Veiksmīgām pastiprināšanas reakcijām ir nepieciešams, lai atsevišķas reakcijas sastāvdaļas katrā preparātā atrastos pareizajā koncentrācijā. Turklāt ir svarīgi, lai netiktu piesārņojums.
Īpaši tad, ja ir jāiestata daudzas reakcijas, tā ir izveidota, lai sagatavotu tā saukto galveno sajaukumu, nevis katru reaģentu katram traukam pipetēt atsevišķi katrā traukā. Iepriekš konfigurēti maisījumi ir komerciāli pieejami, kuros pievienoti tikai paraugam specifiski komponenti (grunts) un ūdens. Alternatīvi, galveno sajaukumu var sagatavot pats. Abos variantos maisījumu sadala katram PCR asinsvadam bez veidnes, un atsevišķu DNS paraugu pievieno atsevišķi.
Galvenā sajaukuma izmantošanai ir vairākas priekšrocības: pirmkārt, tiek samazināts atsevišķu pipetēšanas pakāpienu skaits. Tādā veidā tiek samazināts gan lietotāju kļūdu risks pipetēšanas laikā, gan piesārņojuma risks, un, protams, laiks tiek saglabāts. Principā arī pipetēšanas precizitāte ir augstāka, jo lielāki apjomi tiek dozēti. Tas ir viegli saprotams, pārbaudot pipešu tehniskos datus: jo mazāks ir deva tilpums, jo augstākas var būt novirzes. Fakts, ka visi sagatavošanās darbi nāk no viena un tā paša kuģa, pozitīvi ietekmē viendabīgumu (ja tas ir labi sajaukts). Tas arī uzlabo eksperimentu reproducējamību.
Sagatavojot galveno maisījumu, jāpievieno vismaz 10 % papildu tilpums (piemēram, ja nepieciešami 10 preparāti, aprēķiniet, pamatojoties uz 11), lai pat pēdējais kuģis būtu pareizi piepildīts. Tādā veidā var kompensēt (nelielas) pipetes neprecizitātes un parauga zuduma ietekmi, ja dozēšanas mazgāšanas līdzekļa saturošus šķīdumus var kompensēt. Mazgāšanas līdzekļi atrodas fermentu šķīdumos, piemēram, polimerāzēs un galvenajos maisījumos, izraisot putu veidošanos un atlikumus uz normāla iekšējās virsmasPipette padomi.
Atkarībā no izdalināmā šķidruma veida un jāizvēlas pareizā pipetēšanas tehnika (1) un izvēlēts atbilstošs aprīkojums. Ieteicama šķīdumiem, kas satur mazgāšanas līdzekļus, tiešas pārvietošanas sistēmu vai tā sauktos “zemas aiztures” pipetes padomus kā alternatīvu gaisa spilvenu pipetēm. Ietekme uzAce pipette padomsir balstīts uz īpaši hidrofobu virsmu. Šķidrumi, kas satur mazgāšanas līdzekļus, neatstāj atlikuma plēvi no iekšpuses un ārpuses, lai šķīduma zudumu varētu samazināt līdz minimumam.
Papildus precīzai visu komponentu dozēšanai ir arī svarīgi, lai preparātu piesārņojums nebūtu. Nepietiek ar augstu tīrības palīgmateriālu izmantošanu, jo pipetēšanas process gaisa spilvena pipetē var radīt aerosolus, kas paliek pipetē. DNS, kas var atrasties aerosolā, var pārnest no viena parauga uz nākamo nākamajā pipetēšanas posmā un tādējādi izraisīt piesārņojumu. Iepriekš minētās tiešās pārvietošanas sistēmas var samazināt arī šo risku. Gaisa spilvenu pipetēm ir jēga izmantot filtru padomus, lai aizsargātu pipetes konusu, saglabājot šļakatas, aerosolus un biomolekulas.
Pasta laiks: Dec-06-2022