ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് എക്സ്ട്രാക്ഷൻ, മാഗ്നറ്റിക് കൊന്ത രീതി

പരിചയപ്പെടുത്തല്

എന്താണ് ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് വേർതിരിച്ചെടുക്കുന്നത്?

വളരെ ലളിതമായ നിബന്ധനകളിൽ, ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് വേർതിരിച്ചെടുക്കൽ ഒരു സാമ്പിളിൽ നിന്ന് ആർഎൻഎയും കൂടാതെ / അല്ലെങ്കിൽ ഡിഎൻഎയും നീക്കംചെയ്യൽ, ആവശ്യമില്ലാത്ത എല്ലാ അധികവും. വേർതിരിച്ചെടുക്കുന്ന പ്രക്രിയ ഒരു സാമ്പിളിൽ നിന്ന് ന്യൂക്ലിക് ആസിഡുകളെ ഒറ്റപ്പെടുത്തുകയും സാന്ദ്രീകൃത മൂല്യനിർണയം നൽകുകയും ഡൗൺസ്ട്രീമന്മാരെയും മലിനീകരണ പ്രയോഗങ്ങളെയും സ്വതന്ത്രമാക്കുകയും ചെയ്യുന്നു.

ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് വേർതിരിച്ചെടുക്കുന്ന അപ്ലിക്കേഷനുകൾ

ഒന്നിലധികം വ്യത്യസ്ത വ്യവസായങ്ങളിലൂടെ കടന്നുപോകുന്നത് ശുദ്ധീകരിച്ച ന്യൂക്ലിക് ആസിഡുകൾ ഉപയോഗിക്കുന്നു. ആരോഗ്യ സംരക്ഷണം ഒരുപക്ഷേ, അത് ഏറ്റവും കൂടുതൽ ഉപയോഗിക്കുന്ന പ്രദേശമാണ്, അത് ശുദ്ധീകരിച്ച ആർഎൻഎ, ഡിഎൻഎ എന്നിവയ്ക്ക് വ്യത്യസ്ത പരിശോധന ആവശ്യങ്ങൾക്കായി ആവശ്യമാണ്.

ആരോഗ്യ സംരക്ഷണത്തിലെ ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് വേർതിരിച്ചെടുക്കുന്ന അപ്ലിക്കേഷനുകൾ ഇവയിൽ ഉൾപ്പെടുന്നു:

- പിസിആർ, ക്യുപിആർ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ

- അടുത്ത തലമുറ സീക്വൻസിംഗ് (എൻജിഎസ്)

- ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ അധിഷ്ഠിത എസ്എൻപി ജെനോതപ്പിംഗ്

- അറേ ആസ്ഥാനം ആസ്ഥാനമായുള്ള ജെനോതപ്പിംഗ്

- നിയന്ത്രണം എൻസൈം ദഹനം

- പരിഷ്കരിച്ച എൻസൈമുകൾ (ഉദാ. ലിഗേഷനും ക്ലോണിംഗും) വിശകലനം നടത്തുന്നു

ഹെൽത്ത് കെയറിനപ്പുറമുള്ള മറ്റ് ഫീൽഡുകളും ഉണ്ട്, പക്ഷേ പിതൃത്വ പരിശോധന, ഫോറൻസിക്സ്, ജീനോമിക്സ് എന്നിവ ഉൾപ്പെടെ മാത്രം പരിമിതപ്പെടുത്തിയിട്ടില്ല.

ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് വേർതിരിച്ചെടുക്കുന്ന ഒരു ഹ്രസ്വ ചരിത്രം

ഡിഎൻഎ വേർതിരിച്ചെടുക്കൽ1869 ൽ ഫ്രീഡ്രിക്ക് മൈഷോ എന്ന സ്വിസ് ഫിസിഷ്യൻ അവതരിപ്പിച്ച ആദ്യമായി തീയതികൾ. ലിംഫോസൈറ്റുകളിൽ പരാജയപ്പെട്ട ശേഷം, വിച്ഛേദിച്ച തലക്കെട്ടിൽ പസിൽ കാണപ്പെടുന്ന ല്യൂകോസൈറ്റുകളിൽ നിന്ന് ഡിഎൻഎയിൽ നിന്ന് ഡിഎൻഎയ്ക്ക് ലഭിക്കാൻ അദ്ദേഹത്തിന് കഴിഞ്ഞു. സെല്ലിന്റെ സൈറ്റോപ്ലാസം ഉപേക്ഷിച്ച് ആസിഡ് ആസിഡ് ചേർത്ത് അലിക്കലി സെല്ലിലേക്ക് ചേർത്ത്, തുടർന്ന് മറ്റ് പ്രോട്ടീനുകളിൽ നിന്ന് ഡിഎൻഎയെ വേർതിരിക്കുന്നതിന് പ്രോട്ടോക്കോൾ വികസിപ്പിച്ചുകൊണ്ട് അദ്ദേഹം ഇത് ചെയ്തു.

മൈസിന്റെ ഭൂഗർഭവിക്കുന്ന ഗവേഷണ ഗവേഷണത്തെത്തുടർന്ന് മറ്റ് പല ശാസ്ത്രജ്ഞരും ബിഎൻഎയെ ഒറ്റപ്പെടുത്താനും ശുദ്ധീകരിക്കാനും വിദഗ്ധർ വികസിപ്പിക്കുകയും ചെയ്തു. എഡ്വിൻ ജോസഫ് കോഹൻ, പ്രോട്ടീൻ ശാസ്ത്രജ്ഞൻ വ്ഡബ്ല്യു 2 സമയത്ത് പ്രോട്ടീൻ ശുദ്ധീകരണത്തിനായി നിരവധി വിദ്യകൾ വികസിപ്പിച്ചു. രക്തക്കുഴലുകളിൽ ഓസ്മോട്ടിക് മർദ്ദം നിലനിർത്തുന്നതിൽ പ്രധാനമായ രക്ത പ്ലാസ്മയുടെ സെറം ആൽബുമിൻ ഭിന്നസംഖ്യയെ ഒറ്റപ്പെടുത്തുന്നതിന് അദ്ദേഹം ഉത്തരവാദിയായിരുന്നു. സൈനികരെ ജീവനോടെ നിലനിർത്തുന്നതിന്റെ നിർണായകമായിരുന്നു ഇത്.

1953 ൽ ഫ്രാൻസിസ് ക്രി.യു.സി. 1958 ലെ പരീക്ഷയിൽ എഫ്എൻഎയുടെ സെമി കൺസർവേറ്റീവ് റെപ്ലിക്കേഷൻ പ്രകടിപ്പിച്ചതിനാൽ ഡിഎൻഎയിൽ നിന്ന് സാന്ദ്രതയുള്ള ഗ്രേഡിയന്റ് സെന്റിഫ്യൂജേഷൻ പ്രോട്ടോക്കോൾ വികസിപ്പിക്കാൻ കഴിഞ്ഞു.

ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് വേർതിരിച്ചെടുക്കുന്ന രീതികൾ

ഡിഎൻഎ വേർതിരിച്ചെടുക്കുന്ന 4 ഘട്ടങ്ങൾ എന്തൊക്കെയാണ്?
എല്ലാ എക്സ്ട്രാക്ഷൻ രീതികളും ഒരേ അടിസ്ഥാന ഘട്ടങ്ങളിലേക്ക് തിളപ്പിക്കുന്നു.

സെൽ തടസ്സം. ഈ ഘട്ടം സെൽ ലിസിസ് എന്നും അറിയപ്പെടുന്നു, കൂടാതെ അല്ലെങ്കിൽ താൽപ്പര്യമുള്ള ആസിഡൻസ് അടങ്ങിയ ഇൻട്രാ സെൽ മെംബ്രാൻ തകർത്തു.

അനാവശ്യമായ അവശിഷ്ടങ്ങൾ നീക്കംചെയ്യൽ. മെംബ്രൺ ലിപിഡുകൾ, പ്രോട്ടീൻ, അനാവശ്യ ന്യൂക്ലിക് ആസിഡുകൾ എന്നിവ ഇതിൽ ഉൾപ്പെടുന്നു, അത് ഡ st ൺസ്ട്രീം അപ്ലിക്കേഷനുകളെ തടസ്സപ്പെടുത്താൻ കഴിയും.

ഐസൊലേഷൻ. നിങ്ങൾ സൃഷ്ടിച്ച മായ്ച്ച ലൈസനിൽ നിന്ന് പലിശയുടെ ആസിഡുകളെ ഒറ്റപ്പെടുത്താൻ നിരവധി വ്യത്യസ്ത മാർഗങ്ങളുണ്ട്, ഇത് രണ്ട് പ്രധാന വിഭാഗങ്ങൾക്കിടയിൽ വീഴുന്നു: പരിഹാരത്തിന്റെ അടിസ്ഥാന അല്ലെങ്കിൽ ഖര അവസ്ഥ (അടുത്ത വിഭാഗം കാണുക).

ഏകാഗ്രത. ന്യൂക്ലിക് ആസിഡുകൾ മറ്റെല്ലാ മലിനീകരണങ്ങളിലും ഭൂതങ്ങളിലും ഒറ്റപ്പെട്ടതിനുശേഷം, അവർ വളരെയധികം സാന്ദ്രീകൃത മൂല്യത്തഹായത്തിലാണ് അവതരിപ്പിക്കുന്നത്.

രണ്ട് തരം വേർതിരിച്ചെടുക്കൽ
രണ്ട് തരം ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് വേർതിരിച്ചെടുക്കുന്നു - പരിഹാരത്തിന്റെ അധിഷ്ഠിത രീതികളും സോളിഡ് സ്റ്റേറ്റ് രീതികളും. സെൽ തകർന്ന് ന്യൂക്ലിയോ മെറ്റീരിയൽ ആക്സസ് ചെയ്യുന്നതിനും ഇത് ഉൾപ്പെടുന്നു. ഇതാണ് ഫെനോൾ, ക്ലോറോഫോം പോലുള്ള ജൈവ സംയുക്തങ്ങൾ അല്ലെങ്കിൽ ദോഷകരമായി ബാധിക്കുന്ന, അതിനാൽ പ്രോട്ടൈനാസ് കെ അല്ലെങ്കിൽ സിലിക്ക ജെൽ പോലുള്ള സംയോജിത സംയുക്തങ്ങൾ ഇത് ഉപയോഗിക്കാം.

ഒരു സെൽ തകർക്കുന്നതിനുള്ള വിവിധ കെമിക്കൽ എക്സ്ട്രാക്ഷൻ രീതികളുടെ ഉദാഹരണങ്ങൾ ഇവ ഉൾപ്പെടുന്നു:

- മെംബ്രൺ ഓസ്മോട്ടിക് വിണ്ടുകീറുന്നു

- സെൽ മതിലിന്റെ എൻസൈമാറ്റിക് ദഹനം

- മെംബ്രണിന്റെ ഉപരിതമായത്

- ഡിറ്റർജന്റുകളോടെ

- ക്ഷാര ചികിത്സയ്ക്കൊപ്പം

സോളിഡ് സ്റ്റാൻസിക്സ്, മെക്കാനിക്കൽ രീതികൾ എന്നും അറിയപ്പെടുന്ന സോളിഡ് സ്റ്റേറ്റ് ടെക്നിക്കുകൾ, സോളിഡ് കെ.ഇ. ഡിഎൻഎ ബന്ധിപ്പിക്കുന്ന ഒരു കൊന്തയോ തന്മാത്ര തിരഞ്ഞെടുക്കുന്നതിലൂടെ, അനലിറ്റ് സമ്മതിക്കില്ല, രണ്ടും വേർപെടുത്താൻ കഴിയും. സിലിക്കയും മാഗ്നറ്റിക് മൃഗങ്ങളും ഉപയോഗിക്കുന്നതുൾൾ ഉൾപ്പെടെയുള്ള സോളിഡ്-ഫാസ്റ്റ് എക്സ്ട്രാക്ഷൻ ടെക്നിക്കുകൾക്കുള്ള ഉദാഹരണങ്ങൾ.

മാഗ്നറ്റിക് കൊന്ത വേർതിരിച്ചെടുക്കൽ വിശദീകരിച്ചു

കാന്തിക കൊന്ത എക്സ്ട്രാക്ഷൻ രീതി
വൈറ്റ്ഹെഡ് ഇൻസ്റ്റിറ്റ്യൂട്ട് റിസർച്ച് ഇൻസ്റ്റിറ്റ് ഇൻസ്റ്റിറ്റ്യൂഷനായി ഒരു യുഎസ് പേറ്റമസിൽ മാഗ്നറ്റിക് മൃഗങ്ങളെ ഉപയോഗിച്ച് എക്സ്ട്രാക്ഷൻ ചെയ്യുന്നതിനുള്ള സാധ്യത ആദ്യമായി അംഗീകരിച്ചു. കാന്തിക കൊന്ത ആകാം. സാമ്പിൾ പിടിച്ചിരിക്കുന്ന പാത്രത്തിന് പുറത്ത് കാന്തികശക്തി പ്രയോഗിച്ച് ജനിതക വസ്തുക്കൾ ബന്ധിപ്പിക്കുന്നതിനായി നിങ്ങൾ വളരെയധികം പ്രവർത്തിക്കുന്ന കാന്തിക കൊന്ത ഉപയോഗിക്കുന്നു എന്നതാണ് തത്വം.

മാഗ്നറ്റിക് കൊന്ത വേർതിരിച്ചെടുക്കുന്നത് എന്തുകൊണ്ട്?
മാഗ്നറ്റിക് കൊന്ത വേർതിരിച്ചെടുക്കൽ സാങ്കേതികവിദ്യ കൂടുതൽ നിലനിൽക്കുന്നു, ഇത് വേഗത്തിലും കാര്യക്ഷമമായതുമായ എക്സ്ട്രാക്ഷൻ നടപടിക്രമങ്ങൾക്ക് കാരണമാകുന്നു. അടുത്ത കാലത്തായി ഉയർന്ന രൂപകൽപ്പന ചെയ്ത കാന്തിക മൃഗങ്ങളുടെ സംഭവവികാസങ്ങൾ ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് വേർതിരിച്ചെടുക്കുന്നതും ഒരു വർക്ക്ഫ്ലോയുടെയും ഓട്ടോമേഷൻ, അത് വളരെ വിഭവ വെളിച്ചം, കാര്യമേയുള്ള ഒരു വർക്ക്ഫ്ലോ എന്നിവ ഉണ്ടാക്കിയിട്ടുണ്ട്. കൂടാതെ, മാഗ്നറ്റിക് കൊന്ത വേർതിരിച്ചെടുക്കുന്ന രീതികൾക്ക് ഡിഎൻഎയുടെ കൂടുതൽ കഷണങ്ങൾ തകർക്കുന്ന കത്രിക ശക്തികൾക്ക് കാരണമാകുന്ന ശസ്ത്രയായ പടികൾ ഉൾപ്പെടുന്നില്ല. ഇതിനർത്ഥം ഡിഎൻഎയുടെ നീളമുള്ള സരണികൾ കേടുകൂടാതെയിരിക്കും, അത് ജീനോമിക്സ് പരിശോധനയിൽ പ്രധാനമാണ്.