Pipetējot tilpumus no 0,2 līdz 5 µL, pipetēšanas precizitāte un precizitāte ir ārkārtīgi svarīga, laba pipetēšanas tehnika ir būtiska, jo apstrādes kļūdas ir acīmredzamākas ar mazu tilpumu.
Tā kā lielāka uzmanība tiek pievērsta reaģentu un izmaksu samazināšanai, ir liels pieprasījums pēc mazākiem apjomiem, piemēram, PCR Mastermix vai fermentu reakciju sagatavošanai. Bet mazu tilpumu no 0,2 līdz 5 µL pipetēšana izvirza jaunus izaicinājumus pipetēšanas precizitātei un precizitātei. Būtiski ir šādi punkti:
- Pipetes un uzgaļa izmērs: vienmēr izvēlieties pipeti ar mazāko iespējamo nominālo tilpumu un mazāko galu, lai gaisa spilvens būtu pēc iespējas mazāks. Pipetējot, piemēram, 1 µL, izvēlieties 0,25–2,5 µL pipeti un atbilstošu galu, nevis 1–10 µL pipeti.
- Kalibrēšana un apkope: ir svarīgi, lai jūsu pipetes būtu pareizi kalibrētas un uzturētas. Nelieli pielāgojumi un salauztas pipetes daļas izraisa milzīgu sistemātisku un nejaušu kļūdu vērtību pieaugumu. Kalibrēšana saskaņā ar ISO 8655 ir jāveic reizi gadā.
- Pozitīvas pārvietošanas pipetes: pārbaudiet, vai jūsu laboratorijā ir pozitīvā pārvietošanas pipete ar zemu tilpuma diapazonu. Kopumā, izmantojot šāda veida pipetes, tiek panākts labāks pipetēšanas rezultāts precizitātes un precizitātes ziņā nekā ar klasiskajām gaisa spilvenu pipetēm.
- Mēģiniet izmantot lielākus tilpumus: varat apsvērt iespēju atšķaidīt paraugu, lai gala reakcijā ar pipeti ar pipeti iegūtu lielākus tilpumus ar tādu pašu daudzumu. Tas var samazināt pipetēšanas kļūdas ar ļoti mazu paraugu daudzumu.
Papildus labam instrumentam pētniekam ir jābūt ļoti labam pipetēšanas tehnikai. Pievērsiet īpašu uzmanību šādām darbībām:
- Uzgaļa stiprinājums: Neievietojiet pipeti uz gala, jo tas var sabojāt smalko uzgaļa galu, izraisot šķidruma stara novirzīšanu vai sabojāt atveri. Piestiprinot galu, veiciet tikai vieglu spiedienu un izmantojiet pipeti ar atsperu uzgaļa konusu.
- Pipetes turēšana: Neturiet pipeti rokā, gaidot centrifūgu, cikleru utt. Pipetes iekšpuse uzkarsīs un gaisa spilvens izplešas, kā rezultātā pipetes laikā radīsies novirzes no iestatītā tilpuma.
- Iepriekšēja mitrināšana: gaisa mitrināšana uzgaļa un pipetes iekšpusē sagatavo galu paraugam un novērš iztvaikošanu, kad tiek aspirēts pārneses tilpums.
- Vertikālā aspirācija: tas ir ļoti svarīgi, strādājot ar maziem tilpumiem, lai izvairītos no kapilārā efekta, kas rodas, turot pipeti leņķī.
- Iegremdēšanas dziļums: iegremdējiet galu pēc iespējas mazāk, lai novērstu šķidruma iekļūšanu uzgalī kapilārā efekta dēļ. Īkšķis: jo mazāks gals un tilpums, jo mazāks ir iegremdēšanas dziļums. Mēs iesakām ne vairāk kā 2 mm, ja pipetē tiek ievadīti mazi tilpumi.
- Dozēšana 45° leņķī: Ja pipete tiek turēta 45° leņķī, tiek garantēta optimāla šķidruma izplūde.
- Saskare ar asinsvada sieniņu vai šķidruma virsmu: Nelielus daudzumus var pareizi izdalīt tikai tad, ja uzgalis tiek turēts pret asinsvada sieniņu vai iegremdēts šķidrumā. Pat pēdējo pilienu no uzgaļa var izlaist precīzi.
- Izpūšana: izpūšana ir obligāta pēc neliela apjoma izsmidzināšanas, lai izvadītu pat pēdējo uzgalī esošā šķidruma pilienu. Izpūšana jāveic arī pret kuģa sienu. Veicot izpūšanu šķidruma virsmā, uzmanieties, lai paraugā neieplūstu gaisa burbuļi.
Izlikšanas laiks: 18. februāris 2021