За успешни реакции на засилување, неопходно е поединечните компоненти на реакцијата да бидат присутни во правилна концентрација во секој препарат. Покрај тоа, важно е да не се појави контаминација.
Особено кога треба да се постават многу реакции, воспоставено е да се подготви таканаречена мастер микс наместо да се пипетира секој реагенс посебно во секој сад. Комерцијално се достапни однапред конфигурирани мешавини, во кои се додаваат само компоненти специфични за примерокот (прајмер) и вода. Алтернативно, главниот микс може да се подготви сами. Во двете варијанти, смесата се дистрибуира до секој сад за PCR без шаблон и поединечниот примерок на ДНК се додава посебно на крајот.
Користењето на мастер микс има неколку предности: Прво, бројот на единечни чекори за пипетирање се намалува. На овој начин, и ризикот од грешки на корисникот за време на пипетирањето и ризикот од контаминација се минимизираат и, се разбира, се заштедува време. Во принцип, точноста на пипетирањето е исто така поголема, бидејќи се дозираат поголеми волумени. Ова е лесно да се разбере кога се проверуваат техничките податоци на пипетите: колку е помал дозираниот волумен, толку поголеми може да бидат отстапувањата. Фактот што сите препарати доаѓаат од ист сад има позитивно влијание на хомогеноста (ако добро се измешаат). Ова исто така ја подобрува репродуктивноста на експериментите.
Кога се подготвува мастер микс, треба да се додаде најмалку 10 % дополнителен волумен (на пр. ако се потребни 10 препарати, пресметајте врз основа на 11), така што и последниот сад да се наполни правилно. На овој начин, може да се компензираат (малите) неточности на пипетингот и ефектот на губење на примерокот при дозирање на раствори што содржат детергент. Детергентите се содржани во ензимски раствори како полимерази и мастер мешавини, предизвикувајќи формирање на пена и остатоци на внатрешната површина на нормалнатаврвови за пипети.
Во зависност од апликацијата и видот на течноста што треба да се дистрибуира, треба да се избере правилната техника на пипетирање (1) и да се избере соодветната опрема. За раствори кои содржат детергенти, се препорачува систем за директно поместување или таканаречените врвови на пипети со „ниско задржување“ како алтернатива за пипети со воздушни перничиња. Ефектот наВрв од ACE PIPETTEсе заснова на особено хидрофобна површина. Течностите што содржат детергенти не оставаат филм од внатре и надвор, така што загубата на растворот може да се минимизира.
Покрај точното дозирање на сите компоненти, важно е и да не дојде до контаминација на препаратите. Не е доволно да се користат потрошни материјали со висока чистота, бидејќи процесот на пипетирање во пипета со воздушна перница може да произведе аеросоли кои остануваат во пипетата. ДНК што може да биде содржана во аеросолот може да се пренесе од еден примерок на друг во следниот чекор со пипетирање и на тој начин да доведе до контаминација. Системите за директно поместување споменати погоре, исто така, може да го минимизираат овој ризик. За пипетите со воздушна перница има смисла да се користат врвови за филтер за да се заштити конусот на пипетата со задржување на прскање, аеросоли и биомолекули.
Време на објавување: Декември-06-2022 година