Lai amplifikācijas reakcijas būtu veiksmīgas, katrā preparātā ir nepieciešams, lai atsevišķie reakcijas komponenti būtu pareizā koncentrācijā. Turklāt ir svarīgi, lai nenotiktu piesārņojums.
Īpaši tad, ja ir jāiestata daudzas reakcijas, ir izveidots tā sauktais galvenais maisījums, nevis katra reaģenta pipeti katrā traukā atsevišķi. Tirdzniecībā ir pieejami iepriekš konfigurēti maisījumi, kuros tiek pievienoti tikai paraugam specifiski komponenti (grunts) un ūdens. Alternatīvi, galveno maisījumu var pagatavot pats. Abos variantos maisījumu sadala katrā PCR traukā bez šablona un beigās pievieno atsevišķu DNS paraugu atsevišķi.
Galvenā maisījuma izmantošanai ir vairākas priekšrocības: Pirmkārt, tiek samazināts atsevišķu pipetēšanas posmu skaits. Tādā veidā tiek samazināts gan lietotāja kļūdu risks pipetēšanas laikā, gan piesārņojuma risks un, protams, tiek ietaupīts laiks. Principā arī pipetēšanas precizitāte ir augstāka, jo tiek dozēti lielāki tilpumi. Tas ir viegli saprotams, pārbaudot pipešu tehniskos datus: Jo mazāks dozētais tilpums, jo lielākas var būt novirzes. Tas, ka visi preparāti nāk no viena trauka, pozitīvi ietekmē viendabīgumu (ja tie ir labi sajaukti). Tas arī uzlabo eksperimentu reproducējamību.
Sagatavojot pamatmaisījumu, jāpievieno vismaz 10 % papildu tilpuma (piem., ja nepieciešami 10 preparāti, aprēķiniet, pamatojoties uz 11), lai pat pēdējais trauks būtu pareizi piepildīts. Tādā veidā var kompensēt (nelielas) pipetes neprecizitātes un parauga zuduma ietekmi, dozējot mazgāšanas līdzekli saturošus šķīdumus. Mazgāšanas līdzekļi ir fermentu šķīdumos, piemēram, polimerāzēs un galvenajos maisījumos, izraisot putu veidošanos un atlikumus uz normālas iekšējās virsmas.pipetes uzgaļi.
Atkarībā no lietošanas veida un dozējamā šķidruma veida ir jāizvēlas pareizā pipetēšanas tehnika (1) un jāizvēlas atbilstošais aprīkojums. Šķīdumiem, kas satur mazgāšanas līdzekļus, kā alternatīvu gaisa spilvenu pipetēm ir ieteicama tiešās pārvietošanas sistēma vai tā sauktie “zemas aiztures” pipetes uzgaļi. Ietekme noACE PIPETTE uzgalispamatā ir īpaši hidrofoba virsma. Šķidrumi, kas satur mazgāšanas līdzekļus, neatstāj plēvi no iekšpuses un ārpuses, tādējādi var samazināt šķīduma zudumus.
Papildus precīzai visu sastāvdaļu dozēšanai ir svarīgi arī, lai preparāti netiktu piesārņoti. Nepietiek ar augstas tīrības pakāpes palīgmateriālu izmantošanu, jo pipetēšanas process gaisa spilvena pipetē var radīt aerosolus, kas paliek pipetē. DNS, ko var saturēt aerosols, nākamajā pipetēšanas posmā var pārnest no viena parauga uz nākamo un tādējādi izraisīt piesārņojumu. Iepriekš minētās tiešās pārvietošanas sistēmas var arī samazināt šo risku. Gaisa spilvenu pipetēm ir lietderīgi izmantot filtru uzgaļus, lai aizsargātu pipetes konusu, aizturot šļakatus, aerosolus un biomolekulas.
Izlikšanas laiks: Dec-06-2022