Амжилттай олшруулах урвал явуулахын тулд бие даасан урвалын бүрэлдэхүүн хэсгүүд нь бэлдмэл бүрт зөв концентрацитай байх шаардлагатай. Үүнээс гадна бохирдол үүсэхгүй байх нь чухал юм.
Ялангуяа олон урвалыг тохируулах шаардлагатай үед урвалж бүрийг тус тусад нь сав руу шахахын оронд мастер хольц гэж нэрлэгддэг хольц бэлтгэхийг тогтоосон. Урьдчилан тохируулсан хольцыг худалдаанд авах боломжтой бөгөөд үүнд зөвхөн дээжийн тусгай бүрэлдэхүүн хэсгүүд (праймер) болон ус нэмнэ. Эсвэл мастер хольцыг өөрөө бэлтгэж болно. Хоёр хувилбарт хольцыг ПГУ-ын сав бүрт загваргүйгээр тарааж, ДНХ-ийн дээжийг төгсгөлд нь тусад нь нэмнэ.
Мастер хольцыг ашиглах нь хэд хэдэн давуу талтай: Нэгдүгээрт, нэг соруур хийх алхамын тоо багасна. Ийм байдлаар пиптинг хийх явцад хэрэглэгчийн алдаа гарах эрсдэл болон бохирдох эрсдэл аль аль нь багасч, мэдээжийн хэрэг цаг хэмнэнэ. Зарчмын хувьд соруурын нарийвчлал нь бас өндөр байдаг, учир нь их хэмжээний тунгаар хэрэглэдэг. Пипеткийн техникийн өгөгдлүүдийг шалгахдаа үүнийг ойлгоход хялбар байдаг: Тунгийн хэмжээ бага байх тусам хазайлт их байх болно. Бүх бэлдмэлийг нэг савнаас гаргаж авах нь нэгэн төрлийн байдалд эерэг нөлөө үзүүлдэг (сайн холилдсон бол). Энэ нь туршилтын давтагдах чадварыг сайжруулдаг.
Мастер хольцыг бэлтгэхдээ хамгийн багадаа 10%-ийн нэмэлт эзэлхүүнийг нэмнэ (жишээ нь 10 бэлдмэл шаардлагатай бол 11-д үндэслэн тооцоолно), ингэснээр сүүлчийн савыг хүртэл зөв дүүргэнэ. Ийм байдлаар (бага зэрэг) соруурын алдаа, угаалгын нунтаг агуулсан уусмалыг тунгаар хэрэглэх үед дээж алдагдах үр дагаврыг нөхөж болно. Угаалгын бодисууд нь полимераз, мастер хольц зэрэг ферментийн уусмалд агуулагдаж, дотор гадаргуу дээр хөөс, үлдэгдэл үүсгэдэг.пипеткийн зөвлөмжүүд.
Хэрэглэх зүйл болон гаргах шингэний төрлөөс хамааран соруур хийх зөв техникийг (1) сонгож, тохирох төхөөрөмжийг сонгоно. Угаалгын нунтаг агуулсан уусмалын хувьд шууд нүүлгэн шилжүүлэх систем эсвэл агаарын зөөлөвчтэй пипеткийн оронд "бага барьдаг" пипеткийн үзүүрийг ашиглахыг зөвлөж байна. -ийн нөлөөACE пипеткийн үзүүрялангуяа гидрофобик гадаргуу дээр суурилдаг. Угаалгын бодис агуулсан шингэн нь дотор болон гадна талд үлдэгдэл хальс үлдээдэггүй тул уусмалын алдагдлыг багасгах боломжтой.
Бүх бүрэлдэхүүн хэсгүүдийн тунг нарийн зааж өгөхөөс гадна бэлдмэлийг бохирдуулахгүй байх нь чухал юм. Өндөр цэвэршилттэй хэрэглээний материалыг ашиглах нь хангалтгүй, учир нь агаарын дэрний пипеткээр пипеткээр шахах процесс нь пипеткэд үлддэг аэрозол үүсгэдэг. Аэрозольд агуулагдаж болох ДНХ-ийг соруулж авах дараагийн үе шатанд нэг дээжээс нөгөөд шилжүүлж, улмаар бохирдолд хүргэж болно. Дээр дурдсан шууд нүүлгэн шилжүүлэх системүүд нь энэ эрсдлийг бууруулж чадна. Агаарын дэрний пипеткийн хувьд пипеткийн конусыг ус цацах, аэрозол, биомолекулаас хамгаалахын тулд шүүлтүүрийн үзүүрийг ашиглах нь зүйтэй.
Шуудангийн цаг: 2022 оны 12-р сарын 06-ны өдөр