Standardîzekirina pêvajoyan xweşbînkirina wan û paşê sazkirin û hevrêzkirina wan vedihewîne, ku destûrê dide performansa çêtirîn dirêj-dirêj - ji bikarhêner serbixwe. Standardîzasyon encamên bilind-kalîteyê, her weha dubarebûn û berhevbûna wan misoger dike.
Armanca PCR (klasîk) hilberîna encamek pêbawer û dubare ye. Ji bo hin sepanan, hilberîna yaHilbera PCRjî têkildar e. Ji bo van reaksiyonan, pêdivî ye ku bal were girtin da ku nimûneyên tawîzê nebin û tevgera xebata PCR domdar bimîne. Bi taybetî, ev tê wergerandin ku kêmkirina danasîna qirêjiyên ku dikarin bibin sedema encamên erênî yên derewîn an neyînî yên derewîn an jî reaksiyona PCR-ê asteng bikin. Wekî din, şert û mercên reaksiyonê divê ji bo her nimûneyek kesane di nav rêvekê de bi qasî ku pêkan wekhev bin û di heman demê de ji reaksiyonên paşîn (yên heman rêbazê) jî werin veguheztin. Ev ji pêkhatina reaksiyonên û hem jî celebê kontrolkirina germahiyê di çerxerê de vedibêje. Çewtiyên bikarhêner, bê guman, bi qasî ku gengaz têne dûr kirin.
Li jêr, em ê kêşeyên ku di dema amadekirinê û di dirêjahiya xebata PCR de rû didin nîşan bidin - û nêzîkatiyên çareseriyê yên ku di derheqê amûr û xerckirinên ku ji bo standardkirina xebata PCR-ê têne bikar anîn de hene.
Amadekirina reaksiyonê
Dabeşkirina hêmanên reaksiyonê di nav firaxên PCR, an jî lewheyên, bi rêzê ve, gelek dijwariyan pêk tîne ku divê werin derbas kirin:
Şertên reaksiyonê
Dema ku meriv şert û mercên reaksiyonê yên herî wekhev ên ku mimkun têne armanc kirin, dozkirina rast û rast a pêkhateyên ferdî neçar e. Ji bilî teknîkek baş a pipetkirinê, hilbijartina amûra rast krîtîk e. PCR-master-mixes bi gelemperî maddeyên ku vîskozîteyê zêde dikin an kef çêdikin hene. Di dema pêvajoya pipetkirinê de, ev dibin sedema şilbûna berbiçavtips pipette, bi vî awayî rastbûna pipetkirinê kêm dike. Bikaranîna pergalên belavkirina rasterast an serişteyên pîpetê yên alternatîf ên ku kêmtir meyla şilbûnê ne dikarin rastbûn û rastbûna pêvajoya pipetkirinê çêtir bikin.
Contaminations
Di pêvajoya belavkirinê de, aerosol têne hilberandin, ku ger destûr were dayîn ku bigihîjin hundurê pipetê, dikarin di qonaxa paşîn a paşîn de nimûneyek din qirêj bikin. Ev dikare bi karanîna serişteyên parzûnê an pergalên jicîhûwarkirina rasterast were asteng kirin.
Vexwarinên wekîtips, firax û lewheyên ku di xebata PCR de têne bikar anîn divê maddeyên ku nimûneyê tawîz bidin an encamê sexte bikin nebin. Di nav wan de ADN, DNase, RNase û astengkerên PCR, û her weha pêkhateyên ku dibe ku di dema reaksiyonê de bi potansiyel ji materyalê derbikevin - maddeyên ku bi navê leachable têne zanîn.
Çewtiya bikarhêner
Zêdetir nimûne têne hilberandin, xetera xeletiyê ew qas zêde dibe. Dikare bi hêsanî çêbibe ku nimûneyek bi pîpetê di keştiyek xelet an bîrek xelet de were avêtin. Ev xetere dikare bi nîşankirina bîrên ku bi hêsanî têne diyar kirin pir kêm bibe. Bi rêya otomatîzekirina gavên belavkirinê, "faktora mirovî", ango, xeletî û guhertoyên têkildar bi bikarhêner ve têne kêm kirin, bi vî rengî dubarebûn zêde dibe, nemaze di rewşa reaksiyonên piçûk de. Ji bo vê yekê pêdivî ye ku lewheyên bi îstîqrara dimensîyonê ya têr di qereqolek xebatê de werin bikar anîn. Barkodên pêvekirî makîn-xwendina zêde peyda dikin, ku di tevahiya pêvajoyê de şopandina nimûneyê hêsan dike.
Bernamekirina thermocycler
Bernamekirina amûrek dikare îsbat bike ku dem dixwe û hem jî dibe sedema xeletiyê. Taybetmendiyên cihêreng ên cyclekera termal PCR bi hev re dixebitin da ku vê gavê pêvajoyê hêsan bikin û ya herî girîng, ew ewledar bikin:
Operasyona hêsan û rêbernameya bikarhêner a baş bingeha bernamekirina bikêr e. Li ser vê bingehê ava kirin, rêveberiya bikarhêner-parastî ya şîfreyê dê rê li ber guheztina bernameyên xwe ji hêla bikarhênerên din ve bigire. Ger gelek cyclers (ji heman celebê) têne bikar anîn, sûdmend e ku bernameyek rasterast ji amûrek bi riya USB an pêwendiyê ve were veguheztin. Nermalava komputerê rêveberiya navendî û ewledar a bernameyan, mafên bikarhêner û belgeyên li ser komputerê dike.
PCR dimeşîne
Di dema rêvekirinê de, ADN di keştiya reaksiyonê de tê zêdekirin, li wir divê her nimûne di bin şert û mercên reaksiyonê yên yeksan û hevgirtî de bin. Aliyên jêrîn ji bo pêvajoyê têkildar in:
Kontrolkirina germê
Di kontrolkirina germahiyê de rastbûna bêkêmasî û homojeniya bloka cycler bingehek e ji bo hembêzkirina germahiya hemî nimûneyan. Qalîteya bilind a hêmanên germkirin û sarkirinê (hêmanên peltier), û her weha awayê ku ew bi blokê ve têne girêdan, faktorên biryardar in ku dê xetera cûdahiya germahiyê diyar bikin ku wekî "bandora derî" tê zanîn.
Evaporation
Pêdivî ye ku hûrgelên pêkhateyên reaksiyonê yên kesane di dema reaksiyonê de ji ber evaporasyonê neguhere. Wekî din, gengaz e ku pir hindik beHilbera PCRdibe ku were çêkirin, an jî qet nebe. Ji ber vê yekê pir girîng e ku bi dabînkirina mohrkirinek ewledar kêmkirina evaporasyonê kêm bike. Di vê rewşê de, qapaxa germkirî ya thermocycler û mora keştiyê bi hev re dixebitin. Vebijarkên cûda yên morkirinê ji bo peyda dibinPlateyên PCR (girêdan: Gotara mohrkirinê), ku ji hêla germkirina germê ve mohra çêtirîn tê bidestxistin. Dibe ku girtina din jî guncan bin, heya ku zexta pêwendiya qapaxa cycler dikare li ser mora hilbijartî were sererast kirin.
Ji bo ku di demek dirêj de encamên rast û dubare werin parastin standardîzekirina pêvajoyê pêk tê. Di vê yekê de lênihêrîna birêkûpêk a alavan pêk tê da ku pê ewle bibe ku ew her gav di rewşek baş a xebatê de ye. Pêdivî ye ku hemî vexwarinên bi domdarî di nav hemî lotikên ku têne hilberandin de bi kalîte bilind bin, û hebûna wan a pêbawer divê were garantî kirin.
Dema şandinê: Nov-29-2022