Kad amplifikacijos reakcijos būtų sėkmingos, kiekviename preparate būtina, kad atskiri reakcijos komponentai būtų tinkamos koncentracijos. Be to, svarbu, kad nebūtų užteršimo.
Ypač tada, kai reikia nustatyti daug reakcijų, buvo nustatyta, kad reikia paruošti vadinamąjį pagrindinį mišinį, o ne kiekvieną reagentą pipete įpilti atskirai į kiekvieną indą. Prekyboje parduodami iš anksto sukonfigūruoti mišiniai, į kuriuos dedami tik konkrečių mėginių komponentai (gruntas) ir vanduo. Arba pagrindinį mišinį galite paruošti patys. Abiejuose variantuose mišinys paskirstomas į kiekvieną PGR indą be šablono, o atskiras DNR mėginys pridedamas atskirai pabaigoje.
Pagrindinio mišinio naudojimas turi keletą privalumų: Pirma, sumažėja pavienių pipetavimo etapų skaičius. Tokiu būdu sumažinama ir vartotojo klaidų pipetavimo metu, ir užteršimo rizika ir, žinoma, sutaupoma laiko. Iš esmės pipetavimo tikslumas taip pat yra didesnis, nes dozuojami didesni kiekiai. Tai nesunku suprasti tikrinant pipečių techninius duomenis: Kuo mažesnis dozuojamas tūris, tuo didesni nuokrypiai gali būti . Tai, kad visi preparatai yra iš to paties indo, teigiamai veikia homogeniškumą (jei gerai sumaišomi). Tai taip pat pagerina eksperimentų atkuriamumą.
Ruošiant pagrindinį mišinį, reikia įpilti ne mažiau kaip 10 % papildomo tūrio (pvz., jei reikia 10 preparatų, apskaičiuokite pagal 11), kad net paskutinis indas būtų tinkamai užpildytas. Tokiu būdu galima kompensuoti (nežymius) pipetės netikslumus ir mėginio praradimo poveikį dozuojant ploviklio turinčius tirpalus. Plovikliai yra fermentų tirpaluose, tokiuose kaip polimerazės ir pagrindiniai mišiniai, dėl kurių susidaro putos ir susidaro likučiai ant normalaus paviršiaus.pipetės antgaliai.
Atsižvelgiant į panaudojimą ir dozuojamo skysčio rūšį, reikia pasirinkti tinkamą pipetavimo techniką (1) ir atitinkamą įrangą. Tirpalams, kurių sudėtyje yra ploviklių, rekomenduojama naudoti tiesioginio išstūmimo sistemą arba vadinamuosius „mažo susilaikymo“ pipetės antgalius kaip alternatyvą oro pagalvėms pipetėms. PoveikisACE PIPETTE antgalisyra pagrįstas ypač hidrofobiniu paviršiumi. Skysčiai, kurių sudėtyje yra ploviklių, nepalieka likučių plėvelės viduje ir išorėje, todėl tirpalo praradimas gali būti kuo mažesnis.
Be tikslaus visų komponentų dozavimo, taip pat svarbu, kad preparatai nebūtų užteršti. Neužtenka naudoti didelio grynumo eksploatacines medžiagas, nes pipetuojant oro pagalvėje pipete gali susidaryti aerozoliai, kurie lieka pipetėje. DNR, kuri gali būti aerozolyje, gali būti perkelta iš vieno mėginio į kitą kitame pipetavimo etape ir taip gali būti užteršta. Aukščiau paminėtos tiesioginio poslinkio sistemos taip pat gali sumažinti šią riziką. Pipetėms su oro pagalvėmis tikslinga naudoti filtrų antgalius, kad apsaugotų pipetės kūgį sulaikant purslus, aerozolius ir biomolekules.
Paskelbimo laikas: 2022-06-06