Криовиалдарәдетте сұйық азотпен толтырылған дюарларда жасуша желілерін және басқа да маңызды биологиялық материалдарды криогенді сақтау үшін қолданылады.

Сұйық азотта жасушалардың сәтті сақталуының бірнеше кезеңдері бар. Негізгі принцип баяу мұздату болғанымен, нақты қолданылатын әдіс жасуша түріне және қолданылатын криопротекторға байланысты. Осындай төмен температурада ұяшықтарды сақтау кезінде ескерілетін бірнеше қауіпсіздік ережелері мен ең жақсы тәжірибелер бар.

Бұл пост сұйық азотта криовиалдардың қалай сақталатынына шолу жасауға бағытталған.

Криовиалдар дегеніміз не

Криовиалдар - өте төмен температурада сұйық үлгілерді сақтауға арналған шағын, қақпағы бар құтылар. Олар криопротекторда сақталған жасушалардың сұйық азотпен тікелей байланыста болмауын қамтамасыз етеді, бұл жасушаның сыну қаупін азайтады, сонымен бірге сұйық азоттың экстремалды салқындатқыш әсерінен пайда көреді.

Құтылар әдетте әртүрлі көлемде және дизайнда болады - олар тегіс немесе дөңгелек түбі бар ішкі немесе сыртқы бұрандалы болуы мүмкін. Стерильді және стерильді емес пішімдері де бар.

Кім пайдаланадыCyrovialsЖасушаларды сұйық азотта сақтау

Бірқатар NHS және жеке зертханалар, сондай-ақ сым қанының банкингіне, эпителий жасушаларының биологиясына, иммунологиясына және дің жасушаларының биологиясына маманданған ғылыми мекемелер жасушаларды криоконсервациялау үшін криовиалдарды пайдаланады.

Осылайша сақталған жасушаларға В және Т жасушалары, CHO жасушалары, гемопоэтикалық дің және тегі жасушалары, гибридомалар, ішек жасушалары, макрофагтар, мезенхималық бағаналы және тектік жасушалар, моноциттер, миелома, NK жасушалары және плюрипотентті дің жасушалары жатады.

Сұйық азотта криовиалдарды қалай сақтауға болатынына шолу

Криоконсервация - бұл жасушаларды және басқа биологиялық құрылымдарды өте төмен температураға дейін салқындату арқылы сақтайтын процесс. Жасушалар жасуша өміршеңдігін жоғалтпай сұйық азотта жылдар бойы сақталуы мүмкін. Бұл қолданылатын процедуралардың қысқаша сипаттамасы.

Жасушаны дайындау

Үлгілерді дайындаудың нақты әдісі жасуша түріне байланысты өзгереді, бірақ тұтастай алғанда жасушалар жиналады және жасушаға бай түйіршіктер жасау үшін центрифугаланады. Содан кейін бұл түйіршік криопротектормен немесе криоконсервациялау ортасымен араласқан үстіңгі қабатта қайта суспензияланады.

Криоконсервациялау ортасы

Бұл орта жасушаішілік және жасушадан тыс кристалдардың түзілуін, демек, жасуша өлімін тежеу ​​арқылы олар ұшырайтын төмен температуралы ортада жасушаларды сақтау үшін қолданылады. Олардың рөлі мұздату, сақтау және еріту процестері кезінде жасушалар мен ұлпалар үшін қауіпсіз, қорғаныс ортасын қамтамасыз ету болып табылады.

Жаңа мұздатылған плазма (FFP), гепариндерленген плазмалит ерітіндісі немесе сарысусыз, жануар компоненттері жоқ ерітінділер сияқты орта диметил сульфоксиді (DMSO) немесе глицерин сияқты криопротекторлармен араласады.

Қайта сұйылтылған үлгі түйіршіктері полипропиленді криовиалдарға бөлінеді, мысалыSuzhou Ace биомедициналық компаниясы Cryogenic Storage Flakon.

Криовиалдарды шамадан тыс толтырмау маңызды, себебі бұл крекинг қаупін арттырады және мазмұнның шығуы мүмкін (1).

Бақыланатын мұздату жылдамдығы

Жалпы, жасушаларды сәтті криоконсервациялау үшін баяу басқарылатын мұздату жылдамдығы қолданылады.

Үлгілер криогенді флакондарға бөлінгеннен кейін олар дымқыл мұзға немесе 4℃ тоңазытқышқа орналастырылады және мұздату процедурасы 5 минут ішінде басталады. Жалпы нұсқаулық ретінде ұяшықтар минутына -1-ден -3-ке дейінгі жылдамдықпен салқындатылады (2). Бұған бағдарламаланатын салқындатқышты қолдану немесе құтыларды –70°C және –90°C жылдамдығымен басқарылатын мұздатқышқа орналастырылған оқшауланған қорапқа салу арқылы қол жеткізіледі.

Сұйық азотқа көшіру

Мұздатылған криогендік құтылар -135℃ төмен температура сақталған жағдайда белгісіз мерзімге сұйық азот резервуарына ауыстырылады.

Бұл өте төмен температураларды сұйық немесе бу фазасындағы азотқа батыру арқылы алуға болады.

Сұйық немесе бу фазасы?

Сұйық фазадағы азотта сақтау суық температураны абсолютті консистенцияда сақтайтыны белгілі, бірақ көбінесе келесі себептерге байланысты ұсынылмайды:

• Ықтимал қауіп болып табылатын сұйық азоттың үлкен көлеміне (тереңдігіне) қажеттілік. Осыған байланысты күйік немесе тұншығу - бұл нақты қауіп.
• Aspergillus, геп В және сұйық азот ортасы арқылы вирустық таралу сияқты жұқпалы агенттермен айқаспалы контаминацияның құжатталған жағдайлары (2,3)
• Суға батыру кезінде флакондарға сұйық азоттың ағу мүмкіндігі. Сақтаудан шығарып, бөлме температурасына дейін жылытқанда азот тез кеңейеді. Демек, құты сұйық азот қоймасынан шығарылған кезде сынуы мүмкін, бұл ұшатын қоқыстардан да, ішіндегісіне әсер етуден де қауіп тудыруы мүмкін (1, 4).

Осы себептерге байланысты өте төмен температурада сақтау көбінесе бу фазасындағы азотта болады. Үлгілерді сұйық фазада сақтау қажет болғанда, арнайы криофлексті түтіктерді пайдалану керек.

Бу фазасының кемшілігі -135℃ және -190℃ аралығындағы температура ауытқуларына әкелетін тік температура градиентінің пайда болуы. Бұл сұйық азот деңгейін және температура ауытқуларын мұқият және мұқият бақылауды қажет етеді (5).

Көптеген өндірушілер криовиалдарды -135℃ дейін сақтауға немесе тек бу фазасында пайдалануға жарамды деп кеңес береді.

Криоконсервіленген жасушаларды жібіту

Еріту процедурасы мұздатылған мәдениет үшін стресс болып табылады және жасушалардың оңтайлы өміршеңдігін, қалпына келуін және функционалдығын қамтамасыз ету үшін дұрыс өңдеу мен техника қажет. Нақты еріту хаттамалары нақты ұяшық түрлеріне байланысты болады. Дегенмен, жылдам еріту стандартты болып саналады:

• Жасушаның қалпына келуіне әсер етуді азайтыңыз
• Мұздату ортасындағы еріген заттардың әсер ету уақытын азайтуға көмектесіңіз
• Мұздың қайта кристалдануы арқылы кез келген зақымдануды азайтыңыз

Үлгілерді еріту үшін әдетте су ванналары, моншақ ванналары немесе мамандандырылған автоматтандырылған аспаптар қолданылады.

Көбінесе 1 жасуша сызығы алдын ала жылытылған өсу ортасында жуылмас бұрын құтыда аз ғана мұз қалғанша 37℃ су моншасында ақырын айналдыру арқылы 1-2 минут бойы ерітіледі.

Сүтқоректілердің эмбриондары сияқты кейбір жасушалар үшін олардың өмір сүруі үшін баяу жылыну өте маңызды.

Жасушалар енді жасуша культурасына, жасушаны оқшаулауға немесе гемопоэтикалық дің жасушалары жағдайында – миелоаблятивтік терапия алдында донорлық дің жасушаларының тұтастығына кепілдік беру үшін өміршеңдігін зерттеуге дайын.

Культураға төсеу үшін жасуша концентрациясын анықтау үшін жасушаларды санау үшін пайдаланылатын алдын ала жуылған үлгінің шағын аликвоттарын алу қалыпты тәжірибе болып табылады. Содан кейін жасушаны оқшаулау процедураларының нәтижелерін бағалауға және жасушаның өміршеңдігін анықтауға болады.

Криовиалдарды сақтаудың ең жақсы тәжірибелері

Криовиалдарда сақталған үлгілерді сәтті криоконсервациялау хаттаманың көптеген элементтеріне, соның ішінде дұрыс сақтау мен жазбаларды жүргізуге байланысты.

• Ұяшықтарды сақтау орындары арасында бөлу– Көлемдер рұқсат етсе, жабдықтың істен шығуына байланысты үлгінің жоғалу қаупін азайту үшін ұяшықтарды құтыларға бөліп, оларды бөлек орындарда сақтаңыз.
• Айқас ластануды болдырмау– Кейін пайдалану алдында бір рет қолданылатын стерильді криогенді құтыларды немесе автоклавты таңдаңыз
• Жасушаларыңыз үшін сәйкес өлшемді флакондарды пайдаланыңыз– құтылар 1-ден 5 мл-ге дейінгі көлемдегі ауқымда келеді. Жарылу қаупін азайту үшін құтыларды шамадан тыс толтырудан аулақ болыңыз.
• Ішкі немесе сыртқы бұрандалы криогенді құтыларды таңдаңыз– Ішкі бұрандалы құтыларды кейбір университеттер қауіпсіздік шаралары үшін ұсынады – олар сондай-ақ толтыру кезінде немесе сұйық азотта сақтау кезінде ластануды болдырмайды.
• Ағып кетудің алдын алу- Ағып кету мен ластануды болдырмау үшін бұрандалы қақпаққа немесе сақиналарға құйылған қос инъекциялы тығыздағыштарды пайдаланыңыз.
• 2D штрих-кодтарды және флакондарды жапсырманы пайдаланыңыз– қадағалануды қамтамасыз ету үшін үлкен жазу алаңдары бар құтылар әрбір құтыны тиісті түрде таңбалауға мүмкіндік береді. 2D штрих-кодтары сақтауды басқаруға және жазбаларды жүргізуге көмектеседі. Түспен кодталған қалпақшалар сәйкестендіруді жеңілдету үшін пайдалы.
• Сақтауға тиісті техникалық қызмет көрсету- Жасушалардың жоғалып кетпеуін қамтамасыз ету үшін сақтау ыдыстары температура мен сұйық азот деңгейін үнемі бақылауы керек. Пайдаланушыларды қателер туралы ескерту үшін дабылдар орнатылуы керек.

Қауіпсіздік шаралары

Сұйық азот заманауи зерттеулерде кең таралған тәжірибеге айналды, бірақ дұрыс пайдаланбаған жағдайда ауыр жарақат алу қаупі бар.

Сұйық азотпен жұмыс істегенде үсік шалу, күйік және басқа да жағымсыз оқиғалар қаупін азайту үшін тиісті жеке қорғаныс құралдарын (ЖҚҚ) кию керек. Кию

• Криогенді қолғаптар
• Зертханалық пальто
• Мойынды да жабатын соққыға төзімді толық бет қалқаны
• Аяғы жабық аяқ киім
• Шашырауға төзімді пластикалық алжапқыш

Тұншығу қаупін азайту үшін сұйық азотты тоңазытқыштарды жақсы желдетілетін жерлерге қою керек – сыртқа шығарылған азот атмосфералық оттегін булайды және ығыстырады. Үлкен көлемді дүкендерде оттегі аз дабыл жүйелері болуы керек.

Сұйық азотпен жұмыс істегенде жұппен жұмыс істеу өте қолайлы және оны қалыпты жұмыс уақытынан тыс пайдалануға тыйым салу керек.

Жұмыс процесін қолдау үшін Cryovials

Suzhou Ace Biomedical компаниясы жасушалардың әртүрлі түрлеріне арналған криоконсервация қажеттіліктерін қанағаттандыратын өнімдердің кең таңдауын ұсынады. Портфолио бірқатар түтіктер мен стерильді криовиалдарды қамтиды.

Біздің криовиалдар:

• Зертханалық бұрандалы қақпақ 0,5 мл 1,5 мл 2,0 мл криовиалды криогенді құтылар, тығыздағыштары бар конустық астыңғы криотруба

  ● 0,5 мл, 1,5 мл, 2,0 мл спецификация, юбкамен немесе юбкасыз
  ● Конустық немесе өздігінен тұратын дизайн, стерильді немесе стерильді емес
  ● Бұрандалы қақпақ түтіктері медициналық стандартты полипропиленнен жасалған
  ● PP Cryotube құтыларын қайта-қайта мұздатуға және ерітуге болады
  ●Сыртқы қақпақ дизайны үлгіні өңдеу кезінде ластану ықтималдығын азайтады.
  ● Бұрандалы қақпақ криогендік түтіктер Пайдалануға арналған әмбебап бұрандалы жіптер
  ● Түтіктер ең көп таралған роторларға сәйкес келеді
  ● Криогенді түтіктің тығыздағыш сақиналы түтіктері стандартты 1 дюймдік және 2 дюймдік, 48 және 81 шұңқырлы, 96 және 100 шұңқырлы мұздатқыш қораптарына сәйкес келеді.
  ● 121°C дейін автоклавтауға және -86°C дейін мұздатуға болады

  БӨЛІМ №	МАТЕРИАЛ	DOLUM	CAPТҮС	PCS/Сөмке	Сөмкелер/қорап
  ACT05-BL-N	PP	0,5 мл	Қара, сары, көк, қызыл, күлгін, ақ	500	10
  ACT15-BL-N	PP	1,5 мл	Қара, сары, көк, қызыл, күлгін, ақ	500	10
  ACT15-BL-NW	PP	1,5 мл	Қара, сары, көк, қызыл, күлгін, ақ	500	10
  ACT20-BL-N	PP	2,0 мл	Қара, сары, көк, қызыл, күлгін, ақ	500	10