Sava lalana
Inona no atao hoe Nucleic Acid Extraction?
Amin'ny teny tsotra indrindra, ny fitrandrahana asidra nokleika dia ny fanesorana ny ARN sy/na ny ADN amin'ny santionany sy ny tafahoatra rehetra tsy ilaina. Ny dingan'ny fitrandrahana dia manasaraka ny asidra nokleika amin'ny santionany ary manome azy ireo amin'ny endrika eluate mivondrona, tsy misy fandotoana sy loto izay mety hisy fiantraikany amin'ny fampiharana any ambany.
Fampiharana ny fitrandrahana asidra nukleika
Ny asidra nokleika voadio dia ampiasaina amin'ny fampiharana maro samihafa, manomboka amin'ny indostria samihafa. Ny fikarakarana ara-pahasalamana angamba no faritra ampiasaina indrindra, miaraka amin'ny RNA sy ADN voadio ilaina amin'ny tanjona fitsapana samihafa.
Ny fampiharana ny fitrandrahana asidra nokleika amin'ny fitsaboana dia ahitana:
- Fitohizan'ny taranaka manaraka (NGS)
- Genotyping SNP mifototra amin'ny fanamafisam-peo
- Genotyping mifototra amin'ny array
- Famerana ny fandevonan-kanina Enzyme
- Famakafakana amin'ny fampiasana Enzymes Modifying (ohatra Ligation sy Cloning)
Misy ihany koa ny sehatra hafa ankoatra ny fikarakarana ara-pahasalamana izay ampiasaina ny fitrandrahana asidra nokleika, ao anatin'izany fa tsy voafetra amin'ny fitiliana ny maha-ray aman-dreny, ny forensika ary ny génomika.
Tantara fohy momba ny fitrandrahana asidra nukleika
fitrandrahana ADNEfa ela no niantombohan'ny fitokanana voalohany fantatra, izay nataon'ny dokotera Soisa atao hoe Friedrich Miescher, tamin'ny 1869. Nanantena i Miescher fa hamaha ny foto-pitsipika fototry ny fiainana amin'ny famaritana ny zavatra simika misy ny sela. Rehefa tsy nahomby tamin'ny lymphocytes izy, dia afaka nahazo ADN manjavozavo avy amin'ny leokocytes hita ao anaty pus amin'ny fehikibo nariana. Nanao izany izy tamin'ny fampitomboana asidra sy alkali ny sela mba hialana amin'ny cytoplasm an'ny sela, ary avy eo dia namolavola protocole hanasaraka ny ADN amin'ireo proteinina hafa.
Taorian'ny fikarohana nataon'i Miescher, mpahay siansa maro hafa no nandroso sy namolavola teknika hanavahana sy hanadiovana ny ADN. Edwin Joseph Cohn, mpahay siansa momba ny proteinina dia namolavola teknika maro ho an'ny fanadiovana proteinina nandritra ny WW2. Izy no tompon'andraikitra amin'ny fitokanana ny ampahany amin'ny albumin serum amin'ny plasma, izay zava-dehibe amin'ny fitazonana ny tsindry osmotika ao amin'ny lalan-dra. Tena zava-dehibe izany mba hitazonana ny miaramila ho velona.
Tamin’ny 1953 i Francis Crick, niaraka tamin’i Rosalind Franklin sy James Watson, no namaritra ny firafitry ny ADN, izay mampiseho fa voaforon’ny tady roa misy rojo vy misy nukleotida asidra nokleika izy io. Ity fikarohana fandrosoana ity dia nanokatra ny lalana ho an'i Meselson sy Stahl, izay afaka namolavola protocole centrifugation gradient gradient mba hanavahana ny ADN amin'ny bakteria E. Coli rehefa naneho ny famerenan'ny ADN semi-conservative nandritra ny andrana nataony tamin'ny 1958.
Teknika fitrandrahana asidra nukleika
Inona avy ireo dingana 4 amin'ny fitrandrahana ADN?
Ny fomba fitrandrahana rehetra dia midina amin'ny dingana fototra mitovy.
Fikorontanan'ny sela. Ity dingana ity, fantatra amin'ny anarana hoe lysis sela, dia mitaky fandravana ny rindrin'ny sela sy/na ny fonon'ny sela, mba hamoahana ireo tsiranoka ao anaty sela misy ny asidra nokleika mahaliana.
Fanalana potipoti-javatra tsy ilaina. Tafiditra ao anatin'izany ny lipidin'ny membrane, ny proteinina ary ireo asidra nokleika hafa tsy ilaina izay mety hanelingelina ny fampiharana ambany.
Fitokana-monina. Misy fomba maro samihafa hanavahana ireo asidra nokleika mahaliana amin'ny lysate voadio noforoninao, izay latsaka eo anelanelan'ny sokajy roa lehibe: miorina amin'ny vahaolana na fanjakana matanjaka (jereo ny fizarana manaraka).
fifantohana. Rehefa voatokana amin'ny loto sy ny diluent hafa rehetra ny asidra nokleika, dia atolotra ao anaty eluate mivondrona be.
Ny karazana fitrandrahana roa
Misy karazany roa ny fitrandrahana asidra nokleika - ny fomba mifototra amin'ny vahaolana sy ny fomba fanjakana matanjaka. Ny fomba mifototra amin'ny vahaolana dia fantatra ihany koa amin'ny fomba fitrandrahana simika, satria tafiditra amin'izany ny fampiasana simika handrava ny sela sy hidirana amin'ny akora nokleary. Izany dia mety amin'ny fampiasana kapoaly organika toy ny phenol sy chloroform, na ny kapoaky ny tsy organika kokoa noho izany, toy ny Proteinase K na gel silica.
Ohatra amin'ny fomba fitrandrahana simika samihafa handravana sela dia ahitana:
- Fiposahan'ny osmôtika ny membrane
- fandevonan-kanina enzymatic ny rindrin'ny sela
- Solubilisation ny membrane
- Miaraka amin'ny savony
- Miaraka amin'ny fitsaboana alkali
Ny teknikan'ny fanjakana mafy orina, fantatra amin'ny anarana hoe fomba mekanika, dia ahitana ny fitrandrahana ny fomba fifandraisan'ny ADN amin'ny substrate mafy. Amin'ny fisafidianana vakana na molekiola izay hifehezan'ny ADN fa tsy ny analyte, dia azo atao ny manasaraka azy roa. Ohatra amin'ny teknika fitrandrahana amin'ny dingan-dava, anisan'izany ny fampiasana vakana silika sy magnetika.
Ny fitrandrahana vakana magnetika nohazavaina
Ny fomba fitrandrahana vakana magnetika
Ny mety ho fitrandrahana amin'ny fampiasana vakana magnetika dia fantatra voalohany tamin'ny patanty amerikana napetrak'i Trevor Hawkins, ho an'ny andrim-pikarohana Whitehead Institute. Ity patanty ity dia niaiky fa azo atao ny maka fitaovana fototarazo amin'ny famatorana azy ireo amin'ny mpitatitra fanohanana matanjaka, izay mety ho vakana magnetika. Ny fitsipika dia ny fampiasanao vakana andriamby tena miasa izay hifehezan'ny akora fototarazo, izay azo sarahina amin'ny supernatant avy eo amin'ny alàlan'ny fametrahana hery andriamby any ivelan'ny sambo mitazona ilay santionany.
Nahoana no Mampiasa Vakana Magnetika?
Mihamitombo hatrany ny teknolojia fitrandrahana vakana andriamby, noho ny mety ho fomba fitrandrahana haingana sy mahomby. Tato ho ato dia nisy ny fivoaran'ny vakana magnetika tena miasa miaraka amin'ny rafitra buffer mety, izay nahatonga ny automatique ny fitrandrahana asidra nokleika sy ny workflow izay tena maivana sy lafo vidy. Ary koa, ny fomba fitrandrahana vakana andriamby dia tsy tafiditra amin'ny dingan'ny centrifugation izay mety hiteraka herim-pandrefesana izay manapaka ny ADN lava kokoa. Midika izany fa ny tady ADN lava kokoa dia mijanona ho tsy misy dikany, izay zava-dehibe amin'ny fitsapana génomika.
Fotoana fandefasana: Nov-25-2022