Kryovialenginn allgemeng benotzt fir d'kryogen Lagerung vun Zelllinnen an aner kritesch biologesch Materialien, an Dewars mat flëssege Stickstoff gefëllt.

Et gi verschidde Stadien involvéiert an der erfollegräicher Erhaalung vun Zellen a flëssege Stickstoff. Wärend de Basisprinzip e luesen Afréiere ass, hänkt déi exakt Technik déi benotzt gëtt vun der Zelltyp an der benotzte Kryoprotectant of. Et gi verschidde Sécherheetsbedenken a bescht Praktiken fir ze berücksichtegen wann Dir Zellen bei sou niddregen Temperaturen späichert.

Dëse Post zielt en Iwwerbléck ze ginn wéi d'Cryovialen a flëssege Stickstoff gelagert ginn.

Wat sinn Cryovialen

Cryovials si kleng, capped Fläschen entworf fir flësseg Echantillon bei extrem niddregen Temperaturen ze späicheren. Si garantéieren datt Zellen, déi am Kryoprotectant konservéiert sinn, net an direkten Kontakt mam flëssege Stickstoff kommen, wat de Risiko vu celluläre Frakturen miniméiert, wärend nach ëmmer vum extremen Ofkillungseffekt vu flëssege Stickstoff profitéiert.

D'Fläschen sinn normalerweis an enger Rei vu Volumen an Designen verfügbar - si kënnen intern oder extern mat flaach oder gerundeten Buedem geschnidden ginn. Steril an net-steril Formater sinn och verfügbar.

Wien benotztCyrovialsfir Zellen a flëssege Stickstoff ze späicheren

Eng Rei vun NHS a privaten Laboratoiren, souwéi Fuerschungsinstituter spezialiséiert op Cord Blutt Banking, Epithelzellbiologie, Immunologie a Stammzellbiologie benotze Cryovialen fir Zellen ze cryopreserven.

Zellen déi op dës Manéier konservéiert sinn enthalen B- an T-Zellen, CHO Zellen, Hämatopoietesch Stamm- a Progenitorzellen, Hybridomas, Darmzellen, Makrophagen, Mesenchymal Stamm- a Progenitorzellen, Monocyten, Myelom, NK Zellen a Pluripotent Stammzellen.

Iwwersiicht iwwer Wéi späichere Cryovials a flëssege Stickstoff

Cryopreservation ass e Prozess deen Zellen an aner biologesch Konstrukter erhaalt andeems se op ganz niddreg Temperaturen ofkillt. Zellen kënne Jorelaang a flëssege Stickstoff gelagert ginn ouni Verloscht vun der Zellviabilitéit. Dëst ass en Iwwerbléck vun de Prozeduren déi benotzt ginn.

Zell Virbereedung

Déi genee Method fir Proben ze preparéieren wäert variéieren jee no der Zelltyp, awer am Allgemengen ginn d'Zellen gesammelt an centrifugéiert fir en zellräiche Pellet z'entwéckelen. Dëse Pellet gëtt dann am Supernatant resuspendéiert gemëscht mat Kryoprotectant oder e Kryokonservatiounsmedium.

Cryopreservation Medium

Dëst Medium gëtt benotzt fir Zellen an den niddregen Temperaturen Ëmfeld ze konservéieren, op déi se ënnerworf ginn, andeems d'Bildung vun intrazelluläre Kristalle hemmt an domat den Zell Doud. Hir Roll ass e séchert, schützend Ëmfeld fir Zellen a Stoffer wärend de Gefrier-, Lager- an Opdehnprozesser ze bidden.

E Medium wéi frësch gefruerene Plasma (FFP), hepariniséierter Plasmalytléisung oder serumfräi, Déierkomponentfräi Léisunge gëtt mat Kryoprotektanten wéi Dimethylsulfoxid (DMSO) oder Glycerol gemëscht.

Déi nei flësseg Probepellet gëtt a Polypropylen-Cryovialen aliquotéiert wéi zSuzhou Ace Biomedizinesch Firma Cryogenic Storage Vials.

Et ass wichteg d'Cryovialen net ze iwwerfëllen well dëst de Risiko vu Rëss an déi méiglech Verëffentlechung vum Inhalt erhéicht (1).

Kontrolléiert Afréiere Taux

Am Allgemengen gëtt e lues kontrolléierte Gefriessquote fir déi erfollegräich Kryokonservatioun vun Zellen benotzt.

Nodeems d'Proben a kryogene Fläschen aliquotéiert sinn, gi se op naass Äis oder an engem 4 ℃ Frigo plazéiert an d'Gefrierprozedur gëtt bannent 5 Minutten gestart. Als allgemenge Guide ginn d'Zellen mat enger Rate vun -1 bis -3 pro Minute (2) ofgekillt. Dëst gëtt erreecht mat engem programméierbare Kühler oder andeems d'Fläschen an enger isoléierter Këscht an engem -70°C bis -90°C kontrolléierte Frigo gesat ginn.

Transfer op flëssege Stickstoff

Déi gefruerene kryogene Fläschen ginn dann an e flëssege Stickstoffbehälter fir onbestëmmten Perioden transferéiert, soulaang eng Temperatur vu manner wéi -135 ℃ gehale gëtt.

Dës ultra-niddreg Temperaturen kënnen duerch Tauche an der flësseger oder Dampphase Stickstoff kritt ginn.

Flësseg oder Dampphase?

D'Lagerung a flësseger Phase Stickstoff ass bekannt fir déi kal Temperatur mat absoluter Konsistenz z'erhalen, awer ass dacks net recommandéiert aus de folgende Grënn:

• De Besoin fir grouss Volumen (Déift) vu flëssege Stickstoff wat eng potenziell Gefor ass. Verbrennunge oder Asphyxie wéinst dësem ass e reelle Risiko.
• Dokumentéiert Fäll vu Kräizkontaminatioun duerch infektiiv Agenten wéi Aspergillus, Hep B a viral Verbreedung iwwer de flëssege Stickstoffmedium (2,3)
• D'Potenzial fir flëssege Stickstoff an d'Fläschen wärend der Taucht ze lekken. Wann aus der Lagerung erausgeholl an op Raumtemperatur erwiermt gëtt, erweidert de Stickstoff séier. Dofir kann d'Flasche zerbriechen wann se aus flëssege Stickstofflagerung geläscht ginn, a schaaft eng Gefor vu béide fléienen Debris an d'Belaaschtung vum Inhalt (1, 4).

Aus dëse Grënn ass ultra-niddereg Temperaturlagerung am meeschten an der Dampphase Stickstoff. Wann Proben an der flësseger Phase musse gespäichert ginn, solle spezialiséiert Cryoflex Tube benotzt ginn.

Den Nodeel vun der Dampphase ass datt e vertikalen Temperaturgradient ka geschéien, wat zu Temperaturschwankungen tëscht -135 ℃ an -190 ℃ resultéiert. Dëst erfuerdert virsiichteg a fläisseg Iwwerwaachung vun de flëssege Stickstoffniveauen an Temperaturvariatiounen (5).

Vill Hiersteller recommandéieren datt d'Cryovialen gëeegent sinn fir ze späicheren bis -135 ℃ oder nëmmen an der Dampphase ze benotzen.

Deng Cryopreserved Zellen z'entdecken

D'Dachprozedur ass stresseg fir eng gefruer Kultur, a richteg Handhabung an Technik ass erfuerderlech fir eng optimal Viabilitéit, Erhuelung a Funktionalitéit vun den Zellen ze garantéieren. Déi exakt Ofdeckungsprotokoller hänkt vu spezifesche Zellarten of. Wéi och ëmmer, séier Verdauung gëtt als Standard ugesinn fir:

• Reduzéiert all Impakt op cellulär Erhuelung
• Hëlleft d'Beliichtungszäit fir d'Léisungen, déi an de Gefriermedien präsent sinn, ze reduzéieren
• Miniméiert all Schued duerch Äisrekristalliséierung

Waasserbäder, Perlebäder oder spezialiséiert automatiséiert Instrumenter ginn allgemeng benotzt fir Proben ze verdauen.

Meeschtens gëtt 1 Zelllinn gläichzäiteg fir 1-2 Minutten opgedaucht, andeems se sanft an engem 37 ℃ Waasserbad dréinen bis et just e klengt Äis an der Fläsch bleift ier se an engem virgewiermten Wuesstumsmedium gewascht ginn.

Fir e puer Zellen wéi Mamendéieren Embryonen, lues Erwiermung ass wesentlech fir hir Iwwerliewe.

D'Zellen sinn elo prett fir Zellkultur, Zellisolatioun oder am Fall vun hematopoietesch Stammzellen - Viabilitéitsstudien fir d'Integritéit vun den Donor Stammzellen virun der myeloablativer Therapie ze garantéieren.

Et ass normal Praxis kleng aliquots vun der prewashed Prouf ze huelen benotzt fir eng Zell zielen ze Leeschtunge Zell Konzentratioune fir Plating an Kultur ze bestëmmen. Dir kënnt dann d'Resultater vun Zellisolatiounsprozeduren beurteelen an d'Zellviabilitéit bestëmmen.

Beschte Praktiken fir d'Späichere vu Cryovials

Déi erfollegräich Kryopreservatioun vu Proben, déi a Kryovialen gespäichert sinn, hänkt vu ville Elementer am Protokoll of, inklusiv korrekt Lagerung a Rekordhaltung.

• Split Zellen tëscht Späicherplazen- Wann Volumen et erlaben, spalt Zellen tëscht Fläschen a späichere se op getrennte Plazen fir de Risiko vu Probeverloscht wéinst Ausrüstungsfehler ze reduzéieren.
• Verhënnert Kräizkontaminatioun- Wielt fir eng eenzeg Benotzung sterile kryogene Fläschen oder Autoklave virum spéider Gebrauch
• Benotzt passend grouss Fläschen fir Är Zellen- Fläschen kommen an enger Rei vu Volumen tëscht 1 an 5mls. Vermeit iwwerflësseg Fläschen fir de Risiko vu Rëss ze reduzéieren.
• Wielt intern oder extern threaded kryogen Fläschen- Intern threaded Fläschen ginn vun e puer Universitéite recommandéiert fir Sécherheetsmoossnamen - si kënnen och Kontaminatioun während der Füllung verhënneren oder wann se am flëssege Stickstoff gelagert ginn.
• Verhënneren Leckage- Benotzt bi-injizéiert Dichtungen, déi an de Schraubekapp oder O-Réng geformt sinn, fir Leck a Kontaminatioun ze vermeiden.
• Benotzt 2D Barcoden a Labelfläschen- Fir Traceabilitéit ze garantéieren, Fläschen mat grousse Schreifflächen erlaben all Fläsch adäquat ze markéieren. 2D Barcodes kënne mat Späichermanagement a Rekordhaltung hëllefen. Faarfkodéiert Kappen sinn nëtzlech fir méi einfach Identifikatioun.
• Adäquate Stockage Ënnerhalt- Fir sécherzestellen datt Zellen net verluer sinn, sollten d'Späichergefässer dauernd d'Temperatur a flëssege Stickstoffniveauen iwwerwaachen. Alarmer solle gepasst ginn fir Benotzer vu Feeler ze alarméieren.

Sécherheet Mesuren

Flësseg Stickstoff ass allgemeng Praxis an der moderner Fuerschung ginn, awer dréit de Risiko vu schlëmmer Verletzung wann se falsch benotzt ginn.

Richteg perséinlech Schutzausrüstung (PPE) soll gedroe ginn fir de Risiko vu Frostbitt, Verbrennunge an aner negativ Tëschefäll ze minimiséieren beim Ëmgang mat flëssege Stickstoff. Droen

• Cryogenic Handschuesch
• Laboratoire Mantel
• Impaktbeständeg voll Gesiichtsschild dat och den Hals deckt
• Zoumaache Schong
• Spritzbeständeg Plastikschürze

Flësseg Stickstoff Frigoen sollen a gutt gelëfter Gebidder plazéiert ginn fir de Risiko vun Asphyxie ze minimiséieren - entlooss Stickstoff verdampft a verdrängt atmosphäresch Sauerstoff. Grouss Volume Geschäfter sollen niddereg Sauerstoff Alarm Systemer hunn.

Pairen ze schaffen beim Ëmgang mat flëssege Stickstoff ass ideal a seng Notzung ausserhalb vun der normaler Aarbechtszäit sollt verbueden ginn.

Cryovials fir Ären Workflow z'ënnerstëtzen

Suzhou Ace Biomedical Firma bitt eng breet Auswiel u Produkter, déi Är Kryopreservatiounsbedürfnisser fir verschidden Zorten Zellen entspriechen. De Portfolio enthält eng Rei vu Réier wéi och eng Rei vu sterile Kryovialen.

Eis Cryovials sinn:

• Laboratoire Schrauwendeckel 0,5 ml 1,5 ml 2,0 ml Cryoviaal Kryogenfläschen Konisch Bottom Cryotube mat Dichtung

  ● 0.5ml, 1.5ml, 2.0ml Spezifizéierung, mat Rock oder ouni Rock
  ● Konesch oder selbststänneg Design, steril oder net-steril sinn allebéid verfügbar
  ● Schraubekappe-Réier sinn aus medizinesche Grad Polypropylen
  ● PP Cryotube Fläschen kënnen ëmmer erëm gefruer an opgedaucht ginn
  ●Den externen Cap Design kann d'Kontaminatiounswahrscheinlechkeet während der Probebehandlung reduzéieren.
  ● Schraubekappe kryogene Réier Universal Schraubefäegkeeten fir ze benotzen
  ● Réier passen am meeschte gemeinsame Rotoren
  ● Cryogenic Tube O-Ring Tubes passen Standard 1-Zoll an 2-Zoll, 48well, 81well, 96well an 100well Frigoboxen
  ● Autoklaverbar bis 121°C an afréieren op -86°C

  PART NR	MATERIAL	VOLUME	CAPCOLOR	PCS/BAG	BAG/FALL
  ACT05-BL-N	PP	0,5ml eng	Schwaarz, Giel, Blo, Rout, Purple, Wäiss	500	10
  ACT15-BL-N	PP	1,5 ml	Schwaarz, Giel, Blo, Rout, Purple, Wäiss	500	10
  ACT15-BL-NW	PP	1,5 ml	Schwaarz, Giel, Blo, Rout, Purple, Wäiss	500	10
  ACT20-BL-N	PP	2,0ml	Schwaarz, Giel, Blo, Rout, Purple, Wäiss	500	10