Процесстерди стандартташтыруу аларды оптималдаштырууну жана кийинчерээк түзүү жана гармонизациялоону камтыйт, бул колдонуучудан көз карандысыз узак мөөнөттүү оптималдуу аткарууга мүмкүндүк берет. Стандартташтыруу жогорку сапаттагы натыйжаларды, ошондой эле алардын кайталанышын жана салыштырылышын камсыз кылат.
(классикалык) ПТРдин максаты - ишенимдүү жана кайталануучу натыйжаны түзүү. Кээ бир колдонмолор үчүн, түшүмПЦР продуктда актуалдуу. Бул реакциялар үчүн үлгүлөр бузулбашы жана ПТР иш процесси туруктуу бойдон калуусу үчүн кам көрүү керек. Тактап айтканда, бул жалган оң же жалган терс натыйжаларга алып келиши мүмкүн болгон булганууларды киргизүүнү минималдаштырууну билдирет, ал тургай ПТР реакциясын токтотот. Андан тышкары, реакциянын шарттары ар бир үлгү үчүн мүмкүн болушунча бирдей болушу керек жана андан кийинки реакцияларга (ошол эле ыкма менен) өтүшү керек. Бул реакциялардын курамына, ошондой эле циклдеги температураны башкаруунун түрүнө тиешелүү. Колдонуучу каталар, албетте, мүмкүн болушунча качуу керек.
Төмөндө биз ПТРди даярдоодо жана бүтүндөй процессте кездешүүчү кыйынчылыктарды жана ПТР иш процесстерин стандартташтыруу үчүн колдонулган инструменттерге жана чыгымдалуучу материалдарга карата болгон чечимдерге болгон мамилени көрсөтөбүз.
Реакцияны даярдоо
Реакция компоненттерин ПТР-идиштерге же пластинкаларга бөлүштүрүү бир нече кыйынчылыктарды камтыйт, аларды жеңүү керек:
Реакция шарттары
Жеке компоненттердин так жана так дозалануусу мүмкүн болушунча бирдей реакция шарттарына жетишүү үчүн зарыл. Пиптингдин жакшы техникасынан тышкары, туура куралды тандоо маанилүү. ПЦР мастер-аралашмаларында көбүнчө илешкектүүлүгүн жогорулаткан же көбүк пайда кылган заттар бар. Пиптинг процессинде булар ичтин олуттуу нымланышына алып келетпипетка учтары, ошентип пиптингдин тактыгын азайтат. Түздөн-түз бөлүштүрүүчү системаларды же нымдап кетүүгө азыраак ыктаган альтернативалуу пипетка учтарын колдонуу пипеткалоо процессинин тактыгын жана тактыгын жакшыртат.
Контаминациялар
Бөлүштүрүү процессинде аэрозолдор түзүлөт, алар пипетка ичине жетсе, кийинки пипетинг баскычында башка үлгүнү булгашы мүмкүн. Бул чыпка учтары же түз жылышуу системаларын колдонуу менен алдын алууга болот.
сыяктуу сарпталуучу материалдаркеңештер, ПТРдин иштөө процессинде колдонулган идиштер жана плиталар үлгүнү бузуучу же натыйжаны бурмалоочу заттарды камтыбашы керек. Аларга ДНК, ДНаздар, РНаздар жана ПЦР ингибиторлору, ошондой эле реакция учурунда материалдан потенциалдуу жуулушу мүмкүн болгон компоненттер кирет - сиңирүүчү заттар деп аталган заттар.
Колдонуучу катасы
Канчалык көп үлгүлөр иштетилсе, ката коркунучу ошончолук жогору болот. Үлгү туура эмес идишке же туура эмес кудукка пипета менен куюлуп кетиши мүмкүн. Бул тобокелдикти скважиналардын оңой байкалып турган маркалоосу менен бир кыйла азайтууга болот. Даярдоо кадамдарын автоматташтыруу аркылуу "адам фактору", башкача айтканда, каталар жана колдонуучуга байланыштуу вариациялар минималдаштылат, ошону менен, өзгөчө реакциянын кичине көлөмүндө кайталануучулук жогорулайт. Бул иш станциясында колдонулушу үчүн жетиштүү өлчөмдөгү туруктуу плиталарды талап кылат. Тиркелген штрих-коддор машинанын кошумча окулушун камсыз кылат, бул бүт процессте үлгүгө көз салууну жеңилдетет.
Термоциклдерди программалоо
Аспапты программалоо көп убакытты талап кылат жана ката кетириши мүмкүн. Ар кандай ПТР термикалык циклдери бул процесстин кадамын жөнөкөйлөтүү жана эң негизгиси аны коопсуз кылуу үчүн бирге иштешет:
Оңой иштөө жана колдонуучуга жакшы жетекчилик эффективдүү программалоонун негизи болуп саналат. Бул негизге таянып, сырсөз менен корголгон колдонуучу администрациясы өз программаларын башка колдонуучулар тарабынан өзгөртүлүшүнө жол бербейт. Эгерде бир нече циклерлер (бир эле типтеги) колдонулуп жатса, программаны USB же туташуу аркылуу түздөн-түз бир аспаптан экинчи аспапка өткөрүү пайдалуу. Компьютердик программалык камсыздоо программаларды, колдонуучунун укуктарын жана компьютердеги документтерди борбордук жана коопсуз башкарууга мүмкүндүк берет.
PCR иштетүү
Иштөө учурунда ДНК реакция идишинде күчөтүлөт, мында ар бир үлгү бирдей, ырааттуу реакция шарттарына дуушар болушу керек. Процесс үчүн төмөнкү аспектилер тиешелүү:
Температураны көзөмөлдөө
Температураны көзөмөлдөөдөгү эң сонун тактык жана циклер блогунун бир тектүүлүгү бардык үлгүлөрдү бирдей температурага кондициялоо үчүн негиз болуп саналат. Жылытуу жана муздатуу элементтеринин (пелтиер элементтеринин) жогорку сапаты, ошондой эле аларды блокко туташтыруу ыкмасы “четтик эффект” деп аталган температуралык айырмачылыктардын коркунучун аныктай турган чечүүчү факторлор болуп саналат.
буулануу
Реакциянын айрым компоненттеринин концентрациясы буулануудан реакциянын жүрүшүндө өзгөрбөшү керек. Болбосо, бул өтө аз болушу мүмкүнПЦР продукттүзүлүшү мүмкүн, же такыр жок. Ошондуктан бууланууну азайтуу үчүн коопсуз пломбаны камсыз кылуу абдан маанилүү. Мында термоциклдин ысытылган капкагы менен идиштин пломбасы кол кармашып иштешет. Ар кандай пломба параметрлери үчүн жеткиликтүүПЦР плиталары (шилтеме: Мөөр басуучу макала), муну менен мыкты мөөр жылуулук мөөр аркылуу жетишилет. Башка жабуулар да ылайыктуу болушу мүмкүн, анткени циклдердин капкагынын контакт басымы тандалган пломбага ылайыкташтырылышы мүмкүн.
Процессти стандартташтыруу узак мөөнөттүү келечекте так жана кайталануучу натыйжаларды коргоо үчүн бар. Бул жабдуулардын дайыма жакшы абалда болушун камсыз кылуу үчүн үзгүлтүксүз техникалык тейлөөнү камтыйт. Бардык керектелүүчү материалдар өндүрүлгөн бардык партияларда ырааттуу түрдө жогорку сапатта болушу керек жана алардын ишенимдүү болушу кепилдикке алынышы керек.
Посттун убактысы: 29-ноябрь, 2022-жыл