Na dia eo amin'ny teoria aza dia ampy ny molekiola iray amin'ny môdely, ADN be dia be no ampiasaina amin'ny PCR mahazatra, ohatra, hatramin'ny 1 µg amin'ny ADN mammalian genomika ary 1 pg ny ADN plasmid. Ny vola tsara indrindra dia miankina betsaka amin'ny isan'ny dika mitovy amin'ny filaharana kendrena, ary koa amin'ny fahasarotany.
Raha kely dia kely ny môdely ampiasaina, dia ilaina ny fitomboana mifanaraka amin'ny isan'ny tsingerin'ny fanamafisam-peo mba hahazoana vokatra ampy. Ny polymerase Taq izay ampiasaina amin'ny ankamaroan'ny fanandramana PCR dia tsy misy asa fanitsiana (hetsika exonuclease 3′-5′); noho izany, tsy azo ahitsy ny fahadisoana mitranga mandritra ny amplification. Arakaraky ny hamaroan'ny isan'ny tsingerina no hiharihary kokoa ny fanamafisan'ny vokatra diso. Raha, etsy ankilany, ny habetsahan'ny môdely dia avo loatra, ny mety hisian'ny primers annealing amin'ny hafa (tsy zato isan-jato maimaim-poana) filaharana, ary koa ny fananganana ny primer dimer, dia hitombo, izay hiteraka ny amplification ny vokatra avy. Amin'ny toe-javatra maro, ny ADN dia mitoka-monina amin'ny kolontsaina sela na avy amin'ny zavamiaina bitika ary avy eo dia ampiasaina ho modely PCR. Aorian'ny fanadiovana dia ilaina ny mamaritra ny fifantohana amin'ny ADN mba hahafahana mamaritra ny habetsaky ny ilaina amin'ny fametrahana PCR. Na dia mety hanome tombantombana aza ny electrophoresis gel agarose, dia tsy marina io fomba io. Ny spectrophotometry UV-Vis dia napetraka ho fenitry ny volamena amin'ny fanombanana ny asidra nokleika; Ity fomba mivantana ary noho izany mora sy haingana dia mandrefy ny fatran'ny santionany amin'ny 260 nm, ary ny fifantohana dia kajy amin'ny fanampian'ny anton-javatra fiovam-po.
Raha ambany dia ambany anefa ny ADN (< 1 µg/mL dsDNA), na voaloto amin'ny zavatra mitroka ao anatin'ny 260 nm ihany koa (ohatra ny ARN, proteinina, sira), dia hahatratra ny fetrany io fomba io. Raha misy fifantohana ambany dia ambany, tsy ho ela dia ho tsy marina loatra ny vakiteny ka tsy azo ampiasaina, ary ny loto dia hitarika amin'ny fanombanana be loatra ny tena sandany (indraindray lehibe). Amin'ity tranga ity, ny quantification mampiasa fluorescence dia mety hanolotra safidy hafa. Ity teknika ity dia mifototra amin'ny fampiasana loko fluorescent izay mifamatotra manokana amin'ny dsDNA, fa ny complexe misy asidra nokleika sy loko ihany no mientanentana amin'ny hazavana, ary avy eo dia mamoaka hazavana amin'ny halavan'ny onjam-peo avo kokoa. Eto, ny hamafin'ny famantarana fluorescent dia mifandanja amin'ny habetsahan'ny ADN, ary amin'ny famaritana ny fifantohana dia tombanana amin'ny fifandraisana amin'ny curve mahazatra. Ny tombony amin'ity fomba ity dia miankina amin'ny maha-tokana ny fatorana, izay manilika ny fitaomana ivelany ateraky ny fandotoana, ary koa amin'ny fahafaha-manamarika ny ADN tena ambany. Miankina indrindra amin'ny fifantohana sy ny fahadiovan'ny santionany ny mety amin'ny fomba iray; amin'ny toe-javatra maro dia mety tsara mihitsy aza ny mampihatra ireo fomba roa mifanandrify.
Fotoana fandefasana: Nov-30-2022