Cryovialsкөбүнчө клетка линияларын жана башка маанилүү биологиялык материалдарды криогендик сактоо үчүн, суюк азот менен толтурулган деварларда колдонулат.

Суюк азотто клеткалардын ийгиликтүү сакталышынын бир нече этаптары бар. Негизги принцип жай тоңдуруу болсо да, так колдонулган техника клетканын түрүнө жана колдонулган криопротекторга жараша болот. Мындай төмөн температурада клеткаларды сактоодо эске алуу керек болгон бир нече коопсуздук маселелери жана мыкты тажрыйбалар бар.

Бул пост криовиалдардын суюк азотто кантип сакталаары жөнүндө жалпы маалымат берүүгө багытталган.

Cryovials деген эмне

Cryovials өтө төмөн температурада суюк үлгүлөрдү сактоо үчүн арналган кичинекей, капкак флакон болуп саналат. Алар криопротектордо сакталган клеткалар суюк азот менен түздөн-түз байланышта болбошун камсыздайт, ал эми суюк азоттун экстремалдуу муздатуу эффектинен пайда алып, клетканын сынуу коркунучун азайтат.

Флакондор, адатта, бир катар көлөмдө жана дизайнда болот - алар жалпак же тегеректелген түбү менен ички же тышкы жип менен сайылышы мүмкүн. Стерилдүү жана стерилдүү эмес форматтары да бар.

Ким колдонотCyrovialsКлеткаларды суюк азотто сактоо

Бир катар NHS жана жеке лабораториялар, ошондой эле шнур канынын банкинги, эпителий клеткаларынын биологиясы, иммунологиясы жана өзөк клеткасынын биологиясы боюнча адистешкен изилдөө институттары клеткаларды криоконсервациялоо үчүн криовиалдарды колдонушат.

Ушундай жол менен сакталган клеткаларга В жана Т клеткалары, CHO клеткалары, гемопоэтикалык өзөк жана прогенитор клеткалар, гибридомалар, ичеги клеткалары, макрофагдар, мезенхималдык өзөк жана прогенитор клеткалар, моноциттер, миелома, NK клеткалары жана плюрипотенттүү өзөк клеткалары кирет.

Криовиалдарды суюк азотто кантип сактоо керек

Криоконсервация – бул клеткаларды жана башка биологиялык конструкцияларды өтө төмөн температурага чейин муздатуу жолу менен сактоо процесси. Клеткалар суюк азотто клетканын жашоо жөндөмдүүлүгүн жоготпостон жылдар бою сакталышы мүмкүн. Бул колдонулган жол-жоболордун схемасы.

Клетка даярдоо

Үлгүлөрдү даярдоонун так ыкмасы клетканын түрүнө жараша ар кандай болот, бирок жалпысынан клеткалар чогултулуп, клеткага бай пеллетти иштеп чыгуу үчүн центрифугаланат. Андан кийин бул гранул криопротектор же криоконсервациялоочу чөйрө менен аралаштырылган супернатантта кайра суспензияланат.

Криоконсервациялоочу орто

Бул чөйрө клетканын ичиндеги жана клеткадан тышкаркы кристаллдардын пайда болушуна, демек, клетканын өлүмүнө бөгөт коюу менен дуушар боло турган төмөн температуралуу чөйрөдө клеткаларды сактап калуу үчүн колдонулат. Алардын ролу тоңдуруу, сактоо жана эрүү процессинде клеткалар жана ткандар үчүн коопсуз, коргоочу чөйрөнү камсыз кылуу болуп саналат.

Жаңы тоңдурулган плазма (FFP), гепаринделген плазмолит эритмеси же сывороткасыз, жаныбарлардын компоненттери жок эритмелер сыяктуу чөйрө диметил сульфоксид (DMSO) же глицерин сыяктуу криопротекторлор менен аралаштырылат.

Кайра суюлтулган үлгү гранул сыяктуу полипропилен криовиалдарга бөлүнөтSuzhou Ace биомедициналык компаниясы Cryogenic Storage Flakon.

Криовиалдарды ашыкча толтурбоо маанилүү, анткени бул жарылып кетүү коркунучун жана мазмундун чыгышын күчөтөт (1).

Башкарылган тоңуу ылдамдыгы

Жалпысынан, клеткаларды ийгиликтүү криоконсервациялоо үчүн жай көзөмөлдөнүүчү тоңдуруу ылдамдыгы колдонулат.

Үлгүлөр криогендик флакондорго бөлүнгөндөн кийин, алар нымдуу музга же 4℃ муздаткычка коюлат жана тоңдуруу процедурасы 5 мүнөттүн ичинде башталат. Жалпы жетекчилик катары, клеткалар мүнөтүнө -1ден -3кө чейинки ылдамдыкта муздашат (2). Бул программалоочу муздаткычты колдонуу менен же флакондорду –70°Cден –90°Cге чейин көзөмөлдөнүүчү тоңдургучка жайгаштырылган изоляцияланган кутуга салуу менен жетишилет.

Суюк азотко өтүү

Тоңдурулган криогендик флакон андан кийин -135℃ден төмөн температура сакталган шартта чексиз мөөнөткө суюк азот резервуарына өткөрүлүп берилет.

Бул өтө төмөн температураларды суюктук же буу фазасы азотуна чөмүлүү жолу менен алууга болот.

Суюк же буу фазасы?

Суюк фазадагы азотто сактоо суук температураны абсолюттук ырааттуулук менен сактоо үчүн белгилүү, бирок көбүнчө төмөнкү себептерден улам сунушталбайт:

• Потенциалдуу коркунуч болуп саналган суюк азоттун чоң көлөмүнө (тереңдигине) муктаждык. Ушундан улам күйүк же асфиксия чыныгы коркунуч болуп саналат.
• Aspergillus, геп В сыяктуу инфекциялык агенттер менен кайчылаш булгануу жана суюк азот чөйрөсү аркылуу вирустук таралышынын документтештирилген учурлары (2,3)
• Чөмүлүү учурунда флакондорго суюк азоттун агып кетиши мүмкүн. Сактагычтан алынып, бөлмө температурасына чейин жылытылганда азот тез кеңейет. Демек, флакон суюк азот сактагычынан чыгарылганда талкаланып, учуп бара жаткан калдыктардан да, ичиндегилерге да тийип калуу коркунучун жаратат (1, 4).

Ушул себептерден улам, өтө төмөн температурада сактоо көбүнчө буу фазасында азот болуп саналат. Үлгүлөрдү суюк фазада сактоо керек болгондо, атайын криофлекстүү түтүктөр колдонулушу керек.

Буу фазасынын терс жагы -135℃ жана -190℃ ортосундагы температуранын өзгөрүшүнө алып келген вертикалдуу температура градиентинин пайда болушу. Бул суюк азоттун деңгээлин жана температуранын өзгөрүшүнө кылдат жана кылдат мониторинг жүргүзүүнү талап кылат (5).

Көптөгөн өндүрүүчүлөр криовиалдарды -135℃ чейин сактоого же буу фазасында гана колдонууга ылайыктуу деп сунушташат.

Криоконсервацияланган клеткаларыңызды эритүү

Эритүү процедурасы тоңдурулган маданият үчүн стресс болуп саналат жана клеткалардын оптималдуу жашоого жөндөмдүүлүгүн, калыбына келишин жана иштешин камсыз кылуу үчүн туура иштетүү жана техника талап кылынат. Так эрүү протоколдору белгилүү бир клетка түрлөрүнө жараша болот. Бирок, тез эрүү стандарттуу болуп саналат:

• Уюлдук калыбына келтирүү боюнча кандайдыр бир таасирин азайтуу
• Тоңдуруучу медиада бар эритүүчү заттардын экспозиция убактысын кыскартууга жардам бериңиз
• Муздун кайра кристаллдашуусу аркылуу келтирилген зыянды азайтыңыз

Үлгүлөрдү эритүү үчүн көбүнчө суу ванналары, мончок ванналары же атайын автоматташтырылган аспаптар колдонулат.

Көбүнчө 1 клетка линиясы бир убакта 1-2 мүнөт эритип, 37℃ суу мончосунда алдын ала жылытылган өстүрүүчү чөйрөдө жууганга чейин флакондо бир аз муз калганга чейин акырын айландырышат.

Сүт эмүүчүлөрдүн эмбриондору сыяктуу кээ бир клеткалар үчүн жай ысып кетүү алардын жашоосу үчүн абдан маанилүү.

Клеткалар азыр клетка культурасына, клетканы изоляциялоого же гемопоэтикалык өзөк клеткаларынын учурда – миелоаблятивдик терапияга чейин донордук өзөк клеткаларынын бүтүндүгүн кепилдикке алуу үчүн жашоо жөндөмдүүлүгүн изилдөөгө даяр.

Культурада каптоо үчүн клетканын концентрациясын аныктоо үчүн клеткаларды эсептөө үчүн колдонулган алдын ала жуулган үлгүнүн кичинекей аликвотторун алуу кадимки көрүнүш. Сиз андан кийин клетка обочолонуу жол-жоболордун жыйынтыгын баалоо жана клетка жашоого жөндөмдүүлүгүн аныктоого болот.

Cryovials сактоо боюнча мыкты тажрыйбалар

Криовиалдарда сакталган үлгүлөрдү ийгиликтүү криоконсервациялоо протоколдогу көптөгөн элементтерден көз каранды, анын ичинде туура сактоо жана эсепке алуу.

• Сактагыч жерлердин ортосунда клеткаларды бөлүңүз– Эгер көлөм уруксат берсе, жабдыктын бузулушунан улам үлгү жоготуу коркунучун азайтуу үчүн клеткаларды флакондорго бөлүп, өзүнчө жерлерде сактаңыз.
• Кайчылаш булганууну болтурбоо– Кийинки колдонуудан мурун бир жолу колдонулуучу стерилдүү криогендик флакондорду же автоклавды тандаңыз
• Сиздин клеткаларыңыз үчүн ылайыктуу өлчөмдөгү флакондорду колдонуңуз– флакондор 1 жана 5 мл ортосундагы көлөмдө келет. Жарылып кетүү коркунучун азайтуу үчүн флакондорду ашыкча толтурбаңыз.
• Ички же тышкы жиптүү криогендик флакондорду тандаңыз– Ички жиптүү флакондорду кээ бир университеттер коопсуздук чаралары үчүн сунуш кылышат – алар ошондой эле толтуруу учурунда же суюк азотто сакталганда булгануунун алдын алат.
• Агуунун алдын алуу- Агып кетүүнүн жана булгануунун алдын алуу үчүн бурама капкактарга же O-шакектерге салынган эки инъекцияланган пломбаларды колдонуңуз.
• 2D штрих-коддорун жана флакондорду белгилөө колдонуңуз– көз салуу мүмкүнчүлүгүн камсыз кылуу үчүн, чоң жазуу жерлери бар флакондор ар бир флакондун тийиштүү этикеткаланышына шарт түзөт. 2D штрих-коддору сактоону башкарууга жана иш кагаздарын жүргүзүүгө жардам берет. Түстүү коддуу капкактар ​​оңой аныктоо үчүн пайдалуу.
• Адекваттуу сактоону тейлөө- Клеткалардын жоголуп кетпеши үчүн сактоочу идиштер температураны жана суюк азоттун деңгээлин дайыма көзөмөлдөп турушу керек. Ойготкучтар колдонуучуларга каталар жөнүндө эскертүү үчүн орнотулушу керек.

Коопсуздук чаралары

Суюк азот заманбап изилдөөдө кеңири таралган практика болуп калды, бирок туура эмес колдонулса, олуттуу жаракат алуу коркунучу бар.

Суюк азот менен иштөөдө үшүк алуу, күйүү жана башка жагымсыз окуялардын коркунучун азайтуу үчүн тийиштүү жеке коргонуу шаймандарын (ЖКБ) кийүү керек. кийүү

• Криогендик мээлейлер
• Лабораториялык кийим
• Моюнду да жаап турган соккуга туруктуу бет калкан
• Жабык туфли
• Чачууга чыдамдуу пластикалык алжапкыч

Суюк азот муздаткычтары асфиксия коркунучун азайтуу үчүн жакшы желдетилген жерлерге жайгаштырылышы керек – сыртка чыккан азот бууланып, атмосферадагы кычкылтекти сүрүп чыгарат. Чоң көлөмдөгү дүкөндөрдө кычкылтек сигнализациясы аз болушу керек.

Суюк азот менен иштөөдө жуп болуп иштөө идеалдуу жана аны кадимки жумуш убактысынан тышкары колдонууга тыюу салуу керек.

Иш процессиңизди колдоо үчүн Cryovials

Suzhou Ace Biomedical компаниясы клеткалардын ар кандай түрлөрү үчүн криоконсервациялоо муктаждыктарын канааттандырган өнүмдөрдүн кеңири тандоосун сунуштайт. Портфолиодо бир катар түтүкчөлөр, ошондой эле стерилдүү криовиалдар бар.

Биздин криовиалдар:

• Лабораториялык бурагыч капкак 0,5 мл 1,5 мл 2,0 мл криовиалдык криогендик флакон, конус ылдыйкы криотрубкасы прокладка менен

  ● 0,5 мл, 1,5 мл, 2,0 мл спецификация, юбка менен же юбкасыз
  ● Конустук же өзүн-өзү туруучу дизайн, стерилдүү же стерилдүү эмес
  ● Бурама капкак түтүктөр медициналык класстагы полипропиленден жасалган
  ● PP Cryotube флакондорун кайра-кайра тоңдуруп, эритсе болот
  ●Сырткы капкак дизайны үлгүнү дарылоо учурунда булгануу ыктымалдыгын азайтат.
  ● Бурама капкак криогендик түтүктөр Колдонуу үчүн универсалдуу бурама жиптер
  ● Түтүктөр эң кеңири таралган роторлорго туура келет
  ● Криогендик түтүк о-шакек түтүктөрү стандарттуу 1 дюймдук жана 2 дюймдук, 48 кудук, 81 кудук, 96 кудук жана 100 кудук тоңдургуч кутуларга туура келет
  ● 121°С чейин автоклавдалат жана -86°С чейин тоңду

  БӨЛҮК №	МАТЕРИАЛ	VOLUME	CAPӨҢҮ	PCS/БАГ	СУМКА/КАП
  ACT05-BL-N	PP	0,5 мл	Кара, сары, көк, кызыл, кызгылт көк, ак	500	10
  ACT15-BL-N	PP	1,5 мл	Кара, сары, көк, кызыл, кызгылт көк, ак	500	10
  ACT15-BL-NW	PP	1,5 мл	Кара, сары, көк, кызыл, кызгылт көк, ак	500	10
  ACT20-BL-N	PP	2.0ML	Кара, сары, көк, кызыл, кызгылт көк, ак	500	10