D'Standardiséierung vu Prozesser beinhalt hir Optimiséierung a spéider Etablissement an Harmoniséierung, déi laangfristeg optimal Leeschtung erlaabt - onofhängeg vum Benotzer. Standardiséierung garantéiert qualitativ héichwäerteg Resultater, souwéi hir Reproduktioun a Vergläichbarkeet.
D'Zil vum (klassesche) PCR ass d'Generatioun vun engem zouverléissege a reproduzéierbare Resultat. Fir bestëmmte Applikatiounen, d'Ausbezuele vun derPCR Produktass och relevant. Fir dës Reaktiounen muss oppassen fir sécherzestellen datt Proben net kompromittéiert sinn an datt de PCR Workflow stabil bleift. Speziell iwwersetzt dëst d'Aféierung vu Kontaminatiounen ze minimiséieren, déi zu falschen positiven oder falschen negativen Resultater féieren oder souguer d'PCR Reaktioun hemmen. Ausserdeem sollten d'Reaktiounsbedéngungen esou identesch wéi méiglech sinn fir all eenzel Probe bannent engem Laf an och op spéider Reaktiounen (vun der selwechter Method) transferéierbar. Dëst bezitt sech op d'Zesummesetzung vun de Reaktiounen wéi och op d'Art vun der Temperaturkontroll am Cycler. Benotzer Feeler, natierlech, soll sou vill wéi méiglech vermeide ginn.
Drënner wäerte mir d'Erausfuerderunge weisen, déi während der Virbereedung an am Laf vun engem PCR begéint sinn - an d'Approche fir Léisungen déi existéieren mat Respekt un Instrumenter a Verbrauchsmaterial, déi fir d'Standardiséierung vun de PCR Workflows benotzt ginn.
Reaktioun Virbereedung
D'Verdeelung vu Reaktiounskomponenten an PCR-Gefässer, respektiv Placke, enthält verschidde Erausfuerderungen, déi musse iwwerwonne ginn:
Reaktioun Konditiounen
Déi exakt a präzis Doséierung vun den eenzelne Komponenten ass onverzichtbar wann Dir op déi identesch Reaktiounsbedéngungen zielt. Zousätzlech zu enger gudder Pipettetechnik ass d'Auswiel vum richtege Tool kritesch. PCR Master-Mëschunge enthalen dacks Substanzen déi d'Viskositéit erhéijen oder Schaum generéieren. Wärend dem Pipetteprozess féieren dës zu substantiell Befeuchtung vun derPipette Tipps, sou datt d'Pipetéierungsgenauegkeet reduzéiert gëtt. D'Benotzung vun direkten Ausdehnungssystemer oder alternativen Pipette Tipps, déi manner ufälleg sinn fir ze befeuchten, kënnen d'Genauegkeet an d'Präzisioun vum Pipetteprozess verbesseren.
Kontaminatiounen
Wärend dem Verdeelungsprozess ginn Aerosole generéiert, déi, wa se erlaabt sinn an d'Innere vun der Pipette z'erreechen, potenziell eng aner Probe während dem nächste Pipette-Schrëtt kontaminéieren kënnen. Dëst kann verhënnert ginn andeems Dir Filtertipps oder direkt Verdrängungssystemer benotzt.
Verbrauchsmaterial wéi zTipps, Schëffer a Placken, déi am PCR Workflow benotzt ginn, däerfen keng Substanzen enthalen déi d'Probe kompromittéieren oder d'Resultat falséieren. Dës enthalen DNA, DNases, RNases a PCR Inhibitoren, souwéi Komponenten déi potenziell aus dem Material wärend der Reaktioun ausléisen - Substanzen bekannt als Leachables.
Benotzer Feeler
Wat méi Proben veraarbecht ginn, wat méi héich ass de Feelerrisiko. Et kann einfach geschéien datt eng Probe an dat falscht Behälter oder déi falsch Brunn pipettéiert gëtt. Dëse Risiko kann wesentlech reduzéiert ginn duerch liicht erkennbar Markéierung vun de Brunnen. Duerch d'Automatiséierung vun den Ausdehnungsschrëtt gëtt de "mënschleche Faktor", dh Feeler a Benotzerbezunnen Variatiounen, miniméiert, sou datt d'Reproduzibilitéit erhéicht gëtt, besonnesch am Fall vu klenge Reaktiounsvolumen. Dëst erfuerdert Placke vu genuch Dimensiounstabilitéit fir an enger Aarbechtsstatioun ze benotzen. Befestegt Barcodes bidden zousätzlech Maschinn Liesbarkeet, wat d'Probeverfollegung am ganze Prozess vereinfacht.
Programméiere vum Thermocycler
D'Programméiere vun engem Instrument kann Zäitopwänneg wéi och Feeler-ufälleg beweisen. Verschidde PCR thermesch Cycler Feature schaffen zesummen fir dëse Prozess Schrëtt ze vereinfachen an, am wichtegsten, et sécher ze maachen:
Einfach Operatioun a gutt Benotzerleitung sinn d'Basis vun effizienter Programméierung. Op dëser Basis opbauen, wäert Passwuert-geschützt Benotzer Administratioun verhënneren een eegene Programmer vun anere Benotzer geännert ginn. Wann e puer Cycler (vum selwechten Typ) am Gebrauch sinn, ass et gutt wann e Programm direkt vun engem Instrument an en anert iwwer USB oder Konnektivitéit transferéiert ka ginn. Computersoftware erméiglecht eng zentral a sécher Administratioun vu Programmer, Benotzerrechter an Dokumenter op engem Computer.
PCR lafen
Wärend dem Laf gëtt DNA am Reaktiounsbehälter verstäerkt, wou all Probe un identesch, konsequent Reaktiounsbedéngungen ënnerworf soll ginn. Déi folgend Aspekter si relevant fir de Prozess:
Temperatur Kontroll
Exzellent Genauegkeet an der Temperaturkontroll an der Homogenitéit vum Cycler Block sinn d'Basis fir eng gläichméisseg Temperaturkonditioun vun all Proben. Déi héich Qualitéit vun den Heiz- a Killelementer (Peltier-Elementer), wéi och d'Art a Weis wéi dës mam Block verbonne sinn, sinn déi entscheedend Faktoren, déi de Risiko vun Temperaturdifferenzen bestëmmen, bekannt als "Randeffekt"
Verdampfung
D'Konzentratioune vun den eenzelne Reaktiounskomponenten däerfen net am Laf vun der Reaktioun wéinst Verdampfung änneren. Soss ass et méiglech, datt ganz wéinegPCR Produktkann generéiert ginn, oder guer näischt. Et ass also entscheedend d'Verdampfung ze minimiséieren andeems Dir e séchert Dichtung garantéiert. An dësem Fall funktionnéieren den erhëtzten Deckel vum Thermocycler an d'Dichtung vum Schiff Hand an Hand. Verschidde Dichtungsoptioune si verfügbar firPCR Placke (Link: Dichtungsartikel), woubäi déi bescht Dichtung duerch Wärmeversiegelung erreecht gëtt. Aner Zoumaache kënnen och gëeegent sinn, soulaang de Kontaktdrock vum Cycler-Deckel op de gewielte Sigel ugepasst ka ginn.
Prozessstandardiséierung ass op der Plaz fir korrekt a reproduzéierbar Resultater op laang Dauer ze schützen. Dëst beinhalt regelméisseg Ënnerhalt vun der Ausrüstung fir sécherzestellen datt et ëmmer an engem gudden Zoustand ass. All Verbrauchsmaterial soll vu konsequent héich Qualitéit iwwer all produzéiert Lot sinn, an hir zouverlässeg Disponibilitéit muss garantéiert ginn.
Post Zäit: Nov-29-2022