Күшейту реакцияларының сәтті өтуі үшін әрбір препаратта жеке реакция компоненттері дұрыс концентрацияда болуы қажет. Сонымен қатар, ластанудың болмауы маңызды.
Әсіресе, көптеген реакцияларды орнату қажет болғанда, әрбір реагентті әр ыдысқа жеке тамшуырлаудың орнына негізгі қоспа деп аталатын қоспаны дайындау орнатылған. Алдын ала конфигурацияланған қоспалар тек үлгіге тән құрамдас бөліктер (праймер) және су қосылады. Немесе мастер-миксті өзіңіз дайындауға болады. Екі нұсқада да қоспа әр ПТР ыдысына шаблонсыз таратылады және жеке ДНҚ үлгісі соңында бөлек қосылады.
Негізгі қоспаны пайдалану бірнеше артықшылықтарға ие: Біріншіден, бір тамшуыр қадамдарының саны азаяды. Осылайша, тамшуырлау кезінде пайдаланушы қателерінің қаупі де, ластану қаупі де барынша азайтылады және, әрине, уақыт үнемделеді. Негізінде тамшуырдың дәлдігі де жоғарырақ, өйткені үлкенірек көлемдер дозаланады. Тамшуырлардың техникалық деректерін тексеру кезінде мұны түсіну оңай: дозаланған көлем неғұрлым аз болса, ауытқулар соғұрлым жоғары болуы мүмкін. Барлық препараттардың бір ыдыстан шығуы біртектілікке (жақсы араласқан жағдайда) оң әсер етеді. Бұл тәжірибелердің қайталану мүмкіндігін де жақсартады.
Негізгі қоспаны дайындаған кезде, тіпті соңғы ыдыс дұрыс толтырылуы үшін кем дегенде 10 % қосымша көлем қосу керек (мысалы, 10 препарат қажет болса, 11 негізінде есептеңіз). Осылайша, (аздап) тамшуырлау дәлсіздіктері және құрамында жуғыш зат бар ерітінділерді мөлшерлеу кезінде сынама жоғалуының әсері өтелуі мүмкін. Жуғыш заттар полимераздар және негізгі қоспалар сияқты ферменттік ерітінділерде болады, олар көбік түзеді және қалыпты ішкі бетінде қалдықтарды тудырады.тамшуыр ұштары.
Қолдануға және төгілетін сұйықтық түріне байланысты дұрыс тамшуырлау техникасын (1) және сәйкес жабдықты таңдау керек. Құрамында жуғыш заттар бар ерітінділер үшін ауа жастықшалары бар тамшуырларға балама ретінде тікелей ығыстыру жүйесі немесе «төмен ұстау» деп аталатын тамшуыр ұштары ұсынылады. әсеріACE PIPETTE ұшыерекше гидрофобты бетке негізделген. Құрамында жуғыш заттар бар сұйықтықтар ерітіндінің жоғалуын барынша азайту үшін ішкі және сыртқы жағында қалдық пленка қалдырмайды.
Барлық компоненттердің нақты дозалануынан басқа, препараттардың ластанбауы да маңызды. Тазалығы жоғары шығын материалдарын пайдалану жеткіліксіз, өйткені ауа жастықшасы тамшуырындағы тамшуырлау процесі тамшуырда қалатын аэрозольдерді шығаруы мүмкін. Аэрозольде болуы мүмкін ДНҚ келесі тамшуырлау қадамында бір үлгіден екіншісіне тасымалдануы мүмкін және осылайша ластануға әкелуі мүмкін. Жоғарыда аталған тікелей ауыстыру жүйелері де бұл тәуекелді азайтуы мүмкін. Ауа жастықшасы бар тамшуырлар үшін тамшуыр конусын шашырауды, аэрозольдарды және биомолекулаларды ұстап тұру арқылы қорғау үшін сүзгі ұштарын пайдалану мағынасы бар.
Жіберу уақыты: 06 желтоқсан 2022 ж