Како да пипетирате мали волумени со рачни рачни пипети

Бидејќи се повеќе се фокусира на намалување на реагенсите и трошоците, помалите количини се барани, на пр., за подготовка на PCR Mastermix или ензимски реакции. Но, пипетирањето мали волумени од 0,2 – 5 µL поставува нови предизвици за точноста и прецизноста на пипетирањето. Следниве точки се од суштинско значење:

1. Големина на пипета и врв: Секогаш избирајте ја пипетата со најмал можен номинален волумен и најмал врв за да го одржувате воздушното перниче што е можно помало. Кога пипетирате 1 µL, на пр., изберете пипета од 0,25 – 2,5 µL и соодветниот врв наместо пипета од 1 – 10 µL.
2. Калибрација и одржување: Неопходно е вашите пипети да се правилно калибрирани и одржувани. Малите прилагодувања и скршените делови на пипетата доведуваат до масовно зголемување на вредностите на систематските и случајните грешки. Калибрацијата според ISO 8655 мора да се врши еднаш годишно.
3. Пипети со позитивно поместување: проверете дали имате пипета со позитивно поместување со низок опсег на волумен во вашата лабораторија. Општо земено, користењето на овој тип на пипети води до подобар резултат на пипетирање во однос на точноста и прецизноста отколку со класичните пипети со воздушна перница.
4. Обидете се да користите поголеми волумени: Може да размислите за разредување на примерокот за да пипетирате поголеми волумени со иста количина во финалната реакција. Ова може да ги намали грешките во пипетирањето со многу мали волумени на примероци.

Покрај добра алатка, истражувачот мора да има и многу добра техника на пипетирање. Обрнете посебно внимание на следните чекори:

1. Прицврстување на врвот: Не заглавувајте ја пипетата на врвот бидејќи тоа може да го оштети финиот врв на крајот да предизвика пренасочување на зракот на течноста или да го оштети отворот. Направете лесен притисок само кога закачувате врв и користете пипета со конус на врвот со пружина.
2. Држење на пипетата: Не држете ја пипетата во рака додека ја чекате центрифугата, циклерот итн. Внатрешноста на пипетата ќе се загрее и ќе доведе до проширување на воздушното перниче што ќе резултира со отстапување од зададената јачина при пипетирање.
3. Пред-мокрење: Навлажнувањето на воздухот во врвот и пипетата го подготвува врвот за примерокот и избегнува испарување при аспирација на преносниот волумен.
4. Вертикална аспирација: Ова е многу важно при ракување со мали волумени за да се избегне капиларниот ефект што се јавува кога пипетата се држи под агол.
5. Длабочина на потопување: Потопете го врвот што е можно помалку за да спречите навлегување на течност во врвот поради капиларниот ефект. Правило на палецот: Колку се помали врвот и волуменот, толку е помала длабочината на потопување. Препорачуваме максимум 2 mm кога пипетирате мали волумени.
6. Испуштање под агол од 45°: Оптималниот проток на течноста е загарантиран кога пипетата се држи под агол од 45°.
7. Контакт со ѕидот на садот или со течната површина: Малите волумени може правилно да се распределат само кога врвот се држи до ѕидот на садот или се потопува во течност. Дури и последната капка од врвот може точно да се исфрли.
8. Издувување: Задолжително е издувување по пуштање низок волумен за да се испушти дури и последната капка течност присутна во врвот. Издувувањето треба да се изврши и на ѕидот на садот. Внимавајте да не внесувате воздушни меури во примерокот кога вршите издувување на површината на течноста.