Стандардизацијата на процесите ја вклучува нивната оптимизација и последователно воспоставување и усогласување, овозможувајќи долгорочни оптимални перформанси-независно од корисникот. Стандардизацијата обезбедува висококвалитетни резултати, како и нивната репродуктивност и компарабилност.
Целта на (класичен) PCR е генерација на сигурен и репродуктивен резултат. За одредени апликации, приносот наPCR производе исто така релевантно. За овие реакции, мора да се внимава да се осигура дека примероците не се компромитирани и дека работниот тек на ПЦР останува стабилен. Поточно, ова се претвора во минимизирање на воведувањето на загадувања што може да доведат до лажни позитивни или лажни негативни резултати или дури и да се спречи реакцијата на ПЦР. Понатаму, условите на реакција треба да бидат што е можно по идентични за секој поединечен примерок во рамките на трчање и исто така да се пренесува на последователните реакции (со ист метод). Ова се однесува на составот на реакциите, како и на видот на контролата на температурата во циклер. Грешките во корисниците, се разбира, треба да се избегнат колку што е можно повеќе.
Подолу, ќе ги демонстрираме предизвиците што се среќаваат за време на подготовката и во текот на целиот PCR - и пристапи кон решенија што постојат во однос на инструментите и потрошувачките што се користат за стандардизација на работните текови на PCR.
Подготовка на реакција
Дистрибуирањето на компонентите на реакција во PCR-ведови, или плочи, соодветно, опфаќа повеќе предизвици што мора да се надминат:
Услови на реакција
Точното и прецизно дозирање на индивидуалните компоненти е неопходно кога се насочени кон најидентични можни услови за реакција. Покрај добрата техника на пипетирање, изборот на вистинската алатка е клучно. Master-Mixes PCR често содржат супстанции кои ја зголемуваат вискозноста или генерираат пена. За време на процесот на пипетирање, овие доведуваат до значително мокрење наСовети за пипета, со што се намалува точноста на пипетинг. Употребата на системи за директно дистрибуција или алтернативни совети за пипета кои се помалку склони кон мокрење може да ја подобри точноста и прецизноста на процесот на пипетирање.
Загадувања
За време на процесот на распределување, се создаваат аеросоли кои, доколку се дозволи да се достигне внатрешноста на пипетата, можат потенцијално да загадат друг примерок за време на следниот чекор на пипетинг. Ова може да се спречи со употреба на совети за филтрирање или системи за директно поместување.
Потрошни материјали како што сесовети, садовите и плочите што се користат во работниот тек на ПЦР не смеат да содржат супстанции што го компромитираат примерокот или го фалсификуваат резултатот. Овие вклучуваат ДНК, ДНАЗИ, РНАЗИ и ПЦР инхибитори, како и компоненти кои можат потенцијално да испуштаат од материјалот за време на реакцијата - супстанции познати како исцедоци.
Грешка во корисникот
Колку повеќе примероци се обработуваат, толку е поголем ризикот од грешка. Лесно може да се случи дека примерокот е пипетиран во погрешен сад или погрешен бунар. Овој ризик може значително да се намали со лесно видливо обележување на бунарите. Преку автоматизација на чекорите за дистрибуција, „човечкиот фактор“, т.е., грешките и варијациите поврзани со корисниците, се минимизираат, со што се зголемува репродуктивноста, особено во случај на мали волумени на реакција. Ова бара плочи со доволна димензионална стабилност за да се користат во работната станица. Приложените баркодови обезбедуваат дополнителна машина за чистење на машината, што го поедноставува следењето на примероците во текот на целиот процес.
Програмирање на термоциклер
Програмирање инструмент може да се покаже како одземаат многу време, како и склони кон грешки. Различни карактеристики на термички циклер PCR работат заедно за да го поедностават овој чекор чекор и што е најважно, за да се направи безбеден:
Лесното работење и доброто упатство на корисниците се основа на ефикасно програмирање. Зградувајќи се на оваа фондација, администрацијата на корисници заштитени со лозинка ќе спречи сопствените програми да бидат изменети од други корисници. Ако се користат повеќе цикли (од ист тип), корисно е ако програмата може да се пренесе директно од еден инструмент во друг преку USB или поврзаност. Компјутерскиот софтвер овозможува централна и безбедна администрација на програми, права на корисници и документи на компјутер.
PCR Run
За време на трчањето, ДНК се засилува во садот за реакција, каде што секој примерок треба да биде подложен на идентични, конзистентни услови на реакција. Следниве аспекти се релевантни за процесот:
Контрола на температурата
Одлична точност во контролата на температурата и хомогеноста на блокот на циклер се основа за дури и температурно климатизација на сите примероци. Високиот квалитет на елементите за греење и ладење (елементи на Пелтиер), како и начинот на кој тие се поврзани со блокот, се одлучувачките фактори кои ќе го утврдат ризикот од разлики во температурата познати како „ефект на работ“
Испарување
Концентрациите на индивидуалните компоненти на реакција не треба да се менуваат во текот на реакцијата како резултат на испарување. Во спротивно, можно е тоа многу малкуPCR производможе да се генерира, или воопшто нема. Затоа е клучно да се минимизира испарувањето со обезбедување на безбеден печат. Во овој случај, загреаниот капак на термоциклер и заптивката на садот работат рака под рака. Различни опции за запечатување се достапни заПЦР плочи (врска: напис за запечатување), при што најдобриот заптивка се постигнува преку запечатување на топлина. Другите затворања исто така може да бидат соодветни, сè додека контактниот притисок на капакот на циклер може да се прилагоди на избраниот заптивка.
Стандардизацијата на процесите е воспоставена со цел да се заштитат точните и репродуктивните резултати на долг рок. Ова вклучува редовно одржување на опремата за да се обезбеди дека секогаш е во добра работна состојба. Сите потрошни материјали треба да бидат со постојан висок квалитет кај сите произведени лотови, а нивната сигурна достапност мора да биде загарантирана.
Време на објавување: ноември-29-2022