ಪಿಸಿಆರ್ ಮಿಶ್ರಣಗಳನ್ನು ಪೈಪೆಟ್ ಮಾಡುವಾಗ ಏನು ಪರಿಗಣಿಸಬೇಕು?

ಯಶಸ್ವಿ ವರ್ಧನೆಯ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳಿಗಾಗಿ, ಪ್ರತಿ ತಯಾರಿಕೆಯಲ್ಲಿ ಪ್ರತ್ಯೇಕ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಘಟಕಗಳು ಸರಿಯಾದ ಸಾಂದ್ರತೆಯಲ್ಲಿ ಇರುವುದು ಅವಶ್ಯಕ. ಹೆಚ್ಚುವರಿಯಾಗಿ, ಯಾವುದೇ ಮಾಲಿನ್ಯವು ಸಂಭವಿಸುವುದಿಲ್ಲ ಎಂಬುದು ಮುಖ್ಯ.

ವಿಶೇಷವಾಗಿ ಅನೇಕ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿಸಬೇಕಾದಾಗ, ಪ್ರತಿ ಕಾರಕವನ್ನು ಪ್ರತಿ ಪಾತ್ರೆಯಲ್ಲಿ ಪ್ರತ್ಯೇಕವಾಗಿ ಪೈಪೆಟ್ ಮಾಡುವ ಬದಲು ಮಾಸ್ಟರ್ ಮಿಕ್ಸ್ ಎಂದು ಕರೆಯಲ್ಪಡುವದನ್ನು ತಯಾರಿಸಲು ಸ್ಥಾಪಿಸಲಾಗಿದೆ. ಪೂರ್ವ-ಕಾನ್ಫಿಗರ್ ಮಾಡಲಾದ ಮಿಶ್ರಣಗಳು ವಾಣಿಜ್ಯಿಕವಾಗಿ ಲಭ್ಯವಿವೆ, ಇದರಲ್ಲಿ ಮಾದರಿ-ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಘಟಕಗಳು (ಪ್ರೈಮರ್) ಮತ್ತು ನೀರನ್ನು ಮಾತ್ರ ಸೇರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಪರ್ಯಾಯವಾಗಿ, ಮಾಸ್ಟರ್ ಮಿಶ್ರಣವನ್ನು ನೀವೇ ತಯಾರಿಸಬಹುದು. ಎರಡೂ ರೂಪಾಂತರಗಳಲ್ಲಿ, ಮಿಶ್ರಣವನ್ನು ಪ್ರತಿ PCR ಪಾತ್ರೆಯಲ್ಲಿ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಇಲ್ಲದೆ ವಿತರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಪ್ರತ್ಯೇಕ DNA ಮಾದರಿಯನ್ನು ಕೊನೆಯಲ್ಲಿ ಪ್ರತ್ಯೇಕವಾಗಿ ಸೇರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.

ಮಾಸ್ಟರ್ ಮಿಶ್ರಣವನ್ನು ಬಳಸುವುದು ಹಲವಾರು ಪ್ರಯೋಜನಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ: ಮೊದಲನೆಯದಾಗಿ, ಏಕ ಪೈಪ್ಟಿಂಗ್ ಹಂತಗಳ ಸಂಖ್ಯೆಯನ್ನು ಕಡಿಮೆಗೊಳಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಈ ರೀತಿಯಾಗಿ, ಪೈಪೆಟಿಂಗ್ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಬಳಕೆದಾರರ ದೋಷಗಳ ಅಪಾಯ ಮತ್ತು ಮಾಲಿನ್ಯದ ಅಪಾಯವನ್ನು ಕಡಿಮೆಗೊಳಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು, ಸಹಜವಾಗಿ, ಸಮಯವನ್ನು ಉಳಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ತಾತ್ವಿಕವಾಗಿ, ಪೈಪೆಟಿಂಗ್ ನಿಖರತೆ ಕೂಡ ಹೆಚ್ಚಾಗಿರುತ್ತದೆ, ಏಕೆಂದರೆ ದೊಡ್ಡ ಸಂಪುಟಗಳನ್ನು ಡೋಸ್ ಮಾಡಲಾಗುತ್ತದೆ. ಪೈಪೆಟ್‌ಗಳ ತಾಂತ್ರಿಕ ಡೇಟಾವನ್ನು ಪರಿಶೀಲಿಸುವಾಗ ಇದನ್ನು ಅರ್ಥಮಾಡಿಕೊಳ್ಳುವುದು ಸುಲಭ: ಡೋಸ್ಡ್ ಪರಿಮಾಣವು ಚಿಕ್ಕದಾಗಿದೆ, ಹೆಚ್ಚಿನ ವಿಚಲನಗಳು ಆಗಿರಬಹುದು. ಎಲ್ಲಾ ಸಿದ್ಧತೆಗಳು ಒಂದೇ ಹಡಗಿನಿಂದ ಬರುತ್ತವೆ ಎಂಬ ಅಂಶವು ಏಕರೂಪತೆಯ ಮೇಲೆ ಸಕಾರಾತ್ಮಕ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ಬೀರುತ್ತದೆ (ಚೆನ್ನಾಗಿ ಮಿಶ್ರಣವಾಗಿದ್ದರೆ). ಇದು ಪ್ರಯೋಗಗಳ ಪುನರುತ್ಪಾದನೆಯನ್ನು ಸುಧಾರಿಸುತ್ತದೆ.

ಮಾಸ್ಟರ್ ಮಿಶ್ರಣವನ್ನು ತಯಾರಿಸುವಾಗ, ಕನಿಷ್ಠ 10% ಹೆಚ್ಚುವರಿ ಪರಿಮಾಣವನ್ನು ಸೇರಿಸಬೇಕು (ಉದಾಹರಣೆಗೆ 10 ಸಿದ್ಧತೆಗಳು ಅಗತ್ಯವಿದ್ದರೆ, 11 ರ ಆಧಾರದ ಮೇಲೆ ಲೆಕ್ಕ ಹಾಕಿ), ಇದರಿಂದ ಕೊನೆಯ ಪಾತ್ರೆಯು ಸರಿಯಾಗಿ ತುಂಬಿರುತ್ತದೆ. ಈ ರೀತಿಯಾಗಿ, (ಸ್ವಲ್ಪ) ಪೈಪೆಟಿಂಗ್ ದೋಷಗಳು ಮತ್ತು ಡಿಟರ್ಜೆಂಟ್-ಒಳಗೊಂಡಿರುವ ಪರಿಹಾರಗಳನ್ನು ಡೋಸಿಂಗ್ ಮಾಡುವಾಗ ಮಾದರಿ ನಷ್ಟದ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ಸರಿದೂಗಿಸಬಹುದು. ಡಿಟರ್ಜೆಂಟ್‌ಗಳು ಪಾಲಿಮರೇಸ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಮಾಸ್ಟರ್ ಮಿಶ್ರಣಗಳಂತಹ ಕಿಣ್ವ ದ್ರಾವಣಗಳಲ್ಲಿ ಒಳಗೊಂಡಿರುತ್ತವೆ, ಇದು ಸಾಮಾನ್ಯ ಒಳ ಮೇಲ್ಮೈಯಲ್ಲಿ ಫೋಮ್ ರಚನೆ ಮತ್ತು ಉಳಿಕೆಗಳನ್ನು ಉಂಟುಮಾಡುತ್ತದೆ.ಪೈಪೆಟ್ ಸಲಹೆಗಳು.

ಅಪ್ಲಿಕೇಶನ್ ಮತ್ತು ವಿತರಿಸಬೇಕಾದ ದ್ರವದ ಪ್ರಕಾರವನ್ನು ಅವಲಂಬಿಸಿ, ಸರಿಯಾದ ಪೈಪೆಟಿಂಗ್ ತಂತ್ರವನ್ನು (1) ಆಯ್ಕೆ ಮಾಡಬೇಕು ಮತ್ತು ಸೂಕ್ತವಾದ ಸಾಧನವನ್ನು ಆಯ್ಕೆ ಮಾಡಬೇಕು. ಮಾರ್ಜಕಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಪರಿಹಾರಗಳಿಗಾಗಿ, ನೇರ ಸ್ಥಳಾಂತರ ವ್ಯವಸ್ಥೆ ಅಥವಾ ಗಾಳಿ-ಕುಶನ್ ಪೈಪೆಟ್‌ಗಳಿಗೆ ಪರ್ಯಾಯವಾಗಿ "ಕಡಿಮೆ ಧಾರಣ" ಪೈಪೆಟ್ ಸುಳಿವುಗಳನ್ನು ಶಿಫಾರಸು ಮಾಡಲಾಗುತ್ತದೆ. ಪರಿಣಾಮACE ಪೈಪೆಟ್ ತುದಿನಿರ್ದಿಷ್ಟವಾಗಿ ಹೈಡ್ರೋಫೋಬಿಕ್ ಮೇಲ್ಮೈಯನ್ನು ಆಧರಿಸಿದೆ. ಡಿಟರ್ಜೆಂಟ್‌ಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ದ್ರವಗಳು ಒಳಗೆ ಮತ್ತು ಹೊರಗೆ ಶೇಷ ಫಿಲ್ಮ್ ಅನ್ನು ಬಿಡುವುದಿಲ್ಲ, ಇದರಿಂದಾಗಿ ದ್ರಾವಣದ ನಷ್ಟವನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಬಹುದು.

ಎಲ್ಲಾ ಘಟಕಗಳ ನಿಖರವಾದ ಡೋಸಿಂಗ್ ಜೊತೆಗೆ, ಸಿದ್ಧತೆಗಳ ಯಾವುದೇ ಮಾಲಿನ್ಯವು ಸಂಭವಿಸುವುದಿಲ್ಲ ಎಂಬುದು ಸಹ ಮುಖ್ಯವಾಗಿದೆ. ಹೆಚ್ಚಿನ ಶುದ್ಧತೆಯ ಉಪಭೋಗ್ಯವನ್ನು ಬಳಸುವುದು ಸಾಕಾಗುವುದಿಲ್ಲ, ಏಕೆಂದರೆ ಗಾಳಿಯ ಕುಶನ್ ಪೈಪೆಟ್ನಲ್ಲಿ ಪೈಪ್ಟಿಂಗ್ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯು ಪೈಪೆಟ್ನಲ್ಲಿ ಉಳಿಯುವ ಏರೋಸಾಲ್ಗಳನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸಬಹುದು. ಏರೋಸಾಲ್‌ನಲ್ಲಿ ಒಳಗೊಂಡಿರಬಹುದಾದ ಡಿಎನ್‌ಎಯನ್ನು ಕೆಳಗಿನ ಪೈಪೆಟಿಂಗ್ ಹಂತದಲ್ಲಿ ಒಂದು ಮಾದರಿಯಿಂದ ಇನ್ನೊಂದಕ್ಕೆ ವರ್ಗಾಯಿಸಬಹುದು ಮತ್ತು ಹೀಗಾಗಿ ಮಾಲಿನ್ಯಕ್ಕೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ. ಮೇಲೆ ತಿಳಿಸಲಾದ ನೇರ ಸ್ಥಳಾಂತರ ವ್ಯವಸ್ಥೆಗಳು ಈ ಅಪಾಯವನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಬಹುದು. ಏರ್-ಕುಶನ್ ಪೈಪೆಟ್‌ಗಳಿಗೆ ಸ್ಪ್ಲಾಶ್‌ಗಳು, ಏರೋಸಾಲ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಜೈವಿಕ ಅಣುಗಳನ್ನು ಉಳಿಸಿಕೊಳ್ಳುವ ಮೂಲಕ ಪೈಪೆಟ್ ಕೋನ್ ಅನ್ನು ರಕ್ಷಿಸಲು ಫಿಲ್ಟರ್ ಸುಳಿವುಗಳನ್ನು ಬಳಸುವುದು ಅರ್ಥಪೂರ್ಣವಾಗಿದೆ.