Pêşkêş
Extractioni ya asîdê nukleîk çi ye?
Di şertên herî hêsan de, derxistina acîdê nukleîk rakirina RNA û / an DNA ji nimûneyek û hemî zêde ya ku ne hewce ye ev e. Pêvajoya derxistinê acîdên nukleîk ji nimûneyê vediqetîne û wan di forma elektrîkê de, ji dilan û konteynirên ku dikarin li ser serlêdanên li jêr bandor bikin, azad dike.
Serlêdanên derxistina acîdê nukleîk
Acidên nukleîk ên paqijkirî di plethora serlêdanên cûda de têne bikar anîn, li seranserê gelek pîşesaziyên cûda cûda dibin. Tenduristî dibe ku devera ku herî zêde tê bikar anîn, bi RNA paqij û DNA paqijkirî ji bo mêvandarek ji bo armancên ceribandina cûda cûda hewce dike.
Serlêdanên derxistina acîdê nukleîk di tenduristiyê de ev in:
- Nêzîkbûna nifşê Next (ngs)
- Bingehîn-bingeha SNP-ê
- Genotyping-based-based
- Rêzkirina enzyme sînorkirin
- Analyzes bi karanîna enzîmên guhartinê (mînak levîn û cloning)
Her weha zeviyên din ên ji tenduristiyê hene
Dîrokek kurt a derxistina asîdê ya nukleîk
DNA derxistinDîrokek paşîn a paşîn, digel ku yekemîn tecrîdek bi navê Friedrich Miescher di sala 1869-an de hatî çêkirin. Miescher hêvî dikir ku rêgezên bingehîn ên jiyanê bi destnîşankirina berhevoka kîmyewî ya hucreyan. Piştî têkçûna Limfocytes, wî karîbû ku ji DNA-yê ji Leucocytes-ê ku di Pus-ê de li Pus-ê tê dîtin li ser zeviyên hatine veqetandin. Wî ev bi lêzêdekirina acid û dûv re jî ji hucreyê ve kir da ku hucreyê hucreyê bihêle, û dûv re protokolek pêşve xistin da ku DNA ji proteînên din veqetîne.
Li dû lêkolîna hilweşîna Myscher, gelek zanyarên din çûne pêşiya teknîkan û pêşdebiran pêşve diçin û paqijkirina DNA. Edwin Joseph Cohn, zanyarek proteîn ji bo Paqijkirina Proteîn di dema WW2 de gelek teknîkan pêş xist. Ew berpirsiyarê damezrandina serumê albumê ya plasma xwînê, ku di parastina zexta osmotîk de di nav lepên xwînê de girîng e. Ev ji bo parastina leşkeran pir girîng bû.
Di sala 1953 Francis Crick de, bi Rosalind Franklin û James Watson re, avahiya DNA destnîşan kir, destnîşan kir ku ew ji du stûnên zincîreyên dirêj ên nucleîk ên nukleîk pêk tê. Vê veberhênanê rêça Meselson û Stahl, ku karibû pêşxistina protokola centrifugolê ya dendikê, ku wan ji E. Coli bakterî ve girêdide, ji ber ku wan di ezmûna xwe ya 1958-an de dupêşandana nîv muhafezekar a DNA derxist.
Teknîkên derxistina acîdê nukleîk
4 qonaxên derxistina DNA çi ne?
Hemî rêbazên derxistinê li ser heman gavên bingehîn çêdikin.
Astengkirina hucreyê. Ev qonax, wekî lîseya hucreyê jî tê zanîn, di navbêna hucreya hucreyê de, di fermanê de, di rêza rûkên intra-hucrasyonê de ku tê de acîdên nukleîk ên ku eleqeyên nukleîk hene.
Rakirina dekên nediyar. Ev di nav lîsansên mîkrok, proteînan û acîdên din ên nukleîk ên din ên ku dikarin bi serlêdanên li jêrzemînê re têkildar in.
Cudakirin. Gelek awayên cûda hene ku hûn acîdên nukleîk ên ji lysate ya paqijkirî ya ku we afirandine veqetînin, yên ku di navbera du kategoriyên sereke de têne çêkirin: çareseriya bingeha bingehîn an solid (binihêrin beşa paşîn).
Lisersekinî. Piştî ku acîdên nukleîk ji hemî konteynir û dilêşên din hatine veqetandin, ew di elementek pir-tevlihev de têne pêşkêş kirin.
Du celeb derxistin
Du celeb derxistina asîdê nukleîk in - rêbazên bingehîn ên bingehîn û rêbazên dewleta zexm. Metoda çareseriyê jî wekî rêbazê kîmyewî tê zanîn, ji ber ku ew bi karanîna kîmyewiyan ve tê girêdan da ku hucreyê hilweşîne û bigihîje materyalê nukleîk. Ev dikare bi karanîna pêkhateyên organîk ên wekî fenol û chloroform, an kêmtir zirarê bikar bînin û ji ber vê yekê bêtir kompleksên inorganic ên wekî proteînase k an silica gel pêşniyar bikin.
Nimûneyên rêbazên berbiçav ên kîmyewî yên ji bo şikandina hucreyek in:
- Rûniştina osmotîk a Membrane
- Rêzkirina enzymatic ya dîwarê hucreyê
- Solubillisation of Membrane
- bi paqijkeran
- bi dermankirina alkali
Teknîkên dewletê yên Solid, di heman demê de wekî rêbazên mekanîkî jî têne zanîn, di nav de karanîna çawa DNA bi substratek zexm re têkilî daynin. Bi hilbijartina bezek an molekulek ku DNA dê li ser pêça bike lê analîz nekare, gengaz e ku her du veqetîne. Nimûneyên teknîkên derxistina qonaxê ya zexm tevî karanîna silica û mêşên magnetîkî.
Extractionêwaza Magnetic Bead rave kir
Methodê derxistina magnetic Bead
Potansiyela ji bo derxistina bezên magnetîkî pêşî li Patentek Patent ji hêla Trevor Hawkins ve hatî nas kirin, ji bo saziya lêkolîna Enstîtuya Spî. Ev patent pejirand ku ew gengaz bû ku materyalê genetîkî derxe destê wan li ser karwanek piştevaniya zexm, ku dikare bibe bezek magnetîkî. Prensîbê ye ku hûn li ser materyalek magnetîkî ya pir fonksiyonîk bikar tînin li ser, ku wê hingê dikare bi serîlêdana hêzek magnetîkî ya li derveyî keştiyê were veqetandin.
Whyima derxistina magnetîkî bikar bînin?
Teknolojiya derxistina magnetic ya magnetic bi gelemperî, ji ber potansiyela ku ew ji bo prosedurên bilez û bikêr digire. Di demên dawî de li wir pêşkeftinên bi sîstemên magnetîkî yên pir fonksiyonel hene, ku otomatîkbûna gengaz a asîdê nukleîk û xebatek xebitandinê ya ku ronahî û lêçûnek pir çavkaniyek e. Di heman demê de, rêbazên derxistina magnetic bead jî gavên centrifugasyonê nabin ku dikarin bibin sedema hêzên shear ku perçeyên dirêj ên DNA hilweşînin. Ev tê vê wateyê ku dirêjên DNA dirêjtir bimînin, ku di ceribandina jenomî de girîng e.
Demjimêra paşîn: Nov-25-2022