성공적인 증폭 반응을 위해서는 개별 반응 성분이 각 준비에 올바른 농도로 존재해야 합니다. 또한, 오염이 발생하지 않는 것이 중요합니다.
특히 많은 반응을 설정해야 하는 경우 각 시약을 각 용기에 별도로 피펫팅하는 대신 소위 마스터 믹스를 준비하는 것이 확립되었습니다. 시료별 구성 요소(프라이머)와 물만 첨가되는 사전 구성된 혼합물이 시중에서 판매됩니다. 또는 마스터 믹스를 직접 준비할 수도 있습니다. 두 가지 변형 모두에서 혼합물은 주형 없이 각 PCR 용기에 배포되고 개별 DNA 샘플은 마지막에 별도로 추가됩니다.
마스터 믹스를 사용하면 여러 가지 장점이 있습니다. 첫째, 단일 피펫팅 단계 수가 줄어듭니다. 이러한 방식으로 피펫팅 중 사용자 오류 위험과 오염 위험이 모두 최소화되고 시간도 절약됩니다. 원칙적으로 더 많은 양이 투여되기 때문에 피펫팅 정확도도 더 높습니다. 이는 피펫의 기술 데이터를 확인할 때 이해하기 쉽습니다. 주입량이 작을수록 편차가 커질 수 있습니다. 모든 준비가 동일한 용기에서 나온다는 사실은 균질성에 긍정적인 영향을 미칩니다(잘 혼합된 경우). 이는 또한 실험의 재현성을 향상시킵니다.
마스터 믹스를 준비할 때 최소 10%의 추가 용량을 추가해야 합니다(예: 10개의 준비가 필요한 경우 11을 기준으로 계산). 그러면 마지막 용기도 적절하게 채워집니다. 이러한 방식으로 (약간의) 피펫팅 부정확성과 세제 함유 용액을 투여할 때 샘플 손실의 영향을 보상할 수 있습니다. 폴리머라제, 마스터 믹스 등의 효소용액에는 세제가 함유되어 거품이 생기고 노멀 내부 표면에 잔여물이 남게 됩니다.피펫 팁.
적용 분야와 분배할 액체의 유형에 따라 올바른 피펫팅 기술(1)을 선택하고 적절한 장비를 선택해야 합니다. 세제가 포함된 용액의 경우 공기 쿠션 피펫 대신 직접 치환 시스템이나 소위 "낮은 유지력" 피펫 팁을 사용하는 것이 좋습니다. 효과ACE 피펫 팁특히 소수성 표면을 기반으로 합니다. 세제가 함유된 액체는 내부와 외부에 잔여막이 남지 않아 용액의 손실을 최소화할 수 있습니다.
모든 성분의 정확한 투여 외에도, 제제의 오염이 발생하지 않는 것도 중요합니다. 에어 쿠션 피펫의 피펫팅 과정에서 피펫에 남아 있는 에어로졸이 생성될 수 있으므로 고순도 소모품을 사용하는 것만으로는 충분하지 않습니다. 에어로졸에 포함될 수 있는 DNA는 다음 피펫팅 단계에서 한 샘플에서 다음 샘플로 옮겨져 오염될 수 있습니다. 위에서 언급한 직접 변위 시스템도 이러한 위험을 최소화할 수 있습니다. 에어 쿠션 피펫의 경우 필터 팁을 사용하여 물 튀김, 에어로졸 및 생체 분자를 유지하여 피펫 콘을 보호하는 것이 좋습니다.
게시 시간: 2022년 12월 6일