പിസിആർ മിശ്രിതങ്ങൾ പൈപ്പ് ചെയ്യുമ്പോൾ എന്താണ് പരിഗണിക്കേണ്ടത്?

വിജയകരമായ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ പ്രതികരണങ്ങൾക്ക്, ഓരോ തയ്യാറെടുപ്പിലും വ്യക്തിഗത പ്രതികരണ ഘടകങ്ങൾ ശരിയായ സാന്ദ്രതയിൽ ഉണ്ടായിരിക്കേണ്ടത് ആവശ്യമാണ്. കൂടാതെ, മലിനീകരണം ഉണ്ടാകാതിരിക്കേണ്ടത് പ്രധാനമാണ്.

വിശേഷിച്ചും നിരവധി പ്രതികരണങ്ങൾ സജ്ജീകരിക്കേണ്ടിവരുമ്പോൾ, ഓരോ പാത്രത്തിലും ഓരോ റിയാക്ടറും വെവ്വേറെ പൈപ്പ് ചെയ്യുന്നതിനുപകരം മാസ്റ്റർ മിക്സ് എന്ന് വിളിക്കപ്പെടുന്ന ഒരു മിശ്രിതം തയ്യാറാക്കാൻ ഇത് സ്ഥാപിച്ചിട്ടുണ്ട്. മുൻകൂട്ടി ക്രമീകരിച്ച മിശ്രിതങ്ങൾ വാണിജ്യപരമായി ലഭ്യമാണ്, അതിൽ സാമ്പിൾ-നിർദ്ദിഷ്ട ഘടകങ്ങളും (പ്രൈമർ) വെള്ളവും മാത്രമേ ചേർക്കൂ. അല്ലെങ്കിൽ, മാസ്റ്റർ മിക്സ് സ്വയം തയ്യാറാക്കാം. രണ്ട് വേരിയൻ്റുകളിലും, മിശ്രിതം ഒരു ടെംപ്ലേറ്റ് ഇല്ലാതെ ഓരോ PCR പാത്രത്തിലേക്കും വിതരണം ചെയ്യുകയും അവസാനം വ്യക്തിഗത ഡിഎൻഎ സാമ്പിൾ വെവ്വേറെ ചേർക്കുകയും ചെയ്യുന്നു.

ഒരു മാസ്റ്റർ മിക്സ് ഉപയോഗിക്കുന്നതിന് നിരവധി ഗുണങ്ങളുണ്ട്: ആദ്യം, ഒറ്റ പൈപ്പിംഗ് ഘട്ടങ്ങളുടെ എണ്ണം കുറയുന്നു. ഈ രീതിയിൽ, പൈപ്പറ്റിംഗ് സമയത്ത് ഉപയോക്തൃ പിശകുകളുടെ അപകടസാധ്യതയും മലിനീകരണ സാധ്യതയും കുറയ്ക്കുകയും തീർച്ചയായും സമയം ലാഭിക്കുകയും ചെയ്യുന്നു. തത്വത്തിൽ, വലിയ അളവുകൾ ഡോസ് ചെയ്യപ്പെടുന്നതിനാൽ പൈപ്പറ്റിംഗ് കൃത്യതയും കൂടുതലാണ്. പൈപ്പറ്റുകളുടെ സാങ്കേതിക ഡാറ്റ പരിശോധിക്കുമ്പോൾ ഇത് മനസ്സിലാക്കാൻ എളുപ്പമാണ്: ഡോസ് ചെയ്ത വോളിയം ചെറുതാണെങ്കിൽ, ഉയർന്ന വ്യതിയാനങ്ങൾ ഉണ്ടാകാം. എല്ലാ തയ്യാറെടുപ്പുകളും ഒരേ പാത്രത്തിൽ നിന്നാണ് വരുന്നതെന്നത് ഏകതാനതയിൽ (നന്നായി മിക്സഡ് ആണെങ്കിൽ) നല്ല സ്വാധീനം ചെലുത്തുന്നു. ഇത് പരീക്ഷണങ്ങളുടെ പുനരുൽപാദനക്ഷമത മെച്ചപ്പെടുത്തുന്നു.

മാസ്റ്റർ മിക്സ് തയ്യാറാക്കുമ്പോൾ, കുറഞ്ഞത് 10% അധിക വോളിയം ചേർക്കണം (ഉദാ: 10 തയ്യാറെടുപ്പുകൾ ആവശ്യമാണെങ്കിൽ, 11 അടിസ്ഥാനമാക്കി കണക്കാക്കുക), അങ്ങനെ അവസാന പാത്രം പോലും ശരിയായി നിറയ്ക്കണം. ഈ രീതിയിൽ, (ചെറിയ) പൈപ്പറ്റിംഗ് അപാകതകൾ, ഡിറ്റർജൻ്റ് അടങ്ങിയ സൊല്യൂഷനുകൾ ഡോസ് ചെയ്യുമ്പോൾ സാമ്പിൾ നഷ്ടത്തിൻ്റെ ഫലം എന്നിവ നികത്താനാകും. പോളിമറേസുകളും മാസ്റ്റർ മിക്സുകളും പോലുള്ള എൻസൈം ലായനികളിൽ ഡിറ്റർജൻ്റുകൾ അടങ്ങിയിട്ടുണ്ട്, ഇത് സാധാരണ ആന്തരിക ഉപരിതലത്തിൽ നുരയും അവശിഷ്ടങ്ങളും ഉണ്ടാക്കുന്നു.പൈപ്പറ്റ് നുറുങ്ങുകൾ.

പ്രയോഗവും വിതരണം ചെയ്യേണ്ട ദ്രാവകത്തിൻ്റെ തരവും അനുസരിച്ച്, ശരിയായ പൈപ്പറ്റിംഗ് ടെക്നിക് (1) തിരഞ്ഞെടുക്കുകയും ഉചിതമായ ഉപകരണങ്ങൾ തിരഞ്ഞെടുക്കുകയും വേണം. ഡിറ്റർജൻ്റുകൾ അടങ്ങിയ പരിഹാരങ്ങൾക്ക്, നേരിട്ടുള്ള സ്ഥാനചലന സംവിധാനം അല്ലെങ്കിൽ എയർ-കുഷ്യൻ പൈപ്പറ്റുകൾക്ക് പകരമായി "കുറഞ്ഞ നിലനിർത്തൽ" പൈപ്പറ്റ് ടിപ്പുകൾ ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു. പ്രഭാവംACE പൈപ്പ് ടിപ്പ്പ്രത്യേകിച്ച് ഹൈഡ്രോഫോബിക് ഉപരിതലത്തെ അടിസ്ഥാനമാക്കിയുള്ളതാണ്. ഡിറ്റർജൻ്റുകൾ അടങ്ങിയ ദ്രാവകങ്ങൾ അകത്തും പുറത്തും ഒരു അവശിഷ്ട ഫിലിം അവശേഷിക്കുന്നില്ല, അങ്ങനെ ലായനി നഷ്ടം കുറയ്ക്കാൻ കഴിയും.

എല്ലാ ഘടകങ്ങളുടെയും കൃത്യമായ അളവ് കൂടാതെ, തയ്യാറെടുപ്പുകളിൽ മലിനീകരണം ഉണ്ടാകാതിരിക്കുന്നതും പ്രധാനമാണ്. ഉയർന്ന പരിശുദ്ധിയുള്ള ഉപഭോഗവസ്തുക്കൾ ഉപയോഗിക്കുന്നത് പര്യാപ്തമല്ല, കാരണം ഒരു എയർ കുഷ്യൻ പൈപ്പറ്റിലെ പൈപ്പറ്റിംഗ് പ്രക്രിയ പൈപ്പറ്റിൽ അവശേഷിക്കുന്ന എയറോസോളുകൾ ഉത്പാദിപ്പിക്കും. എയറോസോളിൽ അടങ്ങിയിരിക്കുന്ന ഡിഎൻഎ താഴെ പറയുന്ന പൈപ്പിംഗ് ഘട്ടത്തിൽ ഒരു സാമ്പിളിൽ നിന്ന് അടുത്തതിലേക്ക് മാറ്റുകയും അങ്ങനെ മലിനീകരണത്തിലേക്ക് നയിക്കുകയും ചെയ്യാം. മുകളിൽ സൂചിപ്പിച്ച നേരിട്ടുള്ള സ്ഥാനചലന സംവിധാനങ്ങളും ഈ അപകടസാധ്യത കുറയ്ക്കും. എയർ-കുഷ്യൻ പൈപ്പറ്റുകൾക്ക്, സ്പ്ലാഷുകൾ, എയറോസോൾസ്, ബയോമോളിക്യൂളുകൾ എന്നിവ നിലനിർത്തിക്കൊണ്ട് പൈപ്പറ്റ് കോൺ സംരക്ഷിക്കാൻ ഫിൽട്ടർ ടിപ്പുകൾ ഉപയോഗിക്കുന്നത് യുക്തിസഹമാണ്.