Стандардизацијата на процесите вклучува нивна оптимизација и последователно воспоставување и усогласување, овозможувајќи долгорочни оптимални перформанси – независно од корисникот. Стандардизацијата обезбедува висококвалитетни резултати, како и нивна репродуктивност и споредливост.
Целта на (класичниот) PCR е генерирање на сигурен и репродуктивен резултат. За одредени апликации, приносот наPCR производе исто така релевантен. За овие реакции, мора да се внимава да се осигура дека примероците не се компромитирани и дека работниот тек на PCR останува стабилен. Поточно, ова се преведува на минимизирање на воведувањето на контаминации што може да доведат до лажно позитивни или лажно негативни резултати или дури и да ја инхибираат реакцијата на PCR. Понатаму, условите на реакцијата треба да бидат колку што е можно идентични за секој поединечен примерок во текот на едно испитување и исто така да бидат преносливи на следните реакции (од истиот метод). Ова се однесува на составот на реакциите, како и на типот на контрола на температурата во циклерот. Корисничките грешки, се разбира, треба да се избегнуваат колку што е можно повеќе.
Подолу ќе ги прикажеме предизвиците што се среќаваат за време на подготовката и во текот на траењето на PCR - и пристапите кон решенијата што постојат во однос на инструментите и потрошниот материјал што се користат за стандардизација на работните текови на PCR.
Подготовка за реакција
Диспензирањето на компонентите на реакцијата во PCR-садови, или плочи, соодветно, опфаќа повеќе предизвици што мора да се надминат:
Услови на реакција
Точното и прецизно дозирање на поединечните компоненти е незаменливо кога се стремиме кон најидентични можни услови на реакција. Покрај добрата техника на пипетирање, од клучно значење е изборот на вистинската алатка. Мастер-мешавините за PCR често содржат супстанции кои ја зголемуваат вискозноста или создаваат пена. За време на процесот на пипетирање, тие доведуваат до значително навлажнување наврвови за пипети, со што се намалува точноста на пипетирањето. Употребата на системи за директно издавање или алтернативни врвови за пипети кои се помалку склони кон мокрење може да ја подобри точноста и прецизноста на процесот на пипетирање.
Контаминации
За време на процесот на издавање, се генерираат аеросоли кои, доколку им се дозволи да стигнат до внатрешноста на пипетата, може потенцијално да контаминираат друг примерок за време на следниот чекор на пипетирање. Ова може да се спречи со користење на врвови за филтри или системи за директно поместување.
Потрошен материјал како што сесовети, садовите и плочите што се користат во работниот тек на PCR не смеат да содржат супстанции што го компромитираат примерокот или го фалсификуваат резултатот. Тие вклучуваат ДНК, DNase, RNase и PCR инхибитори, како и компоненти кои потенцијално може да се исцедат од материјалот за време на реакцијата - супстанции познати како исцедени.
Корисничка грешка
Колку повеќе примероци се обработуваат, толку е поголем ризикот од грешка. Лесно може да се случи примерокот да се пипетира во погрешен сад или во погрешен бунар. Овој ризик може значително да се намали со лесно забележливо обележување на бунарите. Преку автоматизација на чекорите на издавање, „човечкиот фактор“, т.е. грешките и варијациите поврзани со корисникот, се минимизираат, со што се зголемува репродуктивноста, особено во случај на мали волумени на реакција. Ова бара плочи со доволна димензионална стабилност да се користат во работната станица. Прикачените баркодови обезбедуваат дополнителна машинска читливост, што го поедноставува следењето на примерокот во текот на целиот процес.
Програмирање на термоциклерот
Програмирањето на инструментот може да се покаже како одзема време, но и склоно кон грешки. Различните карактеристики на PCR термички циклер работат заедно за да го поедностават овој процес на чекор и, што е најважно, да го направат безбеден:
Лесното ракување и доброто насочување на корисникот се основата на ефикасното програмирање. Надоврзувајќи се на оваа основа, корисничката администрација заштитена со лозинка ќе спречи промена на сопствените програми од други корисници. Ако се користат повеќе циклирачи (од ист тип), корисно е ако програмата може да се префрли директно од еден инструмент на друг преку USB или поврзување. Компјутерскиот софтвер овозможува централна и сигурна администрација на програми, кориснички права и документи на компјутер.
ПЦР работи
За време на извршувањето, ДНК се засилува во садот за реакција, каде што секој примерок треба да биде подложен на идентични, конзистентни услови на реакција. Следниве аспекти се релевантни за процесот:
Контрола на температурата
Одличната точност во контролата на температурата и хомогеноста на блокот на циклерот се основа за рамномерно температурно уредување на сите примероци. Високиот квалитет на елементите за греење и ладење (пелтиер елементи), како и начинот на кој тие се поврзуваат со блокот, се одлучувачки фактори кои ќе го одредат ризикот од температурни несовпаѓања познати како „ефект на рабовите“.
Испарување
Концентрациите на поединечните компоненти на реакцијата не треба да се менуваат во текот на реакцијата поради испарување. Во спротивно, можно е многу малкуPCR производможе да се генерира, или воопшто да нема. Затоа е од клучно значење да се минимизира испарувањето со обезбедување на сигурно затворање. Во овој случај, загреаниот капак на термоциклерот и заптивката на садот работат рака под рака. Различни опции за запечатување се достапни заПЦР плочи (врска: напис за запечатување), при што најдоброто заптивање се постигнува преку термичко запечатување. Може да бидат соодветни и други затворачи, се додека контактниот притисок на капакот на циклерот може да се прилагоди на избраната заптивка.
Стандардизацијата на процесите е воспоставена со цел да се заштитат точни и репродуктивни резултати на долг рок. Ова вклучува редовно одржување на опремата за да се осигура дека таа е секогаш во добра работна состојба. Сите потрошни материјали треба да бидат со постојано висок квалитет на сите произведени делови, а нивната достапност мора да се гарантира.
Време на објавување: 29-11-2022 година