프로세스 표준화에는 최적화, 후속 설정 및 조화가 포함되어 사용자와 관계없이 장기적으로 최적의 성능을 허용합니다. 표준화는 고품질 결과는 물론 재현성과 비교 가능성도 보장합니다.
(전통적인) PCR의 목표는 신뢰할 수 있고 재현 가능한 결과를 생성하는 것입니다. 특정 용도의 경우,PCR 생성물또한 관련이 있습니다. 이러한 반응의 경우 샘플이 손상되지 않고 PCR 작업 흐름이 안정적으로 유지되도록 주의를 기울여야 합니다. 특히 이는 위양성 또는 위음성 결과를 초래하거나 심지어 PCR 반응을 억제할 수도 있는 오염의 도입을 최소화하는 것을 의미합니다. 또한, 반응 조건은 실행 내의 각 개별 샘플에 대해 가능한 한 동일해야 하며 (동일한 방법의) 후속 반응에도 적용 가능해야 합니다. 이는 반응의 구성뿐만 아니라 사이클러의 온도 제어 유형을 나타냅니다. 물론 사용자 오류는 가능한 한 피해야 합니다.
아래에서는 PCR 준비 및 실행 전반에 걸쳐 발생하는 문제와 PCR 작업 흐름 표준화에 사용되는 기기 및 소모품과 관련하여 존재하는 솔루션에 대한 접근 방식을 보여줍니다.
반응 준비
반응 성분을 각각 PCR 용기 또는 플레이트에 분주하는 것은 극복해야 할 여러 가지 과제로 구성됩니다.
반응 조건
가능한 가장 동일한 반응 조건을 목표로 하려면 개별 구성 요소의 정확하고 정밀한 투여가 필수적입니다. 좋은 피펫팅 기술 외에도 올바른 도구를 선택하는 것도 중요합니다. PCR 마스터 믹스에는 점도를 높이거나 거품을 생성하는 물질이 포함되어 있는 경우가 많습니다. 피펫팅 과정에서 이로 인해 상당한 양의 습윤이 발생합니다.피펫 팁, 따라서 피펫팅 정확도가 감소합니다. 젖음 현상이 덜한 직접 분배 시스템이나 대체 피펫 팁을 사용하면 피펫팅 과정의 정확성과 정밀도가 향상될 수 있습니다.
오염
분주 과정에서 에어로졸이 생성되는데, 이것이 피펫 내부에 도달하면 다음 피펫팅 단계에서 다른 샘플을 오염시킬 가능성이 있습니다. 이는 필터 팁이나 직접 변위 시스템을 사용하여 방지할 수 있습니다.
다음과 같은 소모품팁, PCR 작업 흐름에 사용되는 용기 및 플레이트에는 샘플을 손상시키거나 결과를 위조하는 물질이 포함되어서는 안 됩니다. 여기에는 DNA, DNase, RNase 및 PCR 억제제뿐만 아니라 반응 중에 물질에서 잠재적으로 침출될 수 있는 성분(침출물로 알려진 물질)이 포함됩니다.
사용자 오류
더 많은 샘플을 처리할수록 오류 위험이 높아집니다. 샘플이 잘못된 용기나 잘못된 웰로 피펫팅되는 경우가 쉽게 발생할 수 있습니다. 유정을 쉽게 식별할 수 있도록 표시하면 이러한 위험을 상당히 줄일 수 있습니다. 분주 단계의 자동화를 통해 오류 및 사용자 관련 변동과 같은 "인적 요소"가 최소화되어 특히 반응량이 적은 경우 재현성이 향상됩니다. 이를 위해서는 워크스테이션에 사용하기에 충분한 치수 안정성을 갖춘 플레이트가 필요합니다. 부착된 바코드는 추가적인 기계 판독성을 제공하여 전체 프로세스에서 샘플 추적을 단순화합니다.
열자전거 프로그래밍
계측기 프로그래밍은 시간이 많이 걸리고 오류가 발생하기 쉽습니다. 다양한 PCR 열 순환기 기능이 함께 작동하여 이 프로세스 단계를 단순화하고 가장 중요한 것은 안전을 보장합니다.
쉬운 조작과 우수한 사용자 안내는 효율적인 프로그래밍의 기초입니다. 이러한 기반을 바탕으로 비밀번호로 보호된 사용자 관리를 통해 자신의 프로그램이 다른 사용자에 의해 변경되는 것을 방지할 수 있습니다. 동일한 유형의 여러 사이클러를 사용하는 경우 USB 또는 연결을 통해 프로그램을 한 기기에서 다른 기기로 직접 전송할 수 있으면 유리합니다. 컴퓨터 소프트웨어를 사용하면 컴퓨터의 프로그램, 사용자 권한 및 문서를 중앙에서 안전하게 관리할 수 있습니다.
PCR 실행
실행 중에 DNA는 반응 용기에서 증폭되며, 여기서 각 샘플은 동일하고 일관된 반응 조건을 거쳐야 합니다. 프로세스와 관련된 측면은 다음과 같습니다.
온도 조절
온도 제어의 탁월한 정확성과 사이클러 블록의 균질성은 모든 샘플의 균일한 온도 조절을 위한 기초입니다. 가열 및 냉각 요소(펠티에 요소)의 고품질과 이러한 요소가 블록에 연결되는 방식은 "에지 효과"로 알려진 온도 불일치의 위험을 결정하는 결정적인 요소입니다.
증발
개별 반응 성분의 농도는 증발로 인해 반응 과정에서 변하지 않아야 합니다. 그렇지 않으면 거의 불가능할 수도 있습니다.PCR 생성물생성되거나 전혀 생성되지 않을 수 있습니다. 따라서 안전한 밀봉을 보장하여 증발을 최소화하는 것이 중요합니다. 이 경우 열순환기의 가열된 뚜껑과 용기의 밀봉이 함께 작동합니다. 다양한 씰링 옵션을 사용할 수 있습니다.PCR 플레이트(링크: 밀봉 기사), 열 밀봉을 통해 최상의 밀봉이 달성됩니다. 사이클러 뚜껑의 접촉 압력을 선택한 씰에 맞게 조정할 수 있는 한 다른 클로저도 적합할 수 있습니다.
장기적으로 정확하고 재현 가능한 결과를 보호하기 위해 프로세스 표준화가 시행됩니다. 여기에는 장비가 항상 양호한 작동 상태를 유지하도록 정기적인 유지 관리가 포함됩니다. 모든 소모품은 생산된 모든 로트에서 일관되게 높은 품질을 유지해야 하며 안정적인 가용성이 보장되어야 합니다.
게시 시간: 2022년 11월 29일