल्या पेशींमध्ये बी आणि टी पेशी, सीएचओ पेशी, हेमॅटोपोएटिक स्टेम आणि प्रोजेनिटर सेल, हायब्रिडोमास, आतड्यांसंबंधी पेशी, मॅक्रोफेजेस, मेसेंचिमल स्टेम आणि प्रोजेनिटर सेल, मोनोसाइट्स, मायलोमा, एनके सेल आणि प्लुरिपोटेंट स्टेम सेल यांचा समावेश होतो.

लिक्विड नायट्रोजनमध्ये क्रायओव्हियल कसे साठवायचे याचे विहंगावलोकन

Cryopreservation ही एक प्रक्रिया आहे जी पेशी आणि इतर जैविक रचनांना अतिशय कमी तापमानात थंड करून त्यांचे संरक्षण करते. पेशींची व्यवहार्यता न गमावता अनेक वर्षे द्रव नायट्रोजनमध्ये साठवून ठेवता येतात. ही नियोजित प्रक्रियांची रूपरेषा आहे.

सेलची तयारी

नमुने तयार करण्याची अचूक पद्धत सेल प्रकारानुसार बदलू शकते, परंतु सर्वसाधारणपणे, सेल-समृद्ध गोळी विकसित करण्यासाठी पेशी गोळा केल्या जातात आणि सेंट्रीफ्यूज केल्या जातात. ही गोळी नंतर क्रायोप्रोटेक्टंट किंवा क्रायोप्रीझर्व्हेशन माध्यमात मिसळलेल्या सुपरनॅटंटमध्ये पुन्हा लावली जाते.

Cryopreservation माध्यम

हे माध्यम कमी-तापमानाच्या वातावरणात पेशींचे संरक्षण करण्यासाठी वापरले जाते ज्यांच्या अधीन ते इंट्रा आणि एक्स्ट्रासेल्युलर क्रिस्टल्सची निर्मिती रोखतात आणि त्यामुळे सेल मृत्यू होतो. अतिशीत, साठवण आणि वितळण्याच्या प्रक्रियेदरम्यान पेशी आणि ऊतींसाठी सुरक्षित, संरक्षणात्मक वातावरण प्रदान करणे ही त्यांची भूमिका आहे.

ताजे फ्रोझन प्लाझ्मा (FFP), हेपरिनाइज्ड प्लाझमालाइट सोल्यूशन किंवा सीरम-मुक्त, प्राणी घटक-मुक्त द्रावण यांसारखे माध्यम डायमिथाइल सल्फॉक्साइड (DMSO) किंवा ग्लिसरॉल सारख्या क्रायोप्रोटेक्टंट्समध्ये मिसळले जाते.

री-लिक्विफाइड सॅम्पल पॅलेट पॉलीप्रॉपिलीन क्रायओव्हियल्समध्ये अलिकोट केले जाते जसे कीSuzhou Ace बायोमेडिकल कंपनी Cryogenic Storage Vials.

क्रायोव्हियल्स ओव्हरफिल न करणे महत्वाचे आहे कारण यामुळे क्रॅक होण्याचा धोका वाढेल आणि सामग्रीचे संभाव्य प्रकाशन (1).

नियंत्रित फ्रीझ रेट

सर्वसाधारणपणे, पेशींच्या यशस्वी क्रायोप्रिझर्वेशनसाठी मंद नियंत्रित फ्रीझ रेट वापरला जातो.

नमुने क्रायोजेनिक वायल्समध्ये टाकल्यानंतर, ते ओल्या बर्फावर किंवा 4℃ रेफ्रिजरेटरमध्ये ठेवले जातात आणि 5 मिनिटांत गोठवण्याची प्रक्रिया सुरू केली जाते. सामान्य मार्गदर्शक म्हणून, पेशी -1 ते -3 प्रति मिनिट (2) च्या दराने थंड केल्या जातात. हे प्रोग्राम करण्यायोग्य कूलर वापरून किंवा -70°C ते -90°C नियंत्रित दर फ्रीझरमध्ये ठेवलेल्या इन्सुलेटेड बॉक्समध्ये कुपी ठेवून साध्य केले जाते.

लिक्विड नायट्रोजनमध्ये स्थानांतरित करा

गोठवलेल्या क्रायोजेनिक वायल्स नंतर -135 ℃ पेक्षा कमी तापमान राखल्यास अनिश्चित काळासाठी द्रव नायट्रोजन टाकीमध्ये स्थानांतरित केले जातात.

हे अति-कमी तापमान द्रव किंवा वाफ फेज नायट्रोजनमध्ये बुडवून मिळवता येते.

द्रव किंवा बाष्प टप्पा?

लिक्विड फेज नायट्रोजनमधील स्टोरेज हे थंड तापमानाला परिपूर्ण सातत्य राखण्यासाठी ओळखले जाते, परंतु बहुतेकदा खालील कारणांमुळे याची शिफारस केली जात नाही:

• मोठ्या प्रमाणात द्रव नायट्रोजनची गरज (खोली) जो संभाव्य धोका आहे. यामुळे भाजणे किंवा श्वास लागणे हा खरा धोका आहे.
• एस्परगिलस, हेप बी सारख्या संसर्गजन्य घटकांद्वारे क्रॉस-दूषित होण्याचे दस्तऐवजीकरण प्रकरणे आणि द्रव नायट्रोजन माध्यमाद्वारे विषाणूचा प्रसार (2,3)
• विसर्जन करताना द्रव नायट्रोजनची कुपींमध्ये गळती होण्याची शक्यता. जेव्हा स्टोरेजमधून काढून टाकले जाते आणि खोलीच्या तपमानावर गरम केले जाते तेव्हा नायट्रोजन वेगाने विस्तारतो. परिणामी, लिक्विड नायट्रोजन स्टोरेजमधून काढून टाकल्यावर कुपी चकनाचूर होऊ शकते, ज्यामुळे उडणाऱ्या ढिगाऱ्यापासून धोका निर्माण होतो (1, 4).

या कारणांमुळे, अति-कमी तापमान साठवण हे वाफ फेज नायट्रोजनमध्ये सामान्यतः असते. जेव्हा द्रव अवस्थेत नमुने संग्रहित करणे आवश्यक आहे, तेव्हा विशेष क्रायफ्लेक्स ट्यूबिंग वापरल्या पाहिजेत.

बाष्प अवस्थेची नकारात्मक बाजू अशी आहे की उभ्या तापमानाचा ग्रेडियंट उद्भवू शकतो ज्यामुळे -135℃ आणि -190℃ दरम्यान तापमान चढउतार होऊ शकतात. यासाठी द्रव नायट्रोजन पातळी आणि तापमानातील फरकांचे काळजीपूर्वक आणि परिश्रमपूर्वक निरीक्षण करणे आवश्यक आहे (5).

बऱ्याच उत्पादकांनी शिफारस केली आहे की क्रायोव्हिअल्स -135℃ पर्यंत स्टोरेजसाठी किंवा फक्त बाष्प टप्प्यात वापरण्यासाठी योग्य आहेत.

तुमच्या क्रायोप्रीझर्व केलेल्या पेशी वितळणे

गोठवलेल्या संस्कृतीसाठी वितळण्याची प्रक्रिया तणावपूर्ण आहे आणि पेशींची इष्टतम व्यवहार्यता, पुनर्प्राप्ती आणि कार्यक्षमता सुनिश्चित करण्यासाठी योग्य हाताळणी आणि तंत्र आवश्यक आहे. वितळण्याचे अचूक प्रोटोकॉल विशिष्ट सेल प्रकारांवर अवलंबून असतील. तथापि, जलद वितळणे यासाठी मानक मानले जाते:

• सेल्युलर पुनर्प्राप्तीवर कोणताही प्रभाव कमी करा
• अतिशीत माध्यमांमध्ये उपस्थित असलेल्या द्रावणांना एक्सपोजर वेळ कमी करण्यास मदत करा
• बर्फ पुनर्क्रिस्टलायझेशनद्वारे कोणतेही नुकसान कमी करा

नमुने वितळण्यासाठी वॉटर बाथ, बीड बाथ किंवा विशेष स्वयंचलित उपकरणे सामान्यतः वापरली जातात.

बऱ्याचदा 1 सेल लाईन एका वेळी 1-2 मिनिटांसाठी वितळली जाते, 37 डिग्री सेल्सियस पाण्याच्या बाथमध्ये हलक्या हाताने फिरवून, जोपर्यंत ते आधीपासून गरम केलेल्या वाढीच्या माध्यमात धुतले जाण्यापूर्वी कुपीमध्ये थोडासा बर्फ शिल्लक राहत नाही.

सस्तन प्राणी भ्रूणांसारख्या काही पेशींसाठी, त्यांच्या अस्तित्वासाठी मंद तापमानवाढ आवश्यक आहे.

पेशी आता सेल कल्चर, सेल आयसोलेशन किंवा हेमेटोपोएटिक स्टेम सेल्सच्या बाबतीत तयार आहेत - मायलोएब्लेटिव्ह थेरपीपूर्वी दाता स्टेम पेशींच्या अखंडतेची हमी देण्यासाठी व्यवहार्यता अभ्यास.

कल्चरमध्ये प्लेटिंगसाठी सेल सांद्रता निर्धारित करण्यासाठी सेल गणना करण्यासाठी वापरल्या जाणाऱ्या प्रीवॉश केलेल्या नमुन्याचे लहान अलिकॉट्स घेणे सामान्य आहे. त्यानंतर तुम्ही सेल अलगाव प्रक्रियेच्या परिणामांचे मूल्यांकन करू शकता आणि सेल व्यवहार्यता निर्धारित करू शकता.

Cryovials च्या स्टोरेजसाठी सर्वोत्तम पद्धती

क्रायोव्हियलमध्ये साठवलेल्या नमुन्यांचे यशस्वी क्रायोप्रिझर्वेशन प्रोटोकॉलमधील अनेक घटकांवर अवलंबून असते ज्यात योग्य स्टोरेज आणि रेकॉर्ड ठेवणे समाविष्ट आहे.

• स्टोरेज स्थानांमधील सेल विभाजित करा- जर व्हॉल्यूम्सची परवानगी असेल, तर उपकरणांच्या बिघाडामुळे नमुना नष्ट होण्याचा धोका कमी करण्यासाठी कुपींमधील पेशी विभाजित करा आणि त्यांना वेगळ्या ठिकाणी साठवा.
• क्रॉस-दूषित होण्यास प्रतिबंध करा- त्यानंतरच्या वापरापूर्वी एकल-वापर निर्जंतुकीकरण क्रायोजेनिक कुपी किंवा ऑटोक्लेव्हची निवड करा
• तुमच्या पेशींसाठी योग्य आकाराच्या कुपी वापरा- कुपी 1 ते 5 मिली दरम्यानच्या व्हॉल्यूमच्या श्रेणीमध्ये येतात. क्रॅक होण्याचा धोका कमी करण्यासाठी कुपी जास्त भरणे टाळा.
• अंतर्गत किंवा बाह्य थ्रेडेड क्रायोजेनिक कुपी निवडा- काही विद्यापीठांनी सुरक्षेच्या उपायांसाठी अंतर्गत थ्रेडेड शीश्यांची शिफारस केली आहे - ते भरताना किंवा द्रव नायट्रोजनमध्ये साठवल्यावर दूषित होण्यापासून रोखू शकतात.
• गळती रोखा- गळती आणि दूषित होण्यापासून रोखण्यासाठी स्क्रू-कॅप किंवा ओ-रिंगमध्ये मोल्ड केलेले द्वि-इंजेक्ट सील वापरा.
• 2D बारकोड आणि लेबल कुपी वापरा- शोधण्यायोग्यता सुनिश्चित करण्यासाठी, मोठ्या लेखन क्षेत्रासह कुपी प्रत्येक कुपीला पुरेसे लेबल लावण्यासाठी सक्षम करतात. 2D बारकोड स्टोरेज व्यवस्थापन आणि रेकॉर्ड ठेवण्यास मदत करू शकतात. सहज ओळखण्यासाठी कलर कोडेड कॅप्स उपयुक्त आहेत.
• पुरेशी स्टोरेज देखभाल- पेशी नष्ट होणार नाहीत याची खात्री करण्यासाठी, स्टोरेज वाहिन्यांनी तापमान आणि द्रव नायट्रोजन पातळीचे सतत निरीक्षण केले पाहिजे. वापरकर्त्यांना त्रुटींबद्दल सावध करण्यासाठी अलार्म लावले पाहिजेत.

सुरक्षा खबरदारी

लिक्विड नायट्रोजन हे आधुनिक संशोधनात सामान्य झाले आहे परंतु चुकीच्या पद्धतीने वापरल्यास गंभीर इजा होण्याचा धोका असतो.

द्रव नायट्रोजन हाताळताना फ्रॉस्टबाइट, बर्न्स आणि इतर प्रतिकूल घटनांचा धोका कमी करण्यासाठी योग्य वैयक्तिक संरक्षणात्मक उपकरणे (पीपीई) परिधान केली पाहिजेत. परिधान करा

• क्रायोजेनिक हातमोजे
• प्रयोगशाळा कोट
• प्रभाव प्रतिरोधक पूर्ण चेहरा ढाल जे मान देखील झाकते
• बंद पायाचे शूज
• स्प्लॅशप्रूफ प्लास्टिक एप्रन

श्वासोच्छवासाचा धोका कमी करण्यासाठी द्रव नायट्रोजन रेफ्रिजरेटर हवेशीर भागात ठेवावे - सुटलेला नायट्रोजन वातावरणातील ऑक्सिजनची बाष्पीभवन करतो आणि विस्थापित करतो. मोठ्या आकाराच्या स्टोअरमध्ये कमी ऑक्सिजन अलार्म सिस्टम असणे आवश्यक आहे.

द्रव नायट्रोजन हाताळताना जोड्यांमध्ये काम करणे आदर्श आहे आणि सामान्य कामकाजाच्या वेळेच्या बाहेर त्याचा वापर प्रतिबंधित केला पाहिजे.

तुमच्या वर्कफ्लोला सपोर्ट करण्यासाठी क्रायोव्हियल

Suzhou Ace बायोमेडिकल कंपनी विविध प्रकारच्या पेशींसाठी तुमच्या क्रायोप्रिझर्वेशनच्या गरजा पूर्ण करणाऱ्या उत्पादनांची विस्तृत निवड देते. पोर्टफोलिओमध्ये ट्यूब्सची श्रेणी तसेच निर्जंतुकीकरण क्रायोव्हियलची श्रेणी समाविष्ट आहे.

आमचे क्रायोव्हियल आहेत:

• लॅब स्क्रू कॅप 0.5mL 1.5mL 2.0mL Cryovial Cryogenic Vials शंकूच्या आकाराचा तळाशी क्रायोट्यूब गॅस्केटसह

  ● ०.५ मिली, १.५ मिली, २.० मिली तपशील, स्कर्टसह किंवा स्कर्टशिवाय
  ● शंकूच्या आकाराचे किंवा सेल्फ स्टँडिंग डिझाइन, निर्जंतुकीकरण किंवा निर्जंतुकीकरण नसलेले दोन्ही उपलब्ध आहेत
  ● स्क्रू कॅप ट्यूब मेडिकल ग्रेड पॉलीप्रॉपिलीनच्या बनलेल्या असतात
  ● PP Cryotube Vials वारंवार गोठवल्या जाऊ शकतात आणि वितळल्या जाऊ शकतात
  ● बाह्य कॅप डिझाइन नमुना उपचारादरम्यान दूषित होण्याची शक्यता कमी करू शकते.
  ● स्क्रू कॅप क्रायोजेनिक ट्यूब वापरण्यासाठी युनिव्हर्सल स्क्रू थ्रेड्स
  ● नळ्या सर्वात सामान्य रोटर्समध्ये बसतात
  ● क्रायोजेनिक ट्यूब ओ-रिंग ट्यूब मानक 1-इंच आणि 2-इंच, 48वेल, 81वेल，96वेल आणि 100वेल फ्रीझर बॉक्समध्ये बसतात
  ● 121°C पर्यंत ऑटोक्लेव्हेबल आणि -86°C पर्यंत फ्रीझ करण्यायोग्य

  भाग क्र	साहित्य	व्हॉल्यूम	CAPरंग	पीसीएस/बॅग	बॅग/केस
  ACT05-BL-N	PP	0.5ML	काळा, पिवळा, निळा, लाल, जांभळा, पांढरा	५००	10
  ACT15-BL-N	PP	1.5ML	काळा, पिवळा, निळा, लाल, जांभळा, पांढरा	५००	10
  ACT15-BL-NW	PP	1.5ML	काळा, पिवळा, निळा, लाल, जांभळा, पांढरा	५००	10
  ACT20-BL-N	PP	2.0ML	काळा, पिवळा, निळा, लाल, जांभळा, पांढरा	५००	10