Pêşkêş
Derxistina Asîda Nukleîk çi ye?
Bi gotinek pir hêsan, derxistina asîda nukleîk rakirina RNA û / an DNA ji nimûneyek û hemî zêdeya ku ne hewce ye ye. Pêvajoya derxistinê asîdên nukleîk ji nimûneyekê vediqetîne û wan di forma eluatek konsantrekirî de, ji diluent û gemarên ku dikarin bandorê li ser her sepanên jêrîn bike, vedigire.
Serîlêdanên Derxistina Asîda Nukleîk
Asîdên nukleîk ên paqijkirî di gelek sepanên cihêreng de têne bikar anîn, ku di gelek pîşesaziyên cûda de cih digirin. Lênihêrîna tenduristî dibe ku ew devera ku ew herî zêde lê tê bikar anîn, digel RNA û DNA ya paqijkirî ku ji bo gelek armancên ceribandinên cihêreng hewce ne.
Serîlêdanên derxistina asîda nukleîk di lênihêrîna tenduristiyê de ev in:
- Rêzkirina Nifşê Pêşeroj (NGS)
- Jenotîpkirina SNP-ya-based amplification
- Genotyping-based Array
- Restriction Enzyme Digestion
- Analîzên ku bi Enzîmên Guherker bikar tînin (mînak Ligasyon û Klonkirin)
Di heman demê de ji bilî lênihêrîna tenduristiyê qadên din ên ku derxistina asîda nukleîk tê bikar anîn, di nav de ceribandina bavîtiyê, edlî û genomîk lê ne sînorkirî ne.
Kurte Dîrokek Derxistina Asîda Nukleîk
derxistina DNAvedigere rêyeke dûr û dirêj, ku yekem îzolekirina naskirî ji hêla bijîjkekî Swîsrî yê bi navê Friedrich Miescher ve di sala 1869 de hate kirin. Piştî ku bi lîmfosîtan têk çû, wî karîbû baranek xav a DNA ji leukocîtên ku di pusa li ser bandên avêtinê de hatine dîtin bidest bixe. Wî ev yek bi lê zêdekirina asîd û dûv re alkalî li şaneyê kir da ku ji sîtoplazmaya şaneyê derkeve, û dûv re protokolek çêkir da ku DNA ji proteînên din veqetîne.
Li dû lêkolîna serpêhatî ya Miescher, gelek zanyarên din bi pêş ve çûne û teknîkên ji bo veqetandin û paqijkirina ADNyê pêşve xistine. Edwin Joseph Cohn, zanyarek proteîn di dema WW2 de gelek teknîk ji bo paqijkirina proteînan pêşxist. Ew berpirsiyarê veqetandina beşa albumîn a serumê ya plazmaya xwînê bû, ku di domandina zexta osmotîk a di damarên xwînê de girîng e. Ev ji bo saxkirina leşkeran pir girîng bû.
Di sala 1953 de, Francis Crick, tevî Rosalind Franklin û James Watson, strukturên ADNyê diyar kirin, û nîşan da ku ew ji du zincîrên dirêj ên nukleotîdên asîda nukleîk pêk tê. Vê keşifê rê li ber Meselson û Stahl vekir, yên ku karîbûn protokola santrîfûjasyonê ya gradientê ya tîrêjê pêş bixin da ku DNA ji bakteriya E. Coli veqetînin ji ber ku wan dubarekirina nîv-muhafezekar a ADNyê di ceribandina xwe ya 1958 de destnîşan kirin.
Teknîkên Derxistina Asîda Nukleîk
4 qonaxên derxistina DNA çi ne?
Hemî rêbazên derxistinê di heman gavên bingehîn de vedihewîne.
Têkçûna Hucreyê. Ev qonax, ku wekî lîza şaneyê jî tê zanîn, têkbirina dîwarê şaneyê û/an parzûna hucreyê vedihewîne, da ku şilavên hundurîn-hucreyî yên ku asîdên nukleî yên balkêş dihewîne berdin.
Rakirina Bermahiyên Nexwastî. Ev di nav de lîpîdên membranê, proteîn û asîdên nukleî yên din ên nexwestî yên ku dikarin bi sepanên jêrîn de mudaxele bikin hene.
Cudakirin. Gelek awayên cihêreng hene ku hûn asîdên nukleîk ên balkêş ji lîzata paqijkirî ya ku we afirandiye veqetînin, ku di navbera du kategoriyên sereke de cih digirin: bingeha çareseriyê an dewleta zexm (li beşa paşîn binêre).
Lisersekinî. Piştî ku asîdên nukleîk ji hemî gemar û rijandinên din hatine veqetandin, ew di nav elûtek pir-konsantrekirî de têne pêşkêş kirin.
Du Cûreyên Derxistinê
Du celeb derxistina asîda nukleîk hene - rêbazên çareseriyê û rêbazên dewleta zexm. Rêbaza bingehîn a çareseriyê wekî rêbaza derxistina kîmyewî jî tê zanîn, ji ber ku ew bi karanîna kîmyewî ji bo şikandina şaneyê û gihîştina maddeya nukleî pêk tê. Ev dikare bi karanîna pêkhateyên organîk ên wekî fenol û kloroform, an jî pêkhateyên neorganîkî yên kêm zirardar û ji ber vê yekê bêtir pêşniyarkirî yên wekî Proteinase K an jelê silica bikar bînin.
Nimûneyên rêbazên cuda yên derxistina kîmyewî ji bo hilweşandina şaneyek ev in:
- Parzûna osmotîk diqelişe
- Xwarina enzîmî ya dîwarê şaneyê
- Çareserkirina membranê
- Bi deterjantan
- Bi dermankirina alkali
Teknîkên rewşa hişk, ku wekî rêbazên mekanîkî jî têne zanîn, bi karanîna DNA-yê bi substratek zexm re têkildar e. Bi bijartina mûçek an molekulek ku ADN dê pê ve girêbide lê analît nagire, gengaz e ku herduyan ji hev veqetînin. Nimûneyên teknîkên derxistina qonaxa zexm di nav de karanîna silica û mûçikên magnetîkî.
Derxistina Bead Magnetic Ravekirin
Rêbaza Derxistina Bead Magnetic
Potansiyela derxistina bi karanîna mûçikên magnetîkî yekem car di patentek Amerîkî de ku ji hêla Trevor Hawkins ve hatî tomar kirin, ji bo saziya lêkolînê ya Enstîtuya Whitehead hate nas kirin. Vê patentê pejirand ku gengaz e ku meriv materyalê genetîkî bi girêdana wan bi hilgirê piştgiriyek zexm, ku dikare bibe belekek magnetîkî, were derxistin. Prensîb ev e ku hûn bexşek magnetîkî ya pir fonksiyonelkirî bikar bînin ku dê materyalê genetîkî pê ve girêbide, ku dûv re dikare bi sepandina hêzek magnetîkî li derveyî keştiya ku nimûneyê digire ji supernatant were veqetandin.
Çima Derxistina Beadê Magnetic bikar bînin?
Teknolojiya derxistina berikên magnetîkî her ku diçe berbelav dibe, ji ber potansiyela ku ew ji bo prosedurên derxistina bilez û bikêr digire. Di van demên dawî de pêşkeftinên mûçikên magnetîkî yên pir fonksiyonel ên bi pergalên tampon guncan hene, ku otomatîkkirina derxistina asîda nukleîk û karek ku pir çavkaniyek sivik û lêçûn e gengaz kiriye. Di heman demê de, rêbazên derxistina benderên magnetîkî gavên santrîfujasyonê yên ku dikarin bibin sedema hêzên hejandinê yên ku perçeyên dirêjtir ên DNA-yê dişkînin, nagirin. Ev tê vê wateyê ku zincîreyên dirêjtir ên DNA saxlem dimînin, ku ev yek di ceribandina genomîkê de girîng e.
Dema şandinê: Nov-25-2022