Процестерді стандарттау оларды оңтайландыруды және пайдаланушыдан тәуелсіз ұзақ мерзімді оңтайлы өнімділікке мүмкіндік беретін кейіннен орнатуды және үйлестіруді қамтиды. Стандарттау жоғары сапалы нәтижелерді, сондай-ақ олардың қайталануы мен салыстырмалылығын қамтамасыз етеді.
(Классикалық) ПТР мақсаты сенімді және қайталанатын нәтижені қалыптастыру болып табылады. Белгілі бір қолданбалар үшін кірістілікПТР өніміда өзекті. Бұл реакциялар үшін үлгілердің бұзылмауын және ПТР жұмыс үрдісінің тұрақты болуын қамтамасыз ету қажет. Атап айтқанда, бұл жалған оң немесе жалған теріс нәтижелерге әкелуі мүмкін немесе тіпті ПТР реакциясын тежейтін ластануларды енгізуді азайтуды білдіреді. Сонымен қатар, реакция жағдайлары жұмыс барысындағы әрбір жеке үлгі үшін мүмкіндігінше бірдей болуы керек, сонымен қатар келесі реакцияларға (сол әдіспен) ауысуы керек. Бұл реакциялардың құрамына, сондай-ақ циклдегі температураны реттеу түріне қатысты. Пайдаланушы қателерінен, әрине, мүмкіндігінше аулақ болу керек.
Төменде біз ПТР дайындау кезінде және бүкіл орындау барысында кездесетін қиындықтарды және ПТР жұмыс үрдістерін стандарттау үшін қолданылатын құралдар мен шығыс материалдарына қатысты шешімдерге тәсілдерді көрсетеміз.
Реакцияны дайындау
Реакция компоненттерін ПТР ыдыстарына немесе пластинкаларға жіберу, сәйкесінше, еңсерілуі керек көптеген қиындықтарды қамтиды:
Реакция шарттары
Мүмкін болатын ең бірдей реакция жағдайларына ұмтылған кезде жекелеген компоненттердің дәл және дәл дозалануы өте қажет. Жақсы тамшуырлау техникасынан басқа, дұрыс құралды таңдау өте маңызды. ПТР мастер-микстерінің құрамында тұтқырлықты арттыратын немесе көбік түзетін заттар жиі болады. Тамшуырлау процесі кезінде олар судың айтарлықтай сулануына әкеледітамшуыр ұштары, осылайша тамшуырлау дәлдігін төмендетеді. Тікелей тарату жүйелерін немесе сулануға бейім баламалы тамшуыр ұштарын пайдалану тамызу процесінің дәлдігі мен дәлдігін жақсартуы мүмкін.
Ластанулар
Ағызу процесі кезінде тамшуырдың ішіне жетуге рұқсат етілсе, келесі тамшуырлау қадамында басқа үлгіні ластауы мүмкін аэрозольдар түзіледі. Бұны сүзгі ұштарын немесе тікелей ауыстыру жүйелерін пайдалану арқылы болдырмауға болады.
сияқты шығын материалдарыкеңестер, ПТР жұмыс процесінде пайдаланылатын ыдыстар мен пластиналар үлгіні бұзатын немесе нәтижені бұрмалайтын заттар болмауы керек. Оларға ДНҚ, ДНаз, РНаз және ПТР ингибиторлары, сондай-ақ реакция кезінде материалдан әлеуетті сілтіленуі мүмкін компоненттер – шайма заттар деп аталатын заттар жатады.
Пайдаланушы қатесі
Үлгілер неғұрлым көп өңделсе, қате қаупі соғұрлым жоғары болады. Үлгіні дұрыс емес ыдысқа немесе дұрыс емес ұңғымаға тамызу оңай болуы мүмкін. Бұл тәуекелді ұңғымаларды оңай анықталатын таңбалау арқылы айтарлықтай азайтуға болады. Шығару қадамдарын автоматтандыру арқылы «адам факторы», яғни қателер мен пайдаланушыға қатысты ауытқулар барынша азайтылады, осылайша, әсіресе реакция көлемі аз болған жағдайда қайталану мүмкіндігі артады. Бұл жұмыс орнында пайдалану үшін жеткілікті өлшемді тұрақтылықтағы тақталарды қажет етеді. Тіркелген штрих-кодтар бүкіл процесс барысында үлгіні бақылауды жеңілдететін қосымша машина оқу мүмкіндігін қамтамасыз етеді.
Термоциклді бағдарламалау
Құралды бағдарламалау уақытты қажет ететін және қателіктерге бейім болуы мүмкін. ПТР термиялық циклінің әртүрлі мүмкіндіктері осы процесс қадамын жеңілдету және ең бастысы оны қауіпсіз ету үшін бірге жұмыс істейді:
Оңай жұмыс және жақсы пайдаланушы нұсқаулығы тиімді бағдарламалаудың негізі болып табылады. Осы негізге сүйене отырып, құпия сөзбен қорғалған пайдаланушы әкімшілігі өз бағдарламаларын басқа пайдаланушылар өзгертуіне жол бермейді. Бірнеше циклдер (бір типті) қолданыста болса, бағдарламаны USB немесе қосылым арқылы бір құралдан екіншісіне тікелей тасымалдауға болатын болса, тиімді болады. Компьютерлік бағдарламалық қамтамасыз ету компьютердегі бағдарламаларды, пайдаланушы құқықтары мен құжаттарды орталық және қауіпсіз басқаруға мүмкіндік береді.
ПТР жүргізу
Жүгіру кезінде ДНҚ реакциялық ыдыста күшейтіледі, мұнда әрбір үлгі бірдей, дәйекті реакция жағдайларына ұшырауы керек. Процесс үшін келесі аспектілер маңызды:
Температураны бақылау
Температураны бақылаудағы тамаша дәлдік және циклдер блогының біртектілігі барлық үлгілерді біркелкі температуралық кондициялаудың негізі болып табылады. Қыздыру және салқындату элементтерінің (пельтиер элементтерінің) жоғары сапасы, сондай-ақ олардың блокқа қосылу тәсілі «жиек әсері» деп аталатын температуралық сәйкессіздіктердің қаупін анықтайтын шешуші факторлар болып табылады.
Булану
Реакцияның жекелеген компоненттерінің концентрациясы булануға байланысты реакция барысында өзгермеуі керек. Әйтпесе, бұл өте аз болуы мүмкінПТР өніміжасалуы мүмкін немесе мүлде болмауы мүмкін. Сондықтан қауіпсіз тығыздағышты қамтамасыз ету арқылы булануды азайту өте маңызды. Бұл жағдайда термоциклдің қыздырылған қақпағы мен ыдыстың пломбасы бір-бірімен бірге жұмыс істейді. Әр түрлі тығыздау опциялары үшін қол жетімдіПТР пластиналары (сілтеме: тығыздағыш мақала), бұл арқылы ең жақсы тығыздау жылумен тығыздау арқылы қол жеткізіледі. Цикл қақпағының контакт қысымын таңдалған тығыздағышқа реттеуге болатын болса, басқа жабулар да қолайлы болуы мүмкін.
Ұзақ мерзімді перспективада дәл және қайталанатын нәтижелерді сақтау үшін процесті стандарттау бар. Бұл жабдықтың әрқашан жақсы жұмыс күйінде болуын қамтамасыз ету үшін оған үнемі техникалық қызмет көрсетуді қамтиды. Барлық шығыс материалдары өндірілген барлық лоттарда тұрақты жоғары сапа болуы керек және олардың сенімді қолжетімділігіне кепілдік беру керек.
Жіберу уақыты: 29 қараша 2022 ж