Kaip pipetės mažus tūrius su rankiniais rankiniais pipetėmis

Kadangi daugiau dėmesio skiriama reagentų ir išlaidų mažinimui, mažesni tūriai yra labai paklausūs, pvz., PGR MasterMix ar fermentų reakcijoms paruošti. Tačiau pipetuojant mažus tūrius nuo 0,2 iki 5 µL, kelia naujų iššūkių pipetės tikslumui ir tikslumui. Šie dalykai yra būtini:

1. Pipetė ir galiuko dydis: Visada rinkitės pipetę su kuo mažesniu nominaliu tūriu ir mažiausią galiuką, kad oro pagalvėlė būtų kuo mažesnė. Pipetuojant 1 µL pvz., Pasirinkite 0,25–2,5 µL pipetę ir atitinkamą galiuką, o ne 1–10 µL pipetę.
2. Kalibravimas ir priežiūra: Labai svarbu, kad jūsų pipetės būtų tinkamai kalibruojamos ir prižiūrimos. Nedideli pakeitimai ir sulaužytos pipetės dalys labai padidina sistemines ir atsitiktines klaidų vertes. Kalibravimas pagal ISO 8655 turi būti atliekamas kartą per metus.
3. Teigiami poslinkio pipetės: patikrinkite, ar turite teigiamą poslinkio pipetę, kurios laboratorijoje yra mažo tūrio diapazonas. Apskritai, naudojant tokio tipo pipetes, geresnis pipetės rezultatas yra tikslumas ir tikslumas, nei naudojant klasikines oro pagalvės pipetes.
4. Pabandykite naudoti didesnius tūrius: galutinėje reakcijoje galite apsvarstyti galimybę skiepyti mėginį į pipetę didesnius tūrius su tuo pačiu kiekiu. Tai gali sumažinti pipetės klaidas, turint labai mažą mėginių tūrią.

Be gero įrankio, tyrėjas turi turėti labai gerą pipetavimo techniką. Ypatingą dėmesį atkreipkite į šiuos veiksmus:

1. Patarimo tvirtinimas: Nepamirškite pipetės ant galiuko, nes tai gali sugadinti smulkią galiuko galą, dėl kurio skysčio pluoštas yra nukreiptas arba sugadina angą. Taikykite tik šviesos slėgį pritvirtindami antgalis ir naudokite pipetę su spyruokliniu antgalio kūgiu.
2. Laikydami pipetę: nelaikykite pipetės rankoje, laukdami centrifugos, dviratininko ir kt. Pipetės vidus įkaista ir paskatins oro pagalvę išplėsti, todėl pipetuojama.
3. Išankstinis šablonas: Oro drėkinimas galiuko viduje ir pipetėje paruošia mėginio galiuką ir išvengia išgarinimo, kai siekiama perkėlimo tūrio.
4. Vertikalus aspiracija: Tai labai svarbu tvarkant mažus tūrius, kad būtų išvengta kapiliarų efekto, kuris atsiranda, kai pipetė laikoma kampu.
5. Panardinimo gylis: kuo mažiau panardinkite galiuką, kad dėl kapiliarinio efekto būtų išvengta skysčio patekimo į galiuką. Nykščio taisyklė: kuo mažesnis galas ir tūris, tuo apatinis panardinimo gylis. Kai pipetuojant mažus tūrius, rekomenduojame ne daugiau kaip 2 mm.
6. Išskirstymas esant 45 ° kampui: optimalus skysčio srautas garantuojamas, kai pipetė laikoma 45 ° kampu.
7. Kontaktas su indo siena arba skysčio paviršiumi: Maži tūriai gali būti tinkamai išmesti tik tada, kai galiuką laikomas prie indo sienos arba panardinamas į skystį. Net paskutinį lašą nuo galiuko galima tiksliai išduoti.
8. Išpūstas: išpūtimas yra privalomas, kai ištuštinama žemas kiekis, kad būtų galima išleisti net paskutinį skysčio lašą, esantį galiuke. Išsipūsti taip pat turėtų būti atliekama prie laivo sienos. Būkite atsargūs ir neatneškite oro burbuliukų į mėginį, kai atlikite išpūstą skysčio paviršiuje.