Теораттын бир молекуласынын бир молекуласы жетиштүү, адатта, классикалык посло үчүн, мисалы, классикалык посло үчүн, бир нече геномикалык апама ДНКга чейин жана 1-киасындагы ДНКга чейин бир аздан кийин, бир аз өлчөмдө колдонулуп келет. Оптималдуу сумма көбүнчө максаттуу ырааттуулуктун көчүрмөлөрүнүн санын, ошондой эле анын татаалдыгына жараша болот.
Эгерде анча-мынча шаблон колдонулса, амплитикалык циклдердин санынын санынан жогорулоо үчүн, жетиштүү көлөмдө жетиштүү көлөмдө көбөйөт. ПКО үчүн колдонулган так полимераза үчүн колдонулган так полимераза - бул оңдоп-түзөө функциясы (3'-5 'enonuclease иши); Ошентип, амплитордук учурунда пайда болгон каталар оңдолбойт. Циклдердин саны канчалык жогору болсо, кемчиликсиз продуктунун амплитизациясы болот. Эгерде ал эми экинчи жагынан, шаблондун көлөмү өтө жогору болсо, праймердин башка (жүз пайыз) экинчисине (комплектерлер) тизилишин, ошондой эле праймердин димрлеринин пайда болушу, ал амплитияга алып келет кошумча продуктулар. Көпчүлүк учурларда ДНК уюлдук маданияттардан же микроорганизмдерден обочолонуп, андан кийин ПКО шаблону катары колдонулган. Коргоодон кийин, ДНКнын концентрациялануусун аныктоо үчүн, ПКО орнотуу үчүн талап кылынган көлөмдү аныктоого болот. Ал эми агаросо гел электрофороистер эсептөөсүн камсыз кылышы мүмкүн, бул ыкма так. Ультрафикалык спектрофотометриялык нуклеин кислоталарын эсептөө үчүн алтын стандарт катары түзүлгөн; Бул түздөн-түз жана анандыр-түз жана ыкчам ыкманын көлөмү 260 нм, концентрациялануу концентрациялануу концентрациясы конвентрация факторунун жардамы менен эсептелет.
Эгерде ДНК концентрациясы өтө төмөн болсо, анда (<1 μg / ml dsdna) же эгерде 260 нм диапазонунда (мисалы, РНК, протеин, туздар), бул ыкма анын мүмкүнчүлүктөрү жетет. Концентрацияланган учурда, окуулар жакында колдонууга болбойт жана булгоочу жайлык иш жүзүндө баалуулукту жогору баалоого алып келет (кээде эбегейсиз зор). Бул учурда, флуоресценцияны колдонуу менен сандык альтернатива болушу мүмкүн. Бул ыкма DSDNAга багытталган флуоресценттик боёкту колдонууга негизделген, бул нуклеин кислотасы жана боёк менен толкунданып, жарык менен толкунданып, андан кийин бир аз жогору толкун узундугун чыгарат. Бул жерде флуоресценттик сигналдын интенсивдүүлүгү ДНКнын суммасына пропорционалдуу, ал эми концентрацияны аныктоо үчүн, ал стандарттуу ийри сызыкка байланыштуу бааланган. Бул ыкманын артыкчылыктары, булганган, ошондой эле ДНКнын концентрациялануусунун төмөн концентрациялануусун аныктоо мүмкүнчүлүгүнө, ошондой эле ДНК концентрациясын аныктоо мүмкүнчүлүгүнө ээ болгон тышкы таасирди жокко чыгарат. Бул ыкманын жарамдуулугу, негизинен, топтоо топтолушуна жана тазалыгына жараша болот; Көпчүлүк учурларда параллелдүү эки ыкманы тең колдонсо болот.
Пост убактысы: Нов-30-2022