프로세스의 표준화에는 최적화 및 후속 설립 및 조화가 포함되어 있으며 사용자와 무관하게 장기 최적의 성능을 제공합니다. 표준화는 고품질 결과와 재현성과 비교 가능성을 보장합니다.
(클래식) PCR의 목표는 신뢰할 수 있고 재현 가능한 결과의 생성입니다. 특정 응용 분야의 경우 수율PCR 제품또한 관련이 있습니다. 이러한 반응의 경우 샘플이 손상되지 않고 PCR 워크 플로가 안정적으로 유지되도록주의를 기울여야합니다. 구체적으로, 이것은 잘못된 양성 또는 거짓 음성 결과를 유발하거나 심지어 PCR 반응을 억제 할 수있는 오염의 도입을 최소화하는 데 해석된다. 또한, 반응 조건은 실행 내의 각 개별 샘플에 대해 가능한 한 동일해야하며 (동일한 방법의 후속 반응으로 전송할 수 있어야한다. 이것은 반응의 조성뿐만 아니라 사이클러의 온도 제어 유형을 나타냅니다. 물론 사용자 오류는 가능한 한 많이 피해야합니다.
아래에서, 우리는 준비 중 및 PCR 달리기 전반에 걸쳐 발생하는 과제와 PCR 워크 플로의 표준화에 사용되는 기기 및 소모품과 관련하여 존재하는 솔루션에 대한 접근법을 보여줄 것입니다.
반응 준비
반응 성분을 PCR 혈관 또는 플레이트로 분배하는 것은 각각 극복해야 할 여러 가지 과제를 포함합니다.
반응 조건
개별 성분의 정확하고 정확한 투약은 가능한 가장 동일한 반응 조건을 목표로 할 때 필수적입니다. 좋은 피펫 팅 기술 외에도 올바른 도구를 선택하는 것이 중요합니다. PCR 마스터 혼합물에는 점도를 증가 시키거나 거품을 생성하는 물질이 종종 포함되어 있습니다. 피펫 팅 과정에서 이들은 상당한 습윤으로 이어집니다.피펫 팁따라서 피펫 팅 정확도를 줄입니다. 습윤에 취약하지 않은 직접 분배 시스템 또는 대체 피펫 팁을 사용하면 피펫 팅 공정의 정확성과 정밀도를 향상시킬 수 있습니다.
오염
분배 공정 동안, 피펫 내부에 도달 할 수있는 경우 에어로졸이 생성되어 다음 피펫 팅 단계에서 다른 샘플을 잠재적으로 오염시킬 수 있습니다. 필터 팁 또는 직접 변위 시스템을 사용하여 방지 할 수 있습니다.
다음과 같은 소모품팁, PCR 워크 플로에 사용되는 혈관 및 플레이트는 샘플을 손상 시키거나 결과를 위조하는 물질을 포함해서는 안됩니다. 여기에는 DNA, DNASE, RNASE 및 PCR 억제제뿐만 아니라 반응 동안 재료로부터 잠재적으로 침출 할 수있는 성분, 즉 침출제로 알려진 물질이 포함됩니다.
사용자 오류
샘플이 많을수록 오류 위험이 높아집니다. 샘플이 잘못된 용기 또는 잘못된 우물에 피펫 팅 될 수 있습니다. 이 위험은 우물의 쉽게 식별 할 수있는 마킹으로 인해 상당히 줄어들 수 있습니다. 분배 단계의 자동화를 통해 "인적 요소", 즉 오류 및 사용자 관련 변동이 최소화되어 특히 작은 반응 부피의 경우 재현성이 증가합니다. 이를 위해서는 워크 스테이션에 사용되기에 충분한 차원 안정성 플레이트가 필요합니다. 부착 된 바코드는 추가 기계 판독 가능성을 제공하여 전체 프로세스에서 샘플 추적을 단순화합니다.
Thermocycler의 프로그래밍
악기를 프로그래밍하는 것은 오류가 발생하기 쉬운 시간이 걸릴 수 있습니다. 다양한 PCR 열 사이클러 기능이 함께 작동 하여이 프로세스 단계를 단순화하고 가장 중요한 것은 안전하게 만들기 위해 다음과 같습니다.
쉽게 작동하고 우수한 사용자 지침은 효율적인 프로그래밍의 기초입니다. 이 기초를 바탕으로 암호로 보호 된 사용자 관리는 다른 사용자가 자신의 프로그램을 변경하는 것을 방지 할 수 있습니다. 동일한 유형의 여러 사이클러가 사용중인 경우 USB 또는 연결을 통해 프로그램을 한 악기에서 다른 계측기로 직접 전송할 수있는 경우 유리합니다. 컴퓨터 소프트웨어를 사용하면 컴퓨터에 프로그램, 사용자 권한 및 문서를 중앙에 안전하게 관리 할 수 있습니다.
PCR 실행
실행 중에, DNA는 반응 용기에서 증폭되며, 여기서 각 샘플은 동일하고 일관된 반응 조건을 적용해야한다. 다음 측면은 프로세스와 관련이 있습니다.
온도 제어
사이클러 블록의 온도 제어 및 균질성의 탁월한 정확도는 모든 샘플의 온도 컨디셔닝의 기초입니다. 가열 및 냉각 요소의 고품질 (펠티에 요소)과 이들이 블록에 연결된 방식은 "에지 효과"로 알려진 온도 불일치의 위험을 결정하는 결정 요인입니다.
증발
개별 반응 성분의 농도는 증발로 인해 반응 과정에서 변하지 않아야합니다. 그렇지 않으면, 거의 가능하지 않습니다PCR 제품생성 될 수 있습니다. 따라서 안전한 씰을 보장하여 증발을 최소화하는 것이 중요합니다. 이 경우, 열구 사이클러의 가열 된 뚜껑과 혈관의 밀봉은 손에 작동합니다. 다양한 밀봉 옵션을 사용할 수 있습니다PCR 플레이트 (링크 : 밀봉 기사), 최상의 씰은 열 밀봉을 통해 달성됩니다. 사이클러 뚜껑의 접촉 압력이 선택된 씰로 조정될 수있는 한 다른 폐쇄도 적합 할 수 있습니다.
정확하고 재현 가능한 결과를 장기적으로 보호하기 위해 프로세스 표준화가 마련되었습니다. 여기에는 장비의 정기적 인 유지 보수가 포함되어있어 항상 양호한 작업 상태에 있는지 확인합니다. 모든 소모품은 생산 된 모든 로트에서 일관되게 고품질이어야하며 신뢰할 수있는 가용성을 보장해야합니다.
후 시간 : 11 월 29 일