Fir erfollegräich Amplifikatiounsreaktiounen ass et néideg datt déi eenzel Reaktiounskomponenten an der korrekter Konzentratioun an all Virbereedung präsent sinn. Ausserdeem ass et wichteg datt keng Kontaminatioun geschitt.
Besonnesch wann vill Reaktiounen opgeriicht musse ginn, gouf et etabléiert fir e sougenannte Mastermix ze preparéieren anstatt all Reagens separat an all Behälter ze pipetteren. Pre-konfiguréiert Mëschunge sinn kommerziell verfügbar, an deenen nëmmen probespezifesch Komponenten (Primer) a Waasser dobäigesat ginn. Alternativ kann d'Mastermix selwer virbereet ginn. A béide Varianten gëtt d'Mëschung op all PCR Behälter verdeelt ouni Schabloun an déi individuell DNA Probe gëtt um Enn getrennt bäigefüügt.
D'Benotzung vun engem Mastermix huet e puer Virdeeler: Éischtens gëtt d'Zuel vun eenzelne Pipette-Schrëtt reduzéiert. Op dës Manéier gëtt souwuel de Risiko vu Benotzerfehler beim Pipetting wéi och de Risiko vu Kontaminatioun miniméiert an natierlech Zäit gespuert. Am Prinzip ass d'Pipetéierungsgenauegkeet och méi héich, well méi grouss Bänn doséiert ginn. Dëst ass einfach ze verstoen wann Dir d'technesch Donnéeën vu Pipetten iwwerpréift: Wat méi kleng ass d'doséiert Volumen, wat méi héich d'Ofwäichunge kënnen sinn. D'Tatsaach, datt all Virbereedungen aus dem selwechte Behälter kommen, huet e positiven Effekt op Homogenitéit (wann gutt gemëscht). Dëst verbessert och d'Reproduktioun vun den Experimenter.
Beim Preparatioun vun der Meeschteschmëschung sollten op d'mannst 10% extra Volumen derbäigesat ginn (zB wann 10 Preparatiounen erfuerderlech sinn, berechent op Basis vun 11), sou datt och déi lescht Behälter richteg gefëllt ass. Op dës Manéier kënnen (liicht) Pipettingongauegkeeten, an den Effekt vum Probeverloscht beim Doséiere vu Spullmëttel-haltege Léisungen kompenséiert ginn. Detergentë sinn an Enzymléisungen enthale wéi Polymerasen a Mastermixen, verursaache Schaumbildung a Reschter op der banneschten Uewerfläch vum normalenPipette Tipps.
Ofhängeg vun der Uwendung an der Aart vu Flëssegkeet, déi ausgedeelt gëtt, soll déi richteg Pipettetechnik (1) gewielt ginn an déi entspriechend Ausrüstung ausgewielt ginn. Fir Léisungen, déi Botzmëttelen enthalen, sinn en direkten Verdrängungssystem oder déi sougenannte "niddere Retention" Pipette Tipps als Alternativ fir Loftkëssenpipetten recommandéiert. Den Effet vunACE PIPETTE Tippbaséiert op enger besonnesch hydrophobe Uewerfläch. Flëssegkeeten, déi Botzmëttelen enthalen, verloosse kee Reschtfilm vu bannen a baussen, sou datt de Verloscht vun der Léisung miniméiert ka ginn.
Nieft der exakter Doséierung vun alle Komponenten ass et och wichteg datt keng Kontaminatioun vun de Preparatiounen geschitt. Et ass net genuch Verbrauchsmaterial mat héijer Rengheet ze benotzen, well de Pipetteprozess an enger Loftkëssenpipette kann Aerosolen produzéieren déi an der Pipette bleiwen. D'DNA, déi an der Aerosol enthale ka sinn, kann vun enger Probe op déi nächst an de folgende Pipettéierungsschrëtt transferéiert ginn an doduerch zu Kontaminatioun féieren. Déi uewe genannte direkt Verdrängungssystemer kënnen och dëse Risiko minimiséieren. Fir Loftkëssen-Pipetten ass et Sënn fir Filtertipps ze benotzen fir de Pipettekegel ze schützen andeems se Spritzen, Aerosolen a Biomolekülen behalen.
Post Zäit: Dez-06-2022