Kaip pipete išpilti mažus tūrius rankinėmis rankinėmis pipetėmis

Kadangi daugiau dėmesio skiriama reagentų ir sąnaudų mažinimui, mažesni kiekiai yra labai paklausūs, pvz., PCR Mastermix paruošimui arba fermentų reakcijoms. Tačiau mažų 0,2–5 µL tūrių pipetavimas kelia naujus pipetavimo tikslumo ir tikslumo iššūkius. Šie punktai yra būtini:

1. Pipetės ir antgalio dydis: visada rinkitės mažiausio įmanomo vardinio tūrio ir mažiausio antgalio pipetę, kad oro pagalvė būtų kuo mažesnė. Jei pipete pilate 1 µL, pvz., pasirinkite 0,25–2,5 µL pipetę ir atitinkamą antgalį, o ne 1–10 µL pipetę.
2. Kalibravimas ir priežiūra: Labai svarbu, kad jūsų pipetės būtų tinkamai sukalibruotos ir prižiūrimos. Dėl nedidelių koregavimų ir sulūžusių pipetės dalių labai padidėja sistemingų ir atsitiktinių klaidų reikšmės. Kalibravimas pagal ISO 8655 turi būti atliekamas kartą per metus.
3. Teigiamo poslinkio pipetės: patikrinkite, ar laboratorijoje turite mažo tūrio pipetę. Apskritai naudojant šio tipo pipetes pasiekiamas geresnis pipetės tikslumas ir tikslumas nei naudojant klasikines pipetes su oro pagalvėmis.
4. Stenkitės naudoti didesnius tūrius: galite apsvarstyti galimybę praskiesti mėginį, kad galutiniame reakcijoje į pipete įpiltumėte didesnio tūrio su tuo pačiu kiekiu. Tai gali sumažinti pipetavimo klaidas esant labai mažam mėginio kiekiui.

Be gero įrankio, tyrėjas turi turėti labai gerą pipetavimo techniką. Ypatingą dėmesį atkreipkite į šiuos veiksmus:

1. Antgalio tvirtinimas: Neužstrigkite pipetės ant antgalio, nes galite pažeisti ploną antgalio galą ir skysčio pluoštą nukreipti arba pažeisti angą. Tvirtindami antgalį naudokite tik lengvą spaudimą ir naudokite pipetę su spyruokliniu antgalio kūgiu.
2. Pipetės laikymas: Nelaikykite pipetės rankoje, kol laukiate centrifugos, ciklerio ir pan. Pipetės vidus įkaista ir oro pagalvė išsiplės, todėl pipetės metu nukrypstama nuo nustatyto tūrio.
3. Išankstinis drėkinimas: Oro drėkinimas antgalio ir pipetės viduje paruošia antgalį mėginiui ir neleidžia išgaruoti, kai įsiurbiamas pernešamas tūris.
4. Vertikalus siurbimas: tai labai svarbu dirbant su nedideliais kiekiais, kad būtų išvengta kapiliarinio poveikio, kuris atsiranda, kai pipetė laikomas kampu.
5. Panardinimo gylis: antgalį panardinkite kuo mažiau, kad dėl kapiliarinio poveikio į galiuką nepatektų skysčio. Nykščio taisyklė: kuo mažesnis galiukas ir tūris, tuo mažesnis panardinimo gylis. Rekomenduojame ne daugiau kaip 2 mm, kai pipete imamas nedidelis kiekis.
6. Dozavimas 45° kampu: Optimalus skysčio ištekėjimas garantuojamas, kai pipetė laikoma 45° kampu.
7. Sąlytis su kraujagyslės sienele arba skysčio paviršiumi: nedideli kiekiai gali būti tinkamai dozuojami tik tada, kai antgalis laikomas prie kraujagyslės sienelės arba panardinamas į skystį. Net paskutinis lašas nuo galiuko gali būti tiksliai išpilstytas.
8. Išpūtimas: išpūtimas yra privalomas išpylus nedidelius kiekius, kad būtų galima išpilti net paskutinį antgalyje esančio skysčio lašą. Išpūtimas taip pat turėtų būti atliekamas prieš kraujagyslės sienelę. Būkite atsargūs, kad į mėginį nepatektų oro burbuliukų, kai išpučiate skysčio paviršių.